Dědičná deficience ATP syntázy, klíčového enzymu buněčné energetiky, patří mezi nejzávažnější metabolická onemocnění. Její nejčastější příčinou jsou mutace v genu asemblačního faktoru TMEM70. Možnosti terapeutického ovlivnění mitochondriálních onemocnění jsou v současnosti velmi omezené, kausální léčba zcela chybí. TMEM70 defekty jsou vhodnými kandidáty pro hledání nových terapií, neboť TMEM70 není absolutně nezbytný pro biogenezi ATP syntázy a lze očekávat, že k plnému obnovení ATP produkce dojde již po částečném zvýšení množství nově tvořeného enzymu. Cílem projektu je (i) identifikovat farmakologické aktivátory ATP syntázy na modelu buněk s delecí TMEM70 genu a následně validovat kandidátní látky na unikátním souboru linií fibroblastů od pacientů s TMEM70 mutací pro ověření jejich možné terapeutické využitelnosti, dále (ii) testovat možnost genetické komplementace defektu ATP syntázy u potkanů s knockoutem TMEM70 genu pomocí transgenní overexprese TMEM70 pod nepřirozeným promotorem. Zaměříme se na studium odpovědi pomocí komplexní fenotypizace od enzymu po celý organismus.; Inborn deficiency of ATP synthase, the key enzyme of cellular energy provision, belongs to the most severe metabolic diseases. The prevailing cause of this disease are mutation in the gene for specific assembly factor TMEM70. Present therapy for mitochondrial diseases is rather limited and causal treatment is missing. However, TMEM70 defects represent promising target for establishing of new therapy as it is not absolutely essential for ATP synthase biogenesis and sufficient recovery of ATP production can be expected even after partial increase of ATP synthase content. Our aim is to (i) identify pharmacological activators of ATP synthesis on a model of TMEM70 knockout cells and subsequently test candidate compounds on our unique collection of patients’ fibroblasts cell lines harbouring mutations in TMEM70 as a proof of principle for their utility. (ii) We will test the possibility to complement TMEM70 knockout in rats by transgenic overexpression of TMEM70 and perform complex phenotyping study of enzyme to organismal responses to the TMEM70 expression under non-natural promotor.

• MeSH
• krysa rodu rattus MeSH
• lidé MeSH
• mitochondriální nemoci farmakoterapie   genetika   MeSH
• mitochondriální protonové ATPasy genetika   nedostatek   MeSH
• modely nemocí na zvířatech MeSH
• mutace genetika   MeSH
• vzácné nemoci genetika   terapie   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• krysa rodu rattus MeSH
• lidé MeSH
• zvířata MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• genetika, lékařská genetika
• farmacie a farmakologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Adaptovat a optimalizovat moderní biochemické a funkční metody pro analýzu mitochondriálního energetického metabolizmu v krevních lymfocytech: (i) Pro analýzy energetické funkce mitochondrií využít vysoce citlivou oxygrafii izolovaných a permeabilizovaných lymfocytů, luciferázové měření tvorby ATP, spektrofotometrické měření enzymových aktivit, měření energizace mitochondriální membrány pomocí cytofluorometrické sondy TMRM a TPP+ elektrody. (ii) Pro proteinové analýzy využít BN-PAGE, SDS-PAGE a jejich kombinace a western blot detekci specifickými protilátkami proti strukturním podjednotkám respiračních komplexů. Pro analýzu ROS využit sondy AMPLEX UltraRed a DCFDA. (iii) Pro analýzu změn exprese vybraných genů využít RT-PCR Tento metodický přístup aplikovat při diagnostice mitochondriálních onemocnění na podkladě neznámých genetických defektů a při sledování vývoje mitochondriálních onemocnění a vlivu terapie.; To adapt and optimize modern biochemical and functional methods for analysis of mitochondrial energetic metabolism in blood lymphocytes: (i) To use highly sensitive oxygraphy of permeabilized lymphocytes, luciferase analysis of ATP production, spectrophotometric analysis of enzyme activities, analysis of mitochondrial membrane potential by cytofluorometric probe TMRM and by TPP+ electrode for analysis of energetic function of mitochondria. (ii) To apply BN-PAGE, SDS-PAGE and their combinations together with western blot detection using specific antibodies to structural subunits of respiratory complexes for protein analysis of lymphocyte mitochondria. (iii) To use fluorescent probes AMPLEX UltraRed and DCFDA for ROS production analysis. (iv) To analyze expression of selected genes by RT-PCR. To apply this methodical approach in diagnostics of mitochondrial diseases caused by yet unknown genetic defects, and in monitoring the course of the disease and effect of therapy.

