Detekce DNA Borrelia burgdorferi sensu lato pomocí real-time PCR - Bolehovská, Radka; Plíšková, Lenka; Plíšek, Stanislav; Honegr, Karel; Palička, Vladimír; Čermáková, Zuzana (Klinická biochemie a metabolismus, 2009)
Cíl práce: 1. zavedení, optimalizace a validace polymerázové řetězové reakce v realném čase pro detekci DNA borélií včetně kontroly přítomnosti inhibitorů DNA polymerázy; 2. shrnutí dosavadních výsledků získaných pomocí zavedené metody. Materiál a metody: Izolace DNA byla prováděna pomocí komerčního kitu MagNA Pure Isolatin Kit III (Bacteria, Fungi) na automatickém izolačním přístroji MagNA Pure LC fi rmy Roche. Metoda byla koncipována jako multiplex real-time PCR s amplifi kací DNA borélií a koamplifi kací inhibiční kontroly v jedné zkumavce. Výsledky: Zavedená metoda byla plně optimalizována, validována a následně použita pro vyšetření 1822 materiálů, z toho 1151 likvorů, 609 krví a 62 jiných materiálů. Pouze 17 vzorků bylo pozitivních a 4 vzorky vykazovaly přítomnost inhibitorů DNA polymerázy. Závěr: Námi zavedená a validovaná metoda je velice rychlá, citlivá a specifi cká pro detekci DNA borélií. Přesto v diagnostice lymeské boreliózy není vždy stoprocentně spolehlivá a klinická korelace, stejně jako u jiných metod, není uspokojivá.
Keywords: lymeská nemoc; lidé; Specimen Handling; Borrelia burgdorferi; odběr biologického vzorku; Primed In Situ Labeling; in situ značení DNA s primerem; Sensitivity and Specificity; polymerázová řetězová reakce; Lyme Disease; Polymerase Chain Reaction; senzitivita a specificita; Humans