Východiska: Pankreatické cystické léze jsou poměrně častým nálezem a jejich počet neustále roste, což souvisí také s rozmachem zobrazovacích metod. Až 15 % karcinomů pankreatu vzniká z mucinózních cystických tumorů pankreatu, především z intraduktální papilární mucinózní neoplazie (IPMN). Jehlová konfokální laserová endomikroskopie (nCLE) představuje pokročilou diagnostickou metodu, která má potenciál zvýšit přesnost diagnostiky ložiskového postižení slinivky břišní. Cíl: Cílem práce je poskytnout recentní přehled postavení nCLE v diagnostice cystických lézí pankreatu a ně kte rých vlastních zkušeností. Metoda nCLE je založena na tzv. optické biopsii v reálném čase, což přináší lepší diagnostické výsledky ve srovnání s tradičními postupy, jako jsou CT, MR/MRCP a EUS, což potvrzují i vlastní data autorů. Přestože nCLE nabízí určité výhody, její širší využití v klinické praxi je omezováno vysokými náklady na vybavení, technickými obtížemi při vyšetření a nutností důkladného tréninku endoskopistů. Integrace všech diagnostických postupů (EUS, cytologie, nCLE a next-generation sekvenování) do algoritmů umělé inteligence by mohla minimalizovat nevýhody jednotlivých metod a zvýšit celkovou efektivitu diagnostiky cystických lézí pankreatu. Závěr: nCLE představuje inovativní metodu diagnostiky cystických lézí pankreatu, která v kombinaci s dalšími postupy (biopsie mikrokleštěmi, sekvenování nové generace, hodnocení nálezů nCLE a celkového rizika malignity pomocí umělé inteligence) může dále zvyšovat svou diagnostickou přesnost v této indikaci.
Background: Pancreatic cystic lesions are relatively common findings, and their prevalence continues to rise, which is also related to the expansion of imaging methods. Up to 15% of pancreatic cancers arise from mucinous cystic tumours of the pancreas, primarily from intraductal papillary mucinous neoplasia (IPMN). Needle-based confocal laser endomicroscopy (nCLE) represents an advanced diagnostic method with the potential to improve the accuracy of diagnosing focal pancreatic lesions. Aim: The aim of the work is to provide a recent overview of the position of nCLE in the diagnosis of pancreatic cystic lesions and some of our own experiences. The nCLE method is based on so-called real-time optical biopsy, which brings better diagnostic results compared to traditional methods such as CT, MRI/MRCP, and EUS, as confirmed by the authors‘ own data. Although nCLE offers certain advantages, its wider use in clinical practice is limited by the high costs of equipment, technical difficulties during examination, and the need for thorough training of endoscopists. The integration of all diagnostic procedures (EUS, cytology, nCLE, and next-generation sequencing) into artificial intelligence algorithms could minimize the disadvantages of individual methods and increase the overall efficiency of diagnosing pancreatic cystic lesions. Conclusion: nCLE represents an innovative method for diagnosing pancreatic cystic lesions, which, in combination with other procedures (microforceps biopsy, next-generation sequencing, assessment of nCLE findings, and overall malignancy risk using artificial intelligence), can further enhance its diagnostic accuracy in this context.
Advanced imaging of microorganisms, including protists, is challenging due to their small size. Specimen expansion prior to imaging is thus beneficial to increase resolution and cellular details. Here, we present a sample preparation workflow for improved observations of the single-celled eukaryotic pathogen Giardia intestinalis (Excavata, Metamonada). The binucleated trophozoites colonize the small intestine of humans and animals and cause a diarrhoeal disease. Their remarkable morphology includes two nuclei and a pronounced microtubular cytoskeleton enabling cell motility, attachment and proliferation. By use of expansion and confocal microscopy, we resolved in a great detail subcellular structures and organelles of the parasite cell. The acquired spatial resolution enabled novel observations of centrin localization at Giardia basal bodies. Interestingly, non-luminal centrin localization between the Giardia basal bodies was observed, which is an atypical eukaryotic arrangement. Our protocol includes antibody staining and can be used for the localization of epitope-tagged proteins, as well as for differential organelle labelling by amino reactive esters. This fast and simple technique is suitable for routine use without a superresolution microscopy equipment.
Diagnostika a verifikace plicních malignit směřuje v poslední době hlavně cestou miniinvazivních technik. V některých případech je verifikace zatížená nedostatečným množstvím odebraného materiálu. Chirurgická verifikace je proto v některých případech nevyhnutelná. Klíč k úspěchu je kombinace vhodně zvolené zobrazovací a diagnostické techniky kombinovaná s erudicí lékaře. I v následujícím článku je místo zvolené verifikace méně tradiční, naštěstí ale s úspěšným diagnostickým závěrem.
