Despite Pakistan's rich reptilian diversity, wild lizards have largely been unexplored for vector-borne parasites. This study reports the prevalence and phylogenetic assessment of Hepatozoon ophisauri and Toxoplasma gondii DNA in the blood samples of 101 wild lizards from Khyber Pakhtunkhwa, Pakistan, captured at altitudes of 1200 to 2250 m above sea level between March 2022 and June 2023. PCR-based molecular analysis identified H. ophisauri DNA in three (3%) lizards of all Laudakia tuberculata. Additionally, 45 (44.5%) lizards tested positive for T. gondii DNA, including L. agrorensis, L. pakistanica, L. tuberculata, and Abblepharus pannonicus. Sequence analysis and BLAST confirmed the presence of H. ophisauri and T. gondii. Phylogenetic analysis showed genetic diversity among the H. ophisauri and T. gondii nucleotide sequences, clustering with reference sequences from reptiles, birds, and ticks. Toxoplasma gondii prevalence varied among species, with the highest rates in L. agrorensis and A. pannonicus (67%), followed by L. pakistanica (45%) and L. tuberculata (43%). This study is the first from Pakistan to report high T. gondii prevalence and low H. ophisauri prevalence in wild lizards. Similar and larger-scale studies in unexplored regions of Pakistan are needed to enhance understanding of these pathogens' genetic diversity and host-parasite interactions.

• Keywords
• Apicomplexa parasites, PCR, Pakistan, Phylogenetic analysis, Wild lizards,
• Publication type
• Journal Article MeSH

Blood parasites of the genus Hemolivia Petit, Landau, Baccam and Lainson, 1990 (Adeleorina: Karyolysidae) are hemogregarines of ectothermic vertebrates, such as lizards, chelonians, and toads. Only five species of Hemolivia from vertebrate hosts and one from their tick vector have been described so far. In the present study, Central American wood turtles (Rhinoclemmys pulcherrima manni) originating from Southern Nicaragua were screened for the presence of hemogregarines. Ten out of 30 specimens (33.3%) were positive for Hemolivia using both approaches - microscopy and PCR-based analyses. Phylogenetic analyses based on the 18S rRNA gene revealed the presence of two haplotypes, both placed as sister taxa in the Hemolivia clade. Their phylogenetic position was supported by high bootstrap values and high posterior probabilities, suggesting that there are at least two new distinct haplotypes corresponding to two distinct species. However, the specimens of each haplotype were microscopically indistinguishable from each other based on the gamont morphology, therefore, only a single species could be described and named, as Hemolivia pulcherrima n. sp. We consider that the uniform morphology of the most common blood stages of species of the genus Hemolivia complicates their differential diagnosis. Sequence divergence and different host spectra, therefore, remain the only differentiating tools.

TITLE: Espèces d’Hemolivia infectant les tortues peintes d’Amérique centrale (Rhinoclemmys pulcherrima manni) et problèmes de diagnostic différentiel au sein du genre Hemolivia. ABSTRACT: Les parasites sanguins du genre Hemolivia Petit, Landau, Baccam et Lainson, 1990 (Adeleorina : Karyolysidae) sont des hémogrégarines de vertébrés ectothermes, tels que les lézards, les tortues et les crapauds. Seules cinq espèces d’Hemolivia provenant d’hôtes vertébrés et une de leur tique vectrice ont été décrites jusqu’à présent. Dans cette étude, des tortues peintes d’Amérique centrale (Rhinoclemmys pulcherrima manni) originaires du sud du Nicaragua ont été examinées pour détecter la présence d’hémogrégarines. Dix tortues sur 30 (33,3 %) étaient positives pour Hemolivia en utilisant les deux approches de microscopie et d’analyse de PCR. Les analyses phylogénétiques basées sur le gène de l’ARNr 18S ont révélé la présence de deux haplotypes, tous deux placés comme taxons frères dans le clade Hemolivia. Leur position phylogénétique était étayée par des valeurs de bootstrap et des probabilités postérieures élevées, suggérant qu’il existe au moins deux nouveaux haplotypes distincts correspondant à deux espèces distinctes. Cependant, les spécimens de chaque haplotype étaient impossibles à distinguer les uns des autres au microscope sur la base de la morphologie des gamontes. Par conséquent, une seule espèce a pu être décrite et nommée, comme Hemolivia pulcherrima n. sp. Nous considérons que l’uniformité de la morphologie des stades sanguins les plus courants des espèces du genre Hemolivia complique leur diagnostic différentiel. Les divergences de séquences et les différents spectres d’hôtes restent donc les seuls outils de différenciation.

• Keywords
• Differential diagnosis, Hemogregarine, Hemolivia, Morphology, Nicaragua,
• MeSH
• Diagnosis, Differential MeSH
• Phylogeny MeSH
• Lizards * parasitology   MeSH
• Turtles * MeSH
• Animals MeSH
• Check Tag
• Animals MeSH
• Publication type
• Journal Article MeSH
• Geographicals
• Central America MeSH