Závěrečná zpráva o řešení grantu Interní grantové agentury MZ ČR
85 l. : il. ; 31 cm
Tyrosine kinase activity of Src is up-regulated in numerous types of human cancer and Src inhibitors are used as efficient anticancer drugs. Pre-clinical data and clinical trials showed strong effect of tyrosine kinase inhibitors in cancer therapy. Our previous findings has shown that the suppression of Src kinase activity results in the inhibition of the serine/threonine-specific phosphorylation of effector proteins in the mTOR signalling pathway. It indicates that, besides rapamycin and its analogueswhich are tested in clinical trials, Src inhibitors are important therapeutic agents against tumors with different deregulated signal transduction pathways.The aim of the project is to elucidate how Src tyrosine kinase activity is involved in the deregulated signalling of two important pathways, the mTOR pathway and the MAPK cascade, in cancer cells.
Aktivita proteinu Src je zvýšená v mnoha typech lidských nádorů. Naše předchozí výsledky ukázaly, že potlačením tyrosinkinázové aktivity Src dochází k inhibici aktivity a serin/treonin-specifické fosforylace efektorových proteinů v signální dráze řízenémTORem. Kromě rapamycinu a jeho analogů, inhibitorů mTORu využívaných v protinádorové léčbě, také inhibitory proteinu Src mohou představovat významný terapeutický prostředek pro léčbu nádorů, zejména těch, v kterých je mTOR dráha reaktivována. Záměrem navrhovaného projektu je zjistit účinnost potlačení aberantně zvýšené aktivity signálních drah mTORu a MAPKináz v nádorových buňkách pomocí inhibice aktivity Src, tedy určit, jakým způsobem je tyrosinkinázová aktivita Src zapojena do deregulace přenosu signálů kaskádami serin/treonin-specifických kináz. Budou studovány vybrané typy nádorových buněk se zvýšenou aktivitou Src, zejména buňky karcinomu plic a melanomu. Výsledky přispějí k racionální protinádorové léčbě proteinkinázovými inhibitory.
- MeSH
- antibiotika antitumorózní MeSH
- biologická terapie metody MeSH
- buněčná a tkáňová terapie MeSH
- individualizovaná medicína MeSH
- melanom farmakoterapie terapie MeSH
- mitogenem aktivované proteinkinasy kinas MeSH
- molekulární biologie MeSH
- nádory plic farmakoterapie terapie MeSH
- proteiny - lokalizační signály MeSH
- sirolimus MeSH
- skupina kinas odvozených od src-genu MeSH
- TOR serin-threoninkinasy MeSH
- tyrosinkinasové receptory antagonisté a inhibitory MeSH
- tyrosinkinasy MeSH
- Konspekt
- Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
- NLK Obory
- biologie
- onkologie
- NLK Publikační typ
- závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR
The mammalian target of rapamycin (mTOR) is a Ser/Thr protein kinase conserved in all eukaryotes that plays a key role in cell growth and is a central effector of several pathways regulating essential cell functions. Hyperactivation of the mTORdependent signalling pathway occurs in many human diseases and may be a selective target for their therapy. However, the dual nature of mTOR, existing in two multiprotein complexes mTORC1 and mTORC2 driven by different feedback loops, decreases the therapeutic effects of rapamycin, the specific mTOR inhibitor. In the present study we demonstrate that the mTORC1 signalling pathway is highly activated in human melanoma cells and that up-regulation of this pathway along with the growth and malignity of these cells could be suppressed by disruption of the Src activity. SU6656, the selective inhibitor of the Src kinase activity, decreased up-regulation of the mTORC1 signalling and moreover, unlike rapamycin, it did not induce the activation of Akt/PKB and its downstream targets in HBL melanoma cells. The Src protein was found to be associated with raptor in the mTORC1 complex immunoprecipitated from these cells, suggesting that the Src activity might be a new attractive target for monotherapeutic inhibition of the up-regulated mTORC1 signalling pathway.
