Cíl studie: Clostridium difficile je v současnosti významným původcem nozokomiálních průjmů, v posledních letech narůstá i počet případů infekcí vzniklých v komunitě. Od začátku roku 2010 jsme v Pardubické krajské nemocnici, a. s. (PKN) zaznamenali výrazný nárůst počtu případů infekcí Clostridium diffícile. Cílem práce bylo popsat a vyhodnotit metody používané v laboratorní diagnostice infekcí Clostridium diffícile v PKN a popsat používaný laboratorní diagnostický algoritmus. Materiál a metody: Vzorky stolic byly odebrány od symptomatických pacientů hospitahzovaných nebo vyšetřených na ambulancích PKN v období od 1. 7. 2010 do 31. 12. 2012. K detekci glutamát dehydrogenázy (GDH) a toxinu A/B byl použit duální test na principu enzymoimunoeseje C. Diff Quik Chek Complete, Techlab® (D-ELA). Ke konfirmaci byl použit systém GeneXpert PCR Cepheid® (PCR). Od začátku roku 2011 byla prováděna kultivace u všech GDH pozitivních vzorků. Výsledky: Celkem bylo vyšetřeno 2 040 vzorků. D-EIA test byl použit k vyšetření 2 014 vzorků. I 373 (68,2 %) vzorků bylo GDH a toxin A/B negativní. Ve 359 (17,8 %) vzorcích byla prokázána GDH i toxin A/B. Zjištěná senzitivita a specificita D-ElA testu pro průkaz toxigenního kmene ve vzorku stolice byla 21,8 a 97,2 %. PPV a NPV kalkulovaná pro populaci s prevalencí onemocnění 5,10,20,50 % byla 0,29, 0,46, 0,66, 0,88 a 0,96, 0,92, 0,83, 0,55. Senzitivita a specificita GDH pro detekci Clostridium diffícile ve stolici byla 100,0 a96,2%. PCR vyšetření bylo celkem provedeno u 140 vzorků. 82 vzorků bylo PCR pozitivních. Gen pro produkci toxinu B byl prokázán ve 47 %, nález suspektní pro ribotyp 027 (gen pro toxin B, binární toxin a delece tcdC) ve 48 %, u 5 % vzorků byl detekován současně gen pro toxin B a gen pro binární toxin. Závěr: Vzhledem k nízké senzitivitě EIA testu pro průkaz toxigenního kmene Clostridium diffícile, pokud je užit jako jediný, byl pro rutinní laboratorní vyšetřování infekcí Clostridium difficile na Oddělení klinické mikrobiologie PKN zaveden dvoustupňový testovaci algoritmus. Použití D-EIA testu v prvním kroku umožnilo diagnostikovat 86 % vyšetřovaných vzorků během 30 minut jako pozitivní (GDH +; toxin A/B +) nebo negativní (GDH -; toxin A/B -). Vyšetření pomocí PCR ve druhém kroku zvyšuje počet diagnostikovaných případů CDI. Výsledek testu je k dispozici do dvou hodin, což umožňuje rychlé zavedení izolačních opatření na odděleních PKN a adekvátní antibiotickou léčbu pacientů.

Background: Clostridium difficile is currently a significant cause of nosocomial diarrhea. For several years, the number of infectious cases in the community has also been increasing. Since the beginning of 2010, quite a large increase in the number of Clostridium difficile infections (GDIs) has been noted in Pardubice Regional Hospital (PRH). The objectives of this study were to describe and evaluate the methods used in the laboratory diagnosis of GDIs in PRH, and to describe the laboratory diagnostic algorithm used here. Material and methods: Samples of stools were taken from symptomatic patients hospitalized or examined in the outpatient departments of PRH from 1 July 2010 to 31 December 2012. For the detection of glutamate dehydrogenase (GDH) and toxin A/B, the dual test based upon the principle enzyme immunoassays C. Diff Quik Chek Complete, Techlab® (D-EIA) was used. The system GeneXpert PCR Cepheid® (PCR) was used for confirmation of laboratory findings. Since the beginning of 2011, all the GDH-positive samples were cultured. Results: A total of 2,040 samples were examined. The D-EIA test was used for examination of 2,014 samples. Of those, 1,373 (68.2 %) samples were GDH- and toxin A/B-negative. In 359 (17.8 %) samples, both GDH and toxin A/B were detected. The D-EIA sensitivity and specificity for detecting toxigenic strains in stool samples were 21.8 % and 97.2 %, respectively. The PPV and NPV rates calculated for the populations with prevalence rates of disorders of 5 %, 10 %, 20 % and 50 % were 0.29, 0.46, 0.66, 0.88 and 0.96, 0.92, 0.83,0.55, respectively. The sensitivity and specificity of GDH for the detection of Clostridium difficile in stools were 100.0 % and 96.2 %, respectively. PCR examination was carried out in 140 samples. Of those, 82 samples were PCR- positive. The gene for the production of toxin B was detected in 47 %, the finding suspected for ribotype 027 (gene for toxin B, binary toxin and deletion of tcdC) in 48 %. In 5 % of the samples, the gene for toxin B and the gene for the binary toxin were detected. Conclusion: Considering the low sensitivity of the D-EIA test for detecting the toxigenic strain of Clostridium difricile, if used as the only one, a two-step algorithm was introduced for routine laboratory examination of infections with Clostridium difRcile in the Clinical Microbiology Department of PRH. In the first step, the D-EIA test diagnosed 86 % of examined samples in 30 minutes as positive (GDH +; toxin A/B -i-) or negative (GDH -; toxin A/B -). The examination with PCR in the second step increased the number of patients diagnosed with GDI. The test results are available within two hours. This enables quick introduction of isolation measures in the departments of PRH and appropriate antibiotic treatment of the patients.

Katedra epidemiologie Fakulta vojenského zdravotnictví Hradec Králové

Oddělení klinické mikrobiologie Pardubická KN a s

Univerzita obrany Brno

Experience with labortory diagnosis of Clostridium difficile

Literatura