Stanovení RHD genotypu plodu z plazmy periferní krve těhotné ženy a posouzení citlivosti nových diagnostických postupů pro zavedení do klinické praxe - Böhmová, Jana; Vodička, Radek; Ľubušký, Marek; Studničková, Martina; Holusková, Iva; Vrtěl, Radek; Kratochvílová, Romana; Frydrychová, Marcela; Krejčiříková, Eva; Filipová, Hana (Česká gynekologie, 2013)
Cíl studie: Vytvoření a zavedení metodického postupu pro neinvazivní stanovení RHD genotypu plodu z volné fetální DNA cirkulující v periferní krvi těhotné ženy do klinické praxe. Posouzení citlivosti inovované metodiky pomocí ředící řady a vnitřní kontroly amplifikace. Zjištění detekčního limitu minoritního zastoupení RHD+/- genotypu ve vzorku RHD-/-. Typ studie: Prospektivní kohortová a metodologická studie. Název a sídlo pracoviště: Fakultní nemocnice Olomouc: Ústav lékařské genetiky a fetální medicíny, Porodnicko-gynekologická klinika, transfuzní oddělení. Metodika: TaqMan real-time PCR bez vnitřní kontroly amplifikace. Stanovení prahu citlivosti a kalibrace RHD multiplexu TaqMan real-time PCR multiplexem s vnitřní kontrolou amplifikace a kapilární elektroforézou – minisekvenací (SNaPshot – multiplex) s vnitřní kontrolou amplifikace. Výsledky: RHD pozitivní nebo RHD negativní plod byl určen na základě amplifikačních křivek z real-time PCR systému, které odpovídají stanoveným parametrům pro hodnocení výstupních dat s využitím série kontrol amplifikace a kontaminace. Metody TaqMan real-time PCR systém a minisekvenace byly schopny detekovat 0,22% zastoupení RHD+/- ve vzorku RHD-/-. Minisekvenační systém je vhodný k rozlišení RHD pozitivních homozygotů a heterozygotů. Závěr: V současné době námi zavedený postup založený na detekci exonu 7 genu RHD a sérii paralelních kontrol kontaminace a amplifikace je využívaný v klinické praxi. Obě nově vypracované metody by měly být spolehlivější a po validaci na rozsáhlejším souboru mohou být zavedeny do klinické praxe.
Keywords: plod; nemoci plodu; Genotype; Female; Electrophoresis, Capillary; Rho(D) imunoglobulin; polymerázová řetězová reakce; Polymerase Chain Reaction; elektroforéza kapilární; ženské pohlaví; TaqMan real-time PCR; Fetal Diseases; prenatální diagnóza; minisequencing; volná fetální DNA; DNA; lidé; Fetus; Sensitivity and Specificity; genotyp; těhotenství; Prenatal Diagnosis; RHD genotypizace; minisekvenace; cell-free fetal DNA; senzitivita a specificita; kohortové studie; Cohort Studies; RHD genotyping; prospektivní studie; Gene Amplification; Prospective Studies; maternal plasma; Exons; SNaPshot – minisekvenace; RHD genotypizace – volná fetální DNA – maternální plazma – TaqMan real-time PCR – SNaPshot – minisekvenace; Sequence Analysis, DNA; Rho(D) Immune Globulin; exony; sekvenční analýza DNA; Pregnancy; amplifikace genu; kvantitativní polymerázová řetězová reakce; Real-Time Polymerase Chain Reaction; Humans