- MeSH
- adaptorové proteiny signální transdukční metabolismus MeSH
- aktivace enzymů účinky léků MeSH
- fosforylace účinky léků MeSH
- indoly farmakologie MeSH
- inhibitory proteinkinas farmakologie MeSH
- lidé MeSH
- melanom enzymologie patologie MeSH
- multiproteinové komplexy antagonisté a inhibitory metabolismus MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- nádorové proteiny metabolismus MeSH
- proliferace buněk účinky léků MeSH
- protoonkogenní proteiny c-akt metabolismus MeSH
- signální transdukce účinky léků MeSH
- sirolimus farmakologie MeSH
- skupina kinas odvozených od src-genu antagonisté a inhibitory metabolismus MeSH
- sulfonamidy farmakologie MeSH
- testy nádorových kmenových buněk MeSH
- TOR serin-threoninkinasy antagonisté a inhibitory metabolismus MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- MeSH
- kongresy jako téma MeSH
- molekulární medicína MeSH
- Publikační typ
- zprávy MeSH
Increased activity of the Src tyrosine protein kinase that has been observed in a large number of human malignancies appears to be a promising target for drug therapy. In the present study, a critical role of the Src activity in the deregulation of mTOR signaling pathway in Rous sarcoma virus (RSV)-transformed hamster fibroblasts, H19 cells, was shown using these cells treated with the Src-specific inhibitor, SU6656, and clones of fibroblasts expressing either the active Src or the dominant-negative Src kinase-dead mutant. Disruption of the Src kinase activity results in substantial reduction of the phosphorylation and activity of the Akt/protein kinase B (PKB), phosphorylation of tuberin (TSC2), mammalian target of rapamycin (mTOR), S6K1, ribosomal protein S6, and eukaryotic initiation factor 4E-binding protein 4E-BP1. The ectopic, active Akt1 that was expressed in Src-deficient cells significantly enhanced phosphorylation of TSC2 in these cells, but it failed to activate the inhibited components of the mTOR pathway that are downstream of TSC2. The data indicate that the Src kinase activity is essential for the activity of mTOR-dependent signaling pathway and suggest that mTOR targets may be controlled by Src independently of Akt1/TSC2 cascade in cells expressing hyperactive Src protein. These observations might have an implication in drug resistance to mTOR inhibitor-based cancer therapy in certain cell types.
- MeSH
- Adenoviridae genetika MeSH
- buněčné linie MeSH
- financování organizované MeSH
- fosforylace MeSH
- indoly farmakologie MeSH
- inhibitory proteinkinas farmakologie MeSH
- křečci praví MeSH
- proteinkinasy metabolismus MeSH
- signální transdukce MeSH
- sulfonamidy farmakologie MeSH
- transformované buněčné linie MeSH
- virus Rousova sarkomu genetika MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- křečci praví MeSH
- zvířata MeSH
Microphthalmia-associated transcription factor (MITF) activates the expression of melanocyte-specific markers and promotes the survival of embryonic, adult and malignant melanocytes. Although numerous MITF-dependent downstream genes have been identified, the mechanisms by which the MITF activity is coregulated remain elusive. Here we used a non-melanocytic cell line U2-OS as a model in which MITF evokes transcription of a paradigmatic MITF target tyrosinase and show that the adenoviral E1A protein represses the MITF-driven transcription in these cells. The E1A CR1 domain (which alone is insufficient to bind p300) was sufficient for repression, while the N-terminus, through which E1A binds the p300/CBP proteins and other coactivators, was unable to repress. Correspondingly, CR1 inhibited colony formation of MITF-positive, but not MITF-negative, melanoma cells. The repression by CR1 was largely independent of the PCAF-binding motif, previously recognized to be necessary for suppression of muscle-specific enhancer. Interestingly, CR1 conferred transcriptional competence to the MITF-CR1 chimera in which the MITF portion was rendered transcription-deficient. Moreover, MITF mutants defective in binding to p300/CBP in vivo still activated transcription, further supporting a p300/CBP-independent coactivation of MITF targets. MITF is amplified in a subset of melanomas and is thought to be required for sustained proliferation of malignant melanocytes. Our results suggest that understanding how CR1 represses Mitf activity may reveal a route to melanoma therapy.
