Mitochondriální onemocnění jsou vyvolané nedostatečnou funkcí energetického aparátu a patří k závažným dědičným poruchám metabolismu. Řada kauzálních mutací již byla identifikována díky rozvoji exomového sekvenování, ale stále se nedaří nalézt genetickou příčinu u téměř 40% případů. Kvalitní neinvazivní biochemická charakterizace pacientů s podezdřením na mitochondriální onemocnění zásadní pro úspěšnou interpretaci exomových dat. Cílem projektu je využití krevních elementů jako materiálu pro standardizovanou a reprodukovatelnou biochemickou charakterizaci pacientů. Bude optimalizována metodika kryoprezervace krevních elementů kompatibilní s následnou analýzou mitochondriálních funkcí. Ty budou poté analyzovány pomocí vysoce citlivé respirometrie u permeabilizovaných buněk a analýzou preferovaných metabolických drah u buněk intaktních. U pacientů s biochemicky potvrzeným nálezem bude provedeno exomové sekvenování pro určení genetické příčiny a nově nalezené varianty budou dále funkčně validovány.; Mitochondrial diseases are caused by insufficient function of energy provision apparatus and they belong among the most severe inborn errors of metabolism. Whole exome sequencing helped to characterise many causal mutations, but as of yet, almost 40% of cases remain without defined genetic cause. Thorough non-invasive biochemical characterisation remains the centrepiece for successful interpretation of identified genetic variants. Aim of the project is to develop and optimise cryopreservation technique for blood elements, which will be compatible with subsequent functional analyses of mitochondrial function. Subsequently, they will be analysed through high resolution respirometry in permeabilised cells and by the analysis of preferred metabolic pathways in intact cells. In patients with biochemically verified mitochondrial dysfunction, causal genetic variant will be identified by exome sequencing and newly characterised variants will be functionally validated.

New approaches to non-invasive diagnostics of mitochondrial diseases

Doba řešení: 2019-2022

Obsahuje literaturu