V práci je popsána metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie, která byla zavedena pro účely fenotypizace enzymu CYP2D6 metoprololem jako substrátovou látkou. Metoprolol, ?-hydroxmetoprolol a nadolol (vnitřní standard) byly extrahovány ze séra dichlormethanem s přídavkem 1 mol/l NaOH. Látky byly separovány na koloně s reverzní fází SupercosilTM LC-18 (15 cm × 3 mm, 5 µm) mobilní fází o složení acetonitril : methanol : voda : triethylamin (15 : 5 : 80 : 0,1; pH 3,0) při průtoku 0,7 ml/min. Fluorescenční detekce (FL) probíhala při vlnové délce 230 nm (excitační) a 300 nm (emisní). Celková doba analýzy byla 12 min. Retenční časy byly pro ?-hydroxymetoprolol (h-MET) 2,04 minut, pro nadolol (IS) 3,02 minut a pro metoprolol (MET) 9,04 minut. Přesnosti v sérii a mezi sériemi vyjádřené jako relativní směrodatné odchylky byly nižší než 7,2 % a recovery se pohybovalo v rozmezí 98,2–103,0 %. Kalibrační křivka byla lineární v rozmezí 25–500 ng/ml (r = 0,999) pro obě látky. Detekční limit byl stanoven pro metoprolol a ?-hydroxymetoprolol na 5 ng/ml a kvantifikační limit na 25 ng/ml. Prezentovaná metoda může být vhodná pro analýzu metoprololu a ?-hydroxymetoprololu v séru u pacientů s hypertenzí, ICHS i jiných onemocnění.

High-performance liquid chromatography method has been developed with a view of its future use in the phenotyping of CYP2D6 enzyme by metoprolol as a probe drug. Metoprolol, ?-hydroxymetoprolol and the internal standard nadolol were extracted from serum with dichloromethane alkalinized with 1 mol/l NaOH. Chromatographic separations were performed on the reversed-phase column SupercosilTM LC-18 (15 cm × 3 mm, 5 µm) with the mobile phase containing acetonitril : methanol : water : triethylamine (15 : 5 : 80 : 0.1, pH 3.0) at a flow rate of 0.7 ml/min. Fluorescence detection (FL) was made at 230 nm (excitation) and 300 nm (emission). The total analysis time was 12 min. The retention time for ?-hydroxymetoprolol, nadolol and metoprolol were 2.04, 3.02 and 9.04 min, respectively. The intra-assay and inter-assay precisions (coefficients of variation) were less than 7.2 %, and recovery values were found to be within 98.2–103.0 %. The calibration curve of the method was linear over a concentration range of 25–500 ng/ml (r = 0.999) for both compounds. The limit of detection was 5 ng/ml and the limit of quantification was 25 ng/ml for both metoprolol and ?-hydroxymetoprolol. The reported method could be suitable for measurements of metoprolol and ?-hydroxymetoprolol in serum from patients with hypertension, IHD and other illnesses.

Ústav klinické farmakologie FN a Zdravotně sociální fakulta Ostravské univerzity Ostrava

Determination of metoprolol and its metabolite ?-hydroxymetoprolol in serum by HPLC method with fluorescence detection

Lit.: 26