Vývoj vakcíny proti HIV-1 infekci je brzděn enormní variabilitou obalového glykoproteinu (Env), cíle neutralizačních protilátek. Identifikace sady monoklonálních protilátek neutralizujících široké spektrum variant HIV-1 (bn-mAb), reagujících s Env glykany, jako součástí jejich epitopu, nabízí novou cestu vývoje vakcíny. Jelikož kompozitní epitopy obsahující glykany jsou méně efektivní imunogeny než proteinové epitopy navrhujeme vyvinout sadu peptidů napodobujících epitopy rozlišované výše popsanými bn-mAb pomocí metody vysoce afinitních ligandů (binderů) vyvinutých spolunavrhovatelem projektu. Bindery budou selektovány na základě jejich specifické vazby na jednotlivé bn-mAb, budou fúzovány s albuminem a kotvami a ve formě proteoliposomů nebo DNA vakcín užity k imunizaci experimentálních zvířat. Poté bude charakterizována specificita, afinita a neutralizační aktivita sérových protilátek. Přístup skýtá možnost identifikovat kandidátní antigen pro vakcínu proti HIV-1 a představuje platformu pro vývoj vakcín napodobujících glykanové epitopy navozujících dobrou imunologickou paměť.; Development of vaccine preventing HIV-1 infection is hindered by high variability of envelope glycoprotein (Env), known target for neutralizing antibodies. Identification of several monoclonal antibodies neutralizing broad range of HIV-1 variants (bn-mAbs) recognizing Env glycans as a part of their epitopes provides the new opportunity for vaccine design. As the composite glycans-containing epitopes are less effective immunogens than protein epitopes, we propose to develop a set of peptides mimicking epitopes recognized by above bn-mAbs using high-affinity binders approach developed by the co-applicant. Binders will be selected based on specific interaction with respective bn-mAbs, fused to albumin, and used for immunization of animals in form of proteoliposomes or DNA vaccines. Sera will be characterized concerning to their specificity, affinity, and neutralization activity. This approach provides the possibility to identify the candidate antigen for future HIV-1 vaccine and provide a platform for development of glycan-mimicking vaccines eliciting good immunological memory.

• MeSH
• Epitopes therapeutic use   MeSH
• Animal Experimentation MeSH
• HIV Infections therapy   MeSH
• HIV Envelope Protein gp120 MeSH
• HIV-1 MeSH
• Immunization MeSH
• Anti-HIV Agents MeSH
• Ligands MeSH
• Antibodies, Neutralizing MeSH
• Recombinant Proteins therapeutic use   MeSH
• AIDS Vaccines MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• dermatovenerologie
• infekční lékařství
• alergologie a imunologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Projekt si klade za cíl: 1/ Ověřit a dále studovat efekty HA na replikaci a reaktivaci HIV-1 pozorované in vitro na tkáňových kulturách v primárních periferních lymfocytech (PBMC): a/ ověřit inhibiční efekt HA na akutní infekci PBMC zdravých dárců virem HIV-1. b/ studovat efekt HA na reaktivaci latentní infekce HIV-1 v PBMC HIV+ pacientů. 2/ Charakterizovat redoxní stav a metabolismus hemu u HIV+ pacientů, zejména hladiny GSH, nitrátů a hBVR, aktivitu HO-1 a známky anémie. Korelovat tyto charakteristiky s výší viremie ev. s progresí HIV/AIDS. 3/ Na podkladě získaných výsledků vypracovat žádost pro SÚKL o povolení aplikace Normosangu omezenému počtu vybraných HIV+ pacientů. Budou použity tyto metody: průtoková cytometrie - intracelulární hladiny p24 Ag, HO-1, produkce volných radikálů a GSH; ELISA - hladiny p24 Ag v supernatantu; western blot analýza jednotlivých proteinů; PCR a real-time RT-PCR - reversní transkripce a reaktivace HIV-1; spektrofoto(fluori)metrie - HO-1 aktivita, hladiny GSH, nitrátů.; Goals of the project: 1/ To verify and further study effects of HA on HIV-1 replication and reactivation observed in cell lines also in primary PBMC's: a/ To verify HA effect on acute infection of PBMC's of healthy donors with HIV-1 b/ To study HA effect on reactivation of HIV-1 latent infection in PBMC's of HIV+ patients 2/ To characterize redox state and heme metabolism in HIV+ patients, namely GSH, nitrate and hBVR levels , HO-1 activity and anemia. To correlate these characteristics with virus load (HIV RNA) and with progression of HIV/AIDS. 3/ Based on the results, to submit application to the State Institute of Drug Control for administration of Normosang to selected HIV+ patients. Methods: flow cytometry - intracellular levels of p24 Ag, HO-1, production of free radicals, GSH; ELISA - p24 Ag levels in supernatnats; western blotting of individual proteins; PCR and real-time RT-PCR - reverse transcription and reactivation of HIV-1; spectrophoto(fluori)metry - HO-1 activity, GSH and nitrate levels

