Makrofágy představují stěžejní bod vzájemné interakce mezi patogenem a hostitelským organismem. Jsou nejen častou bránou vstupu invadujícího infekčního agens, zejména nitrobuněčných parazitů, ale zárověň i kompartmentem jejich pomnožení a další diseminace infekce. Francisella tularensis je modelovým nitrobuněčným patogenem způsobujícím granulomatózní procesy, jejichž klinická manifestace závisí na bráně vstupu. Osud F. tularensis uvnitř makrofágů a patogeneze vzniku onemocnění nejsou bezezbytku popsány. Našim cílem bylo vytvoření funkčního modelu infekce makrofágů myší monocyto-makrofágové linie J774.2 vakcinačním kmenem F. tularensis LVA za přesně definovaných podmínek jejich stimulace LPS a IFNy in vitro s ohledem na definici faktorů vzájemné interakce a přispění k popisu imunopatogeneze infekce. Infikované buňky byly amalyzovány mikroskopicky a průtokovou cytometrií, byla měřena produkce NO a vybraných cytokinů v supernatantu. Přežívání bakterie bylo hodnoceno pomocí CFU (Colony Forming Units). V pravidelných časových intervalech byly průtokovou cytometríí hodnoceny povrchové denzity molekul CD16/32 (FcyIII/IIR), CD54 (ICAM-1) a CD86 (B7.2) vyjádřené intenzitou fluorescence a hodnocené indexem MFI (Mean Fluorescence Index). Výsledky naší práce podporují hypotézu, že klíčovým faktorem imunopatogeneze infekce F. tularensis je inhibice stimulace infikované buňky. Vytvořený model aktivace makrofágů je univerzální a využitelný pro studium vlivu dalších nox na makrofágy, a to nejen infekčních.

Macrophages represent a key point of host-pathogen mutual interaction. They are not only a frequent gate for invading microbes especially intra- cellular parasites, but compartment of their replication as well. Francisella tularensis is a prototypical intracellular parasite causing granulomatous diseases. Their clinical significance is dependent on the course of invasion. The fate of F. tularensis inside the host cell, and the pathogenesis of the disease remain unclear. Our aim was to create a functional model of mouse monocyte-macrophage cell line J774.2 infected by F. tularensis LVS strain in defined conditions of lipopolysaccharide (LPS) and interferon gamma (IFNγ) in vitro stimulation with respect to mutual factors of interaction definition, to add new informations to current paradigma of F. tularensis infection. Infected cells were harvested and analysed by microscopy and by flow cytometry and likewise the NO and cytokines production was measured in cell supernatant. A survival of b acteria was assessed by colony forming units (CFU) count. The changes in the surface density of selected molecules (CD16/32 (FcγIII/IIR), C D54 (ICAM-1) and CD86 (B7.2)) expressed by changes in mean fluorescence index (MFI) in regular intervals were measured. Results of our work support the hypothesis, that F. tularensis infection can manipulate with signaling pathways of macr ophage to escape the immunosurveillance and to exploite intracellular compartment for hidden multiplic ation. Functional model of macrophages in vitro infection and stimulation seems to be universal and usefull tool for study of influence of various noxious factors on macrophages.

Ústav klinické imunologie a alergologie FN a LF Hradec Králové

Functional model of macrophage activation and infection in vitro

Funkční model aktivace a infekce makrofágů in vitro = Functional model of macrophage activation and infection in vitro : předneseno na XI. rožnovských alergo-imunologických dnech 2006 /

Functional model of macrophage activation and infection in vitro : předneseno na XI. rožnovských alergo-imunologických dnech 2006

Lit. 21