Byla purifikována a charakterizována protease stabilni v organických rozpoštědlech. Její molekulová hmotnost byla stanovena pomocí SDS-PAGE a SEC na 26 kDa. Purifikovaná proteasa měla nejvyšší aktivitu při 70°C a její pH optimum bylo velmi široké (5,0 – 12.0). Po ošetření 5 mM EDTA a β-mercaptoethanolem zůstával enzym aktivní. Proteasa měla po hodinové inkubaci při 30°C v přítomnosti 20, 40 a 60 % (v/v) organických rozpouštědel, jako jsou například DMSO, DMF, aceton, ethanol, iso-propanol a toluen vyšší aktivitu a stabilitu. Proteolytická aktivita byla v přítomnosti Mn2+ iontů prokazatelně vyšší a v přítomnosti 5, 10 a 15 mM Pb2+, Zn2+, K+, Fe2+, Co2+, Cd2+, Mg2+, Ca2+, Fe3+ iontů po dobu 1h při 30°C si zachovávala více než 90 % aktivity.

In the present research, stable in organic solvent protease from a new thermophilic actinomycete isolate, was purified and characterized. The approximate molecular mass of 26 kDa was determined by SDS-PAGE and SEC. The purified protease showed maximum activity at 70°C and exhibited broad pH optimum (5.0 – 12.0). After treatment with 5 mM EDTA and β-mercaptoethanol the enzyme remained fully active. The protease showed an increased activity and stability in the presence of 20, 40 and 60 % (v/v) organic solvents such as DMSO, DMF, acetone, ethanol, iso-propanol and toluene when incubated for 1h at 30°C. The proteolytic activity was significantly enhanced in presence of Mn2+ and remained more than 90 % active in the presence of 5, 10 and 15 mM Pb2+, Zn2+, K+, Fe2+, Co2+, Cd2+, Mg2+, Ca2+, Fe3+ ions for 1h at 30°C. The kinetic constants were also determined.

Biochemistry department University of Food Technology Plovdiv Bulgaria

Biotechnology department University of Food Technology Plovdiv Bulgaria

Purifikace a charakterizace proteasy, stabilní v organických rozpoštědlech, z nových termofilních aktinomycet

Literatura