• MeSH
• Acquired Immunodeficiency Syndrome MeSH
• Arginine MeSH
• Biliverdine MeSH
• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay MeSH
• Heme MeSH
• Heme Oxygenase-1 MeSH
• HIV Infections MeSH
• HIV-1 MeSH
• Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction MeSH
• Flow Cytometry MeSH
• Reverse Transcription MeSH
• Spectrophotometry MeSH
• Blotting, Western MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• biochemie
• infekční lékařství
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Budou studovány účinky subchronického neonatálního podávání HIV-1 proteinů (gp120, CA, NC, Gag) s cílem ověřit jejich patogenetický potencíál ve vztahu k histomorfologickým změnám a důsledkům pro chování potkanů. Jako paralela psychotického chování budeu vybraných virových komponent hodnocena úroveň prepulzni inhibice akustické reakce v porovnání s účinky kyseliny chinolinové u potkanů v rané a plné dospělosti. Histomorfologická analýza mozku cílená na zjišťování změn v mikroglii bude dále charakterizovat změny navozené neonatální stimulací strukturními HIV-1 proteiny a vymezí jejich úlohu v interakci s imunitní odpovědí organismu.; Effect of main HIV-1 proteins (glycoprotein 120-Gp120, Capsid protein-CA, Gag protein and nucleocapsid protein-NC) on brain development and possible interaction with neonatal brain will be studied. Prepulse inhibition of the acoustic startle reaction will be evaluated as marker of psychotic-like behaviour in relation to the administration of different viral stimulation. Late consequences induced either by neonatal treatment with gp120 or by viral components will be evaluated by brain histopathomorphology preferentially oriented to microglia dysfunction.

• MeSH
• HIV Infections physiopathology   MeSH
• HIV-1 MeSH
• Rats MeSH
• Microglia MeSH
• Brain anatomy & histology   MeSH
• ATP Binding Cassette Transporter, Subfamily B, Member 1 MeSH
• Schizophrenia etiology   MeSH
• Check Tag
• Rats MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• psychiatrie
• farmacie a farmakologie
• biochemie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

• MeSH
• HIV Infections MeSH
• HIV-1 MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• dermatovenerologie

Studium resistentních kmenů HIV v pacientech léčených inhibitory proteasy. Sekvenování, klonování a charakterisace rekombinantních mutantních proteas. Návrh specifických inhibitorů. Evoluce proteasy a dalších virových genů u HIV positivních pacientů.; Resistant HIV strains in patients treated by protease inhibitors. Sequencing, cloning and analysis of recombinant mutant proteases. Design of a broad specificity inhibitor. Co-evolution of protease and pther viral genes in HIV under selection pressure.

• MeSH
• DNA, Viral MeSH
• HIV Reverse Transcriptase MeSH
• HIV-1 genetics   MeSH
• Drug Resistance, Viral MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• dermatovenerologie
• biologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

• MeSH
• Antiviral Agents MeSH
• HIV-1 MeSH
• Retroviridae Proteins MeSH
• Retroviridae Infections MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• dermatovenerologie
• virologie
• NML Publication type
• www dokumenty