The use of TALENs for nonhomologous end joining mutagenesis in silkworm and fruitfly
Jazyk angličtina Země Spojené státy americké Médium print-electronic
Typ dokumentu časopisecké články, práce podpořená grantem
PubMed
24565747
DOI
10.1016/j.ymeth.2014.02.014
PII: S1046-2023(14)00044-9
Knihovny.cz E-zdroje
- Klíčová slova
- Bombyx mori, Drosophila melanogaster, Engineered nucleases, Genotyping, Golden Gate assembly, pBlue-TAL,
- MeSH
- bourec genetika MeSH
- deoxyribonukleasy genetika MeSH
- Drosophila melanogaster genetika MeSH
- dvouřetězcové zlomy DNA MeSH
- mikroinjekce přístrojové vybavení MeSH
- molekulární sekvence - údaje MeSH
- mutageneze cílená metody MeSH
- oprava DNA spojením konců * MeSH
- sekvence nukleotidů MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- Názvy látek
- deoxyribonukleasy MeSH
Transcription activator-like effector nucleases (TALENs) are custom-made enzymes designed to cut double-stranded DNA at desired locations. The DNA breaks are repaired either by error-prone non-homologous end-joining (NHEJ) pathway or via homologous recombination requiring homologous DNA as a template for the repair. TALENs are used for site-specific mutagenesis in an extended range of organisms including insects. We will describe here a simple TALEN-based mutagenesis protocol suitable for the generation of germline mutations in Bombyx mori and Drosophila melanogaster. The protocol includes assembly of specific TAL modules, in vitro synthesis of TALEN RNAs, egg microinjection and mutation detection using PCR analysis. Our procedure allows a high frequency induction of NHEJ mutations, which often allows the reception of homozygous mutants already in the G1.
Biology Centre of the ASCR Branisovska 31 370 05 Ceske Budejovice Czech Republic
National Institute of Agrobiological Sciences 1 2 Owashi Tsukuba Ibaraki 305 8634 Japan
Citace poskytuje Crossref.org
