Molekulárně biologická diagnostika mutací genu KRAS a BRAF u pacientů s kolorektálním karcinomem – zkušenosti laboratorního pracoviště - Robešová, Blanka; Bajerová, Michaela; Vašíková, Alžběta; Ostřížková, Lenka; Hausnerová, Jitka; Kyclová, Jitka; Pospíšilová, Šárka; Mayer, Jiří; Dvořáková, Dana (Klinická onkologie, 2013)
Východiska:Cílená biologická léčba založená na blokování receptorů růstových faktorů a inhibici signálních drah navozujících nádorové bujení je novou terapeutickou možností pro pacienty s kolorektálním karcinomem. Standardními přípravky této terapie jsou monoklonální protilátky zacílené na receptor epidermálního růstového faktoru (EGFR). Negativním prediktorem léčebné odpovědi jsou aberace v genech účastnících se signálních kaskád spouštěných EGFR. V současné době je podmínkou pro indikaci cílené anti-EGFR terapie průkaz nemutovaného genu KRAS, doporučena je i mutační analýza genu BRAF. Cílem práce bylo srovnat výsledky našeho pracoviště s publikovanými údaji a ověřit využitelnost standardních laboratorních metod ve srovnání s diagnostickými soupravami. Soubor pacientů a metody: Pro analýzu KRAS (kodon 12 a 13) a BRAF (kodon 600) u 132 pacientů byly použity standardní metody na principu PCR a přímé sekvenace a dvě diagnostické soupravy. Výsledky: Mutace KRAS byly prokázány u 45 pacientů (34 %), mutaci V600E genu BRAF neslo 9 pacientů (7 %). Přítomnost obou mutací u stejného pacienta nebyla detekována. U 33 pacientů byl dostupný jak primární tumor, tak metastatická tkáň. V 13 případech byla v tomto souboru zachycena mutace KRAS. U 9 pacientů byla detekovaná KRAS mutace v tumoru a v metastatické tkáni shodná, v jednom případě se typ mutace lišil. Ve 3 případech byla KRAS mutace zachycena pouze v jednom materiálu. Mutace BRAF byla u 4 pacientů detekována v obou materiálech. Nízký podíl nádorových buněk ve vzorku 17 pacientů neumožnil provést standardní mutační analýzu a vyšetření bylo provedeno diagnostickou soupravou s pozitivním nálezem u 6 pacientů. Závěr: Frekvence mutací KRAS a BRAF v analyzovaném souboru odpovídá publikovaným údajům, potvrdilo se, že vzhledem k heterogenitě nádoru je vhodné vyšetřovat i metastatickou tkáň, je-li dostupná. Mutační analýza KRAS vyžaduje komplexní metodický přístup s ohledem na sníženou kvalitu DNA a rozdílné zastoupení nádorových buněk ve vzorku. Z tohoto důvodu představují komerční diagnostické soupravy vhodný doplněk standardních postupů.
Keywords: geny erbB-1; Codon; DNA nádorová; sekvenční analýza DNA; Humans; ErbB Receptors; Mutation; cílená terapie; mutace; DNA Mutational Analysis; kodon; protoonkogenní proteiny B-raf; Genes, ras; nádorové biomarkery; monoklonální protilátky; Biomarkers, Tumor; erbB receptory; kolorektální nádory; Molecular Biology; Colorectal Neoplasms; individualizovaná medicína; geny ras; ras Proteins; ras proteiny; Antibodies, Monoclonal; DNA, Neoplasm; Precision Medicine; Sequence Analysis, DNA; molekulární biologie; lidé; mutační analýza DNA; Proto-Oncogene Proteins B-raf; Genes, erbB-1