- MeSH
- adenovirové proteiny E1A chemie MeSH
- aktivace enzymů MeSH
- aktivace transkripce MeSH
- down regulace MeSH
- financování organizované MeSH
- histonacetyltransferasy metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- melanom enzymologie genetika patologie MeSH
- molekulární sekvence - údaje MeSH
- mutantní proteiny chemie MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- regulace genové exprese enzymů MeSH
- regulace genové exprese u nádorů MeSH
- represorové proteiny metabolismus MeSH
- sekvence aminokyselin MeSH
- terciární struktura proteinů MeSH
- testy nádorových kmenových buněk MeSH
- transkripční faktor spojený s mikroftalmií genetika MeSH
- transkripční faktory p300-CBP metabolismus MeSH
- tyrosinasa genetika metabolismus MeSH
- vazba proteinů MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
beta-catenin has a dual function; it is implicated in intercellular junctions and transcriptional co-activation. Here we examined the regulation of the expression and localization of beta-catenin in HT29 colorectal adenocarcinoma cells. Our results showed that inhibition of PI-3 kinase with wortmannin was accompanied by a considerably reduced expression of beta-catenin. This effect was overcome by butyrate and occurred at the protein level, not at the level of mRNA. Moreover, NaBT significantly increased the phosphorylation of the ribosomal protein, S6, known to participate in the translational control of gene expression. This was accompanied by the increased phosphorylation of p70 S6K and MAPKs, the effector proteins that are upstream of protein S6 in the distinct signaling pathways. These facts indicate that different signaling pathways may be involved in the regulation of beta-catenin synthesis. Modulation of beta-catenin expression induced by NaBT appeared to occur at the level of protein translation, suggesting that NaBT may act as a translational regulator.
- MeSH
- adenokarcinom metabolismus MeSH
- alkalická fosfatasa metabolismus MeSH
- androstadieny metabolismus MeSH
- beta-katenin genetika metabolismus MeSH
- butyráty metabolismus MeSH
- financování organizované MeSH
- fosfatidylinositol-3-kinasy metabolismus MeSH
- fosforylace MeSH
- imunohistochemie MeSH
- inhibitory fosfoinositid-3-kinasy MeSH
- kinasy ribozomálního proteinu S6, 70-kDa metabolismus MeSH
- kinasy ribozomálního proteinu S6 metabolismus MeSH
- kolorektální nádory metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- mitogenem aktivované proteinkinasy metabolismus MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- serin metabolismus MeSH
- signální transdukce fyziologie MeSH
- tyrosin metabolismus MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- MeSH
- antitumorózní látky terapeutické užití MeSH
- financování organizované MeSH
- genetické jevy genetika imunologie MeSH
- klinické zkoušky, fáze III jako téma MeSH
- lékařská onkologie metody trendy MeSH
- lidé MeSH
- onkogenní proteiny genetika MeSH
- proteinkinasy genetika MeSH
- regulace genové exprese u nádorů genetika imunologie MeSH
- ribozomální protein S6 genetika MeSH
- sirolimus analogy a deriváty farmakologie terapeutické užití MeSH
- skupina kinas odvozených od src-genu genetika MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- MeSH
- antitumorózní látky MeSH
- buněčná adheze MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- lidé MeSH
- nádorová transformace buněk MeSH
- nádory etiologie genetika terapie MeSH
- přehledová literatura jako téma MeSH
- receptory buněčného povrchu MeSH
- signální transdukce MeSH
- skupina kinas odvozených od src-genu genetika MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- MeSH
- adenokarcinom metabolismus MeSH
- Adenoviridae genetika metabolismus MeSH
- alkalická fosfatasa metabolismus MeSH
- buněčná diferenciace účinky léků MeSH
- down regulace MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- fosfatidylinositol-3-kinasy metabolismus MeSH
- imunoblotting MeSH
- kolorektální nádory metabolismus MeSH
- kultivační média farmakologie MeSH
- lidé MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- oxybát sodný farmakologie MeSH
- proteinkinasa C metabolismus MeSH
- regulace genové exprese enzymů MeSH
- regulace genové exprese u nádorů MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH