V souvislosti s prvními importovanými případy horečky chikungunya do Evropy v průběhu epidemie v oblasti Indického oceánu v roce 2006 i výskytem autochtonních nákaz v oblasti severní Itálie v létě 2007 byla v Národní referenční laboratoři České republiky (NRL ČR) pro arboviry zavedena sérologická diagnostika horečky chikungunya. Materiál a metody: V roce 2006 byla nejprve zavedena diagnostika pomocí komplement-fixační reakce (KFR). Pro zpřesnění diagnostiky byl v roce 2007 vyvinut a do praxe zaveden virus-neutralizační test (VNT) v mikromodifikaci na mikrotitračních destičkách s využitím vitálního barvení pro průkaz specifických protilátek anti-chikungunya v. V roce 2008 byla diagnostika doplněna průkazem specifických protilátek anti-chikungunya v. ve třídách IgG a IgM pomocí nepřímé imunofluorescence (NIF) s využitím komerčního setu firmy EUROIMMUN. V práci je popisován princip VNT v mikromodifikaci i postup jeho provedení. Výsledky: Od února 2006 do konce února 2008 bylo vyšetřeno celkem 110 vzorků sér od 104 osob na protilátky anti-chikungunya v. Akutní infekce byla potvrzena u 4 pacientů, u dalších 2 osob byla prokázána séropozitivita bez průkazu akutní infekce. Závěr: Jednotlivými metodami bylo dosaženo souhlasných kvalitativních výsledků a potvrzen přínos virus-neutralizačního testu pro konfirmaci.

During the year 2006 first imported cases of chikungunya fever in Europe occured contextual to the epidemic in the area of Indian ocean. In summer 2007 also autochthonnic chikungunya infections in the northern part of Italy appeared. On the basis of these facts serologic diagnostics of chikungunya fever was initiated in the National Reference Laboratory (NRL) for Arboviruses of the Czech Republic. MATERIAL AND METHODS: Complement-fixation assay was estabilished in 2006. Micromodification of virus-neutralisation assay in 96-well plate with staining of the cell cultures for detection of anti-chikungunya v. antibodies was developed and estabilished for improvement of the diagnostics in 2007. Consequently in 2008 the diagnostics was completed with indirect immunofluorescence assay for detection of anti-chikungunya v. IgG and IgM antibodies using the commercial EUROIMMUN assay. Principle of virus-neutralisation and the test procedure is described in the paper. Results reached by the use of all these methods are compared. RESULTS: From February 2006 to February 2008 110 serum samples from 104 persons were tested for anti-chikungunya v. antibodies. In 4 pateints acute chikungunya v. infection was proved and two other persons revealed seropositivity without acute infection. CONCLUSIONS: Qualitative correspondence between the particular methods was demonstrated and a benefit of virus-neutralisation assay for confirmation of the results was proved.

Národní referenční laboratoř České republiky pro arboviry Ostrava

Experience with serological diagnosis of chikungunya fever

Lit.: 16