Cieľ: Posúdenie vývojových schopností ľudských embryí na základe časového priebehu prvých bunkových delení. Typ štúdie: Retrospektívna analýza. Názov a sídlo pracoviska: Prague Fertility Centre a Ústav pro péči o matku a dítě, CAR, Praha. Metodika: Vývoj embryí z IVF programu bol monitorovaný za použitia time-lapse (PrimoVision, Cryo- Innovation, 1 obr./10 min, intermittent white-light illumination) v štandardných kultivačných podmienkach (37,0 °C , 5 % CO2 vo vlhkom vzduchu). Získané záznamy boli uschované pre účely retrospektívnej analýzy. Priebeh 1. mitotického delenia embryí sme sledovali za pomoci intravitálneho farbenia chromatínu fluorescenčným farbivom (Hoechst 33342) a deliace vretienko sme vizualizovali pomocou polarizačnej mikroskopie (Oosight, Research Instruments). Analyzovali sme záznamy 180 embryí, ktorých vývoj jednoznačne viedol k vzniku klinického tehotenstva (dg. FHB, fetal heart beat). Časový priebeh prvých štyroch interfáz (IP) a synchrónia delenia dcérskych buniek (ID, interval delenia) boli manuálne zaznamenané a vyhodnotené u týchto embryí. IP1(prvá interfáza) bola definovaná ako časový interval od oplodnenia do syngamie. IP2 od 2bunkového do 3bunkového embrya, IP3 interval medzi 3–5bunkovým štádiom a IP4 bol časový interval medzi 5bunkovým a 9bunkovým štádiom. Interval delenia sesterských buniek v danej mitóze (tj. vyjadrenie synchrónnosti delenia) bol zaznamenaný ako ID1: interval od syngamie do 2bunkového štádia, ID2: interval od 3 do 4 buniek, ID3: od 5 do 8 buniek a ID4: od 9bunkového do 16bunkového embrya. Výsledky: U 180 embryí, ktorých vývoj viedol k vzniku klinickej gravidity, sme namerali tieto dĺžky interfáz: IP1 (prvá interfáza) trvala: 20–26 hod., IP2: 10–12 hod., IP3: 14–16 hod. a IP4: 20–26 hod. Intervaly delenia sesterských buniek v danej mitóze boli u týchto embryí nasledovné: ID1: 120–210 min., ID2: 20–60 min., ID3: 120–240 min. a ID4: 230–360 min. Záver: Vitálne embryá sa delia vo veľmi podobných časových intervaloch, ktoré je možné odmerať a vytvoriť referenčné hodnoty. Neinvazívne meranie dĺžky bunkového cyklu v prvých dňoch embryonálneho vývoja je možné použiť ako objektívne merateľný ukazovateľ životaschopnosti ľudských embryí.

Objective: The evaluation of the developmental abilities of human embryos according to the timing of their early mitotic cleavages. Design: Retrospective study. Setting: Prague Fertility Centre and Institute for Care of Mother and Child, CAR, Prague. Methods: The embryos obtained in IVF program were used for further observations and subjected to automated time-lapse monitoring (PrimoVision, Cryo-Innovation, 1 picture/10 min, intermittent whitelight illumination) under standard cultivation conditions (37.0 °C , 5% CO2 in humid air). Image sequences were digitally recorded for later use. For intravital spindle detection we used polaryzing microscopy (Oosight, Research Instruments) and Hoechst 33342 fluorescent dye for intravital chromatin visualization. A total number of 180 human embryos which gave a vital pregnancies (FHB, fetal heart beat) were analysed retrospectively for timing of early cleavages. In our study, the exact timing of the four interphases (IP) and synchrony of sister cell divisions (ID, interval division) occurring after fertilization were identified and manually recorded. Interphases: IP1 was defined as the period from fertilization till 2 cell stage. IP2 between 2 and 3 cells stages, IP3 between 3 and 5 and IP4 between 5 and 9 cells embryo. Interval division: ID2 was recorded as a time interval between 3 and 4 cells, ID3 between 5 and 8 cells and ID4 between 9 and 16 cells stage embryos. Results: In the embryos giving viable pregnancies, the durations of IP1 was 20–26 hrs. IP2 was 10–12 hrs, IP3 was 14-16 hrs and IP4 was 20–26 hrs. In these embryos, the sister blastomeres cleaved in a very synchronous manner. The duration of ID1 was recorded to varry from 120 to 210 min. ID2 from 20 to 60 min., ID3 from 120 to 240 min. and ID4 from 230 to 360 min. Conclusion: The viable embryos cleave in a very similar time pattern which can be defined and applied as referencial value. Non-invasive monitoring of the timing of early embryo cleavages can be used as an objectively measurable predictor of human embryo.

Prague Fertility Centre Praha

Univerzita P J Šafárika Institute of Biology and Ecology Košice

Ústav pro péči o matku a dítě CAR Praha

Non-invasive monitoring of the timing of early embryo cleavages – objectively measurable predictor of human embryo viability

Obsahuje 1 tabulku

Literatura