x
- MeSH
- biopsie tenkou jehlou pod endosonografickou kontrolou * metody MeSH
- bronchoskopie metody MeSH
- konfokální mikroskopie MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- metastázy nádorů diagnostické zobrazování diagnóza MeSH
- nádory nadledvin * diagnóza MeSH
- nádory plic diagnostické zobrazování MeSH
- optická koherentní tomografie MeSH
- spektrální analýza metody MeSH
- Check Tag
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- kazuistiky MeSH
INTRODUCTION: Despite many technological advances, the diagnostic yield of bronchoscopic peripheral lung nodule analysis remains limited due to frequent mispositioning. Needle-based confocal laser endomicroscopy (nCLE) enables real-time microscopic feedback on needle positioning, potentially improving the sampling location and diagnostic yield. Previous studies have defined and validated nCLE criteria for malignancy, airway and lung parenchyma. Larger studies demonstrating the effect of nCLE on diagnostic yield are lacking. We aim to investigate if nCLE-imaging integrated with conventional bronchoscopy results in a higher diagnostic yield compared with conventional bronchoscopy without nCLE. METHODS AND ANALYSIS: This is a parallel-group randomised controlled trial. Recruitment is performed at pulmonology outpatient clinics in universities and general hospitals in six different European countries and one hospital in the USA. Consecutive patients with a for malignancy suspected peripheral lung nodule (10-30 mm) with an indication for diagnostic bronchoscopy will be screened, and 208 patients will be included. Web-based randomisation (1:1) between the two procedures will be performed. The primary outcome is diagnostic yield. Secondary outcomes include diagnostic sensitivity for malignancy, needle repositionings, procedure and fluoroscopy duration, and complications. Pathologists will be blinded to procedure type; patients and endoscopists will not. ETHICS AND DISSEMINATION: Primary approval by the Ethics Committee of the Amsterdam University Medical Center. Dissemination involves publication in a peer-reviewed journal. SUPPORT: Financial and material support from Mauna Kea Technologies. TRIAL REGISTRATION NUMBER: NCT06079970.
- MeSH
- bronchoskopie * metody MeSH
- jehly MeSH
- konfokální mikroskopie * metody MeSH
- lidé MeSH
- multicentrické studie jako téma MeSH
- nádory plic * patologie diagnóza diagnostické zobrazování MeSH
- plíce patologie diagnostické zobrazování MeSH
- randomizované kontrolované studie jako téma MeSH
- solitární plicní uzel * patologie diagnostické zobrazování diagnóza MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- multicentrická studie MeSH
- protokol klinické studie MeSH
- randomizované kontrolované studie MeSH
- MeSH
- časná diagnóza MeSH
- deep learning MeSH
- diabetické neuropatie * diagnóza MeSH
- komplikace diabetu diagnóza MeSH
- konfokální mikroskopie * metody MeSH
- lidé MeSH
- rohovka diagnostické zobrazování inervace patologie MeSH
- statistika jako téma MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- klinická studie MeSH
- komentáře MeSH
- souhrny MeSH
- Geografické názvy
- Spojené království MeSH
Taxonomic issues within Trypanorhyncha, e.g., the inaccurate light microscopic visualisation of the hook patterns, are solvable by confocal laser scanning microscopy (CLSM). We applied CLSM imaging to study Trygonicola macropora (Shipley et Hornell, 1906) and Dollfusiella michiae (Southwell, 1929) from Neotrygon caeruliopunctata Last, White et Séret from Bali, Indonesia. To illustrate the strength and limitations of CLSM, images of Otobothrium cysticum (Mayer, 1842) and Symbothriorhynchus tigaminacantha Palm, 2004, both permanent mounts from a collection, were also processed. The CLSM created image stacks of many layers, and edited with IMARIS Software, these layers resulted in three-dimensional images of the armature patterns and internal organs of both species. BABB (benzylalcohol and benzylbenzuolate) clearing was applied to T. macropora. We conclude that trypanorhynch cestodes stained with Mayer-Schuberg's acetic carmine permanently mounted in Canada balsam are suitable for CLSM, allowing detailed analyses of museum type-material as well as freshly collected and processed worms. BABB resulted in imaging the testes in detail, suggesting other stains to be used for CLSM in trypanorhynch cestode research. Application of CLSM for studies of other cestode groups is highly recommended.
- MeSH
- Cestoda * MeSH
- konfokální mikroskopie * MeSH
- muzea MeSH
- ploštěnci * MeSH
- rejnokovití * MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
In the last decade, organoids became a tremendously popular technique in developmental and cancer biology for their high pathophysiological relevance to in vivo models with the advantage of easier manipulation, real-time observation, potential for high-throughput studies, and reduced ethical issues. Among other fundamental biological questions, mammary organoids have helped to reveal mechanisms of mammary epithelial morphogenesis, mammary stem cell potential, regulation of lineage specification, mechanisms of breast cancer invasion or resistance to therapy, and their regulation by stromal microenvironment. To exploit the potential of organoid technology to the fullest, together with optimal organoid culture protocols, visualization of organoid architecture and composition in high resolution in three dimensions (3D) is required. Whole-mount imaging of immunolabeled organoids enables preservation of the 3D cellular context, but conventional confocal microscopy of organoid cultures struggles with the large organoid sample size and relatively long distance from the objective to the organoid due to the 3D extracellular matrix (ECM) that surrounds the organoid. We have overcome these issues by physical separation of single organoids with their immediate stroma from the bulk ECM. Here we provide a detail protocol for the procedure, which entails single organoid collection and droplet-based staining and clearing to allow visualization of organoids in the greatest detail.