• MeSH
• biogeneze organel MeSH
• biopsie MeSH
• dítě MeSH
• fibroblasty MeSH
• genom MeSH
• klinická chemie MeSH
• mitochondriální DNA MeSH
• mitochondriální nemoci diagnóza   genetika   MeSH
• mutace MeSH
• oxidativní fosforylace MeSH
• vrozené poruchy metabolismu MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH

• Konspekt
• Fyziologie člověka a srovnávací fyziologie
• NLK Obory
• fyziologie
• pediatrie
• genetika, lékařská genetika
• vnitřní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

• MeSH
• elektrokardiografie MeSH
• funkční vyšetření srdce MeSH
• srdce MeSH
• srdeční elektrofyziologie MeSH
• Publikační typ
• monografie MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• kardiologie

• MeSH
• alergie MeSH
• autoimunita fyziologie   MeSH
• imunologická tolerance MeSH
• imunologické testy MeSH
• vystavení vlivu životního prostředí MeSH

• Konspekt
• Lékařské vědy. Lékařství
• NLK Obory
• alergologie a imunologie
• hygiena
• environmentální vědy
• NLK Publikační typ
• publikace WHO

• MeSH
• metabolismus MeSH

• Konspekt
• Fyziologie člověka a srovnávací fyziologie
• NLK Obory
• vnitřní lékařství

Diabetes melitus 2. typu (DM2T) je velice rozšířený syndrom s vzestupnou incidencí. Kromě toho, že postihuje stále větší část populace, jedná se i o prekancerogenní stav nádoru slinivky břišní, která je zcela neléčitelná. Nejvíce rozšířenou lěčbou DM2T je metformin, látka ze skupiny bisguanidů. Metformin je nyní také testován jako potenciální léčivo proti nádorům slinivky břišní. Ukazuje se, že jak protirakovinný, tak i anti-diabetický účinek metforminu je závislý na inhibici mitochondriálního respiračního komplexu I. Proto jsme metformin modifikovali specifickou reakcí tak, aby nová látka měla povahu delokalizovaného kationtu, a proto se hromadila v interfázi mezi vnitřní mitochondriální membránou a mitochondriální matrix. Tato látka má proti nádorům štítné žlázy a proti symptomům DM2T asi o tři řády vyšší účinek než parentální látka, metformin. Tento projekt se bude soustředit na pochopení molekulárního mechanismu účinku nové látky a testování na preklinických modelech obou chorob. Očekáváme velmi významné výsledky základního a hlavně aplikovaného, translačního výzkumu.; Type 2 diabetes mellitus (T2DM) is widespread and has increasing incidence. Besides affecting a growing portion of the population, it is considered a pre-cancerous state for pancreatic cancer, which cannot be treated at present. The most frequent drug against T2DM is the bisguanide compound metformin. This agent is now also tested as a potential drug against pancreatic cancer. It has been shown that both anti-cancer and anti-diabetic effects of metformin are dependent on the mitochondrial respiratory complex I. Therefore, we modified metformin using a specific approach to target it to the interface between mitochondrial matrix and inner membrane. The effect of this compound against pancreatic tumours and symptoms of T2DM is some 10e3 higher than that of the parental agent, metformin. This project will focus on understanding the molecular mechanism of the effect of the new compound and on its testing in pre-clinical models of both pathologies. We expect very important findings relevant to basic research and, in particular, linked to applied, translational research.

• MeSH
• diabetes mellitus 2. typu farmakoterapie   MeSH
• hypoglykemika terapeutické užití   MeSH
• lidé MeSH
• metformin MeSH
• mitochondrie účinky léků   MeSH
• nádory slinivky břišní farmakoterapie   MeSH
• protinádorové látky terapeutické užití   MeSH
• vyvíjení léků MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• diabetologie
• farmacie a farmakologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

• MeSH
• fyziologie MeSH
• nervový systém - fyziologické jevy MeSH
• reflex fyziologie   MeSH
• Publikační typ
• kongresy MeSH
• přednášky MeSH
• sborníky MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• neurologie
• neurovědy

• MeSH
• environmentální zdraví MeSH
• kojenecká mortalita trendy   MeSH
• látky znečišťující životní prostředí škodlivé účinky   MeSH
• pediatrie MeSH
• předpověď MeSH
• sociální péče o dítě MeSH
• Publikační typ
• atlasy MeSH

• Konspekt
• Veřejné zdraví a hygiena
• NLK Obory
• veřejné zdravotnictví
• sociologie
• pediatrie
• hygiena
• NLK Publikační typ
• publikace WHO

• MeSH
• energetický metabolismus MeSH
• ischemická choroba srdeční * MeSH
• mitochondriální DNA MeSH
• myokard * enzymologie   metabolismus   MeSH
• nemoci srdce MeSH
• srdeční mitochondrie * MeSH
• Publikační typ
• monografie MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• kardiologie

• MeSH
• biochemie MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biochemie
• NLK Publikační typ
• učebnice vysokých škol
• učebnice vysokých škol