We will study iron transport using labeling of intestinal cells by 59 Fe followed by native electrophoresis of cell lysates and detection by phosphorimaging. We will describe the intracellular iron kinetics and iron transport proteins. Transport proteinswill be purified and microsequenced. Partial amino acid sequences will be used for the identification of the protein by database searching and/or for the cDNA cloning. We will construct the intestinal cell line expressing different levels of the HFE protein under the control of tetracycline sensitive promotor. These cells will be used for the studies of iron transport influenced by different levels of HFE expression. We will study the difference in composition of HFE-associated protein complexes in cells obtained from hereditary hemochromatosis patient compared to healthy cells.

Budeme studovat transport železa buňkami střevního epitelu značení 59 Fe, nedenaturující elektroforetické separace a detekce pomocí phosphorimageru. Popíšeme tak intracelulární kinetiku železa a identifikujeme jednotlivé transportní bílkoviny. Transportní bílkoviny budou purifikovány a mikrosekvenovány. Získaná sekvence bude použita pro identifikaci bílkoviny v genových databázích nebo pro získání cDNA. Jako model pro studium úlohy proteinu HFE při transportu železa enterocytem vytvoříme buněčnou sublimii, umožňující regulovanou expresi proteinu HFE. Tato linie bude použita při studiu kinetiky transportu železa při různých hldinách buněčného HFE. Budeme studovat složení komplexů bílkovin transportujících železo u nemocných s dědičnou hemochromatózou vporovnání se zdravými jedinci.

Doba řešení 2001-2003

Obsahuje literaturu