- MeSH
- barvení a značení MeSH
- konfokální mikroskopie MeSH
- lidé MeSH
- organoidy * MeSH
- prsy MeSH
- zobrazování trojrozměrné * metody MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
The analysis of dynamic cellular processes such as plant cytokinesis stands and falls with live-cell time-lapse confocal imaging. Conventional approaches to time-lapse imaging of cell division in Arabidopsis root tips are tedious and have low throughput. Here, we describe a protocol for long-term time-lapse simultaneous imaging of multiple root tips on a vertical-stage confocal microscope with automated root tracking. We also provide modifications of the basic protocol to implement this imaging method in the analysis of genetic, pharmacological or laser ablation wounding-mediated experimental manipulations. Our method dramatically improves the efficiency of cell division time-lapse imaging by increasing the throughput, while reducing the person-hour requirements of such experiments.
- MeSH
- Arabidopsis * MeSH
- buněčné dělení MeSH
- časosběrné zobrazování MeSH
- konfokální mikroskopie MeSH
- lidé MeSH
- meristém MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Úvod: Časnou diagnostikou komplikovaného hojení kolorektální anastomózy lze zvýšit šanci na její záchranu a snížit celkovou mortalitu. Konfokální laserová endomikroskopie (CLE) umožňuje hodnocení tkáňové perfuze bez narušení její integrity. Práce na experimentálním modelu hodnotí využitelnost CLE k pooperační monitoraci kolorektální anastomózy. Metody: Do studie bylo zařazeno 9 prasat, u kterých byla provedena ručně šitá kolorektální anastomóza. Zvířata byla následně rozdělena do skupin s normální (N=3) a ischemickou anastomózou (N=6). Pomocí CLE byly pooperačně v pravidelných intervalech hodnoceny mikroskopické známky hypoperfuze. Výsledky: Ve skupině s ischemickou anastomózou bylo patrné nerovnoměrné sycení obrazu, epitel měl nehomogenní okraje a bylo viditelné četnější větvení krypt. Při hodnocení edému (počet krypt na zorné pole) byly rozdíly mezi skupinami signifikantní již při prvním měření po vyvolání ischemie. Signifikantní rozdíl byl i mezi hodnotami naměřenými před a 10 minut po ischemizaci – 8,7±1,9 vs. 6,0±1,1 (p=0,013). Závěr: Pooperační monitorace kolorektální anastomózy pomocí CLE umožňuje rychlé zachycení poruchy perfuze.
Introduction: Early diagnosis of complicated healing of colorectal anastomosis can increase the chance for salvage surgery and thus reduce overall morbidity. Confocal laser endomicroscopy (CLE) enables in vivo assessment of tissue perfusion without disturbing its integrity. This experimental study evaluates the potential of CLE for postoperative monitoring of colorectal anastomosis. Methods: A hand-sewn colorectal anastomosis was performed in 9 pigs. The animals were subsequently divided into groups with normal (N=3) and ischemic anastomosis (N=6). Microscopic signs of hypoperfusion were evaluated postoperatively at regular intervals using CLE. Results: Uneven saturation of the images was evident in the group with ischemic anastomosis. The epithelium had inhomogeneous edges and more numerous crypt branching was visible. Tissue oedema quantified as the number of crypts per visual field was already more extensive at the first measurement after induction of ischemia. There was also a significant difference between the values measured before and 10 minutes after ischemia – 8.7±1.9 vs. 6.0±1.1 (p=0.013). Conclusion: Postoperative monitoring of the colorectal anastomosis using CLE enables prompt detection of perfusion disorders.
- Klíčová slova
- konfokální laserová endomikroskopie,
- MeSH
- anastomóza chirurgická * MeSH
- kolorektální chirurgie veterinární MeSH
- kolorektální nádory * chirurgie veterinární MeSH
- konfokální mikroskopie metody veterinární MeSH
- modely nemocí na zvířatech MeSH
- prasata MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
With the development of light microscopy, it is becoming increasingly easy to obtain detailed multicolor fluorescence volumetric data. The need for their appropriate visualization has become an integral part of fluorescence imaging. Virtual reality (VR) technology provides a new way of visualizing multidimensional image data or models so that the entire 3D structure can be intuitively observed, together with different object features or details on or within the object. With the need for imaging advanced volumetric data, demands for the control of virtual object properties are increasing; this happens especially for multicolor objects obtained by fluorescent microscopy. Existing solutions with universal VR controllers or software-based controllers with the need to define sufficient space for the user to manipulate data in VR are not usable in many practical applications. Therefore, we developed a custom gesture-based VR control system with a custom controller connected to the FluoRender visualization environment. A multitouch sensor disk was used for this purpose. Our control system may be a good choice for easier and more comfortable manipulation of virtual objects and their properties, especially using confocal microscopy, which is the most widely used technique for acquiring volumetric fluorescence data so far.
- MeSH
- gesta * MeSH
- konfokální mikroskopie MeSH
- software MeSH
- virtuální realita * MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
