Projekt si klade za cíl: 1/ Ověřit a dále studovat efekty HA na replikaci a reaktivaci HIV-1 pozorované in vitro na tkáňových kulturách v primárních periferních lymfocytech (PBMC): a/ ověřit inhibiční efekt HA na akutní infekci PBMC zdravých dárců virem HIV-1. b/ studovat efekt HA na reaktivaci latentní infekce HIV-1 v PBMC HIV+ pacientů. 2/ Charakterizovat redoxní stav a metabolismus hemu u HIV+ pacientů, zejména hladiny GSH, nitrátů a hBVR, aktivitu HO-1 a známky anémie. Korelovat tyto charakteristiky s výší viremie ev. s progresí HIV/AIDS. 3/ Na podkladě získaných výsledků vypracovat žádost pro SÚKL o povolení aplikace Normosangu omezenému počtu vybraných HIV+ pacientů. Budou použity tyto metody: průtoková cytometrie - intracelulární hladiny p24 Ag, HO-1, produkce volných radikálů a GSH; ELISA - hladiny p24 Ag v supernatantu; western blot analýza jednotlivých proteinů; PCR a real-time RT-PCR - reversní transkripce a reaktivace HIV-1; spektrofoto(fluori)metrie - HO-1 aktivita, hladiny GSH, nitrátů.; Goals of the project: 1/ To verify and further study effects of HA on HIV-1 replication and reactivation observed in cell lines also in primary PBMC's: a/ To verify HA effect on acute infection of PBMC's of healthy donors with HIV-1 b/ To study HA effect on reactivation of HIV-1 latent infection in PBMC's of HIV+ patients 2/ To characterize redox state and heme metabolism in HIV+ patients, namely GSH, nitrate and hBVR levels , HO-1 activity and anemia. To correlate these characteristics with virus load (HIV RNA) and with progression of HIV/AIDS. 3/ Based on the results, to submit application to the State Institute of Drug Control for administration of Normosang to selected HIV+ patients. Methods: flow cytometry - intracellular levels of p24 Ag, HO-1, production of free radicals, GSH; ELISA - p24 Ag levels in supernatnats; western blotting of individual proteins; PCR and real-time RT-PCR - reverse transcription and reactivation of HIV-1; spectrophoto(fluori)metry - HO-1 activity, GSH and nitrate levels

• MeSH
• AIDS MeSH
• arginin MeSH
• biliverdin MeSH
• ELISA MeSH
• hem MeSH
• hemoxygenasa-1 MeSH
• HIV infekce MeSH
• HIV-1 MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• reverzní transkripce MeSH
• spektrofotometrie MeSH
• western blotting MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biochemie
• infekční lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR