Využití lymfocytárních mitochondrií pro detekci a prospektivní analýzu mitochondriálních chorob - Houštěk, Josef (2016)
Adaptovat a optimalizovat moderní biochemické a funkční metody pro analýzu mitochondriálního energetického metabolizmu v krevních lymfocytech: (i) Pro analýzy energetické funkce mitochondrií využít vysoce citlivou oxygrafii izolovaných a permeabilizovaných lymfocytů, luciferázové měření tvorby ATP, spektrofotometrické měření enzymových aktivit, měření energizace mitochondriální membrány pomocí cytofluorometrické sondy TMRM a TPP+ elektrody. (ii) Pro proteinové analýzy využít BN-PAGE, SDS-PAGE a jejich kombinace a western blot detekci specifickými protilátkami proti strukturním podjednotkám respiračních komplexů. Pro analýzu ROS využit sondy AMPLEX UltraRed a DCFDA. (iii) Pro analýzu změn exprese vybraných genů využít RT-PCR Tento metodický přístup aplikovat při diagnostice mitochondriálních onemocnění na podkladě neznámých genetických defektů a při sledování vývoje mitochondriálních onemocnění a vlivu terapie.
Závěrečná zpráva o řešení grantu Interní grantové agentury MZ ČR
Keywords: Oxidative Phosphorylation; Biopsy; genom; Mutation; mitochondriální DNA; biopsie; DNA, Mitochondrial; genetika, lékařská genetika; Chemistry, Clinical; Organelle Biogenesis; Genome; vrozené poruchy metabolismu; Metabolism, Inborn Errors; klinická chemie; oxidativní fosforylace; biogeneze organel; Mitochondrial Diseases; fyziologie; vnitřní lékařství; dítě; pediatrie; Child; mutace; fibroblasty; Fibroblasts; mitochondriální nemoci