Hepatitis B virus uses e antigen (HBe), which is dispensable for virus infectivity, to modulate host immune responses and achieve viral persistence in human hepatocytes. The HBe precursor (p25) is directed to the endoplasmic reticulum (ER), where cleavage of the signal peptide (sp) gives rise to the first processing product, p22. P22 can be retro-translocated back to the cytosol or enter the secretory pathway and undergo a second cleavage event, resulting in secreted p17 (HBe). Here, we report that translocation of p25 to the ER is promoted by translocon-associated protein complex. We have found that p25 is not completely translocated into the ER; a fraction of p25 is phosphorylated and remains in the cytoplasm and nucleus. Within the p25 sp sequence, we have identified three cysteine residues that control the efficiency of sp cleavage and contribute to proper subcellular distribution of the precore pool.

• MeSH
• cystein metabolismus   MeSH
• endoplazmatické retikulum metabolismus   MeSH
• hepatitida B - antigeny e * metabolismus   MeSH
• hepatitida B * metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• membránové glykoproteiny MeSH
• proteiny - lokalizační signály genetika   MeSH
• proteiny vázající vápník MeSH
• receptory cytoplazmatické a nukleární MeSH
• receptory peptidů MeSH
• virus hepatitidy B metabolismus   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

Protein translocation across cell membranes is a ubiquitous process required for protein secretion and membrane protein insertion. In bacteria, this is mostly mediated by the conserved SecYEG complex, driven through rounds of ATP hydrolysis by the cytoplasmic SecA, and the trans-membrane proton motive force. We have used single molecule techniques to explore SecY pore dynamics on multiple timescales in order to dissect the complex reaction pathway. The results show that SecA, both the signal sequence and mature components of the pre-protein, and ATP hydrolysis each have important and specific roles in channel unlocking, opening and priming for transport. After channel opening, translocation proceeds in two phases: a slow phase independent of substrate length, and a length-dependent transport phase with an intrinsic translocation rate of ~40 amino acids per second for the proOmpA substrate. Broad translocation rate distributions reflect the stochastic nature of polypeptide transport.

• MeSH
• adenosintrifosfát metabolismus   MeSH
• adenosintrifosfatasy chemie   genetika   metabolismus   MeSH
• bakteriální proteiny chemie   genetika   metabolismus   MeSH
• buněčná membrána metabolismus   MeSH
• Escherichia coli genetika   metabolismus   MeSH
• fluorescenční mikroskopie metody   MeSH
• hydrolýza MeSH
• konformace proteinů MeSH
• molekulární modely MeSH
• mutace MeSH
• proteiny - lokalizační signály genetika   MeSH
• proteiny z Escherichia coli chemie   genetika   metabolismus   MeSH
• protonmotorická síla * MeSH
• translokační kanály SEC chemie   genetika   metabolismus   MeSH
• transport proteinů MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

The low density lipoprotein receptor (LDLR) is a transmembrane protein that plays a key role in cholesterol metabolism. It contains 860 amino acids including a 21 amino acid long signal sequence, which directs the protein into the endoplasmic reticulum. Mutations in the LDLR gene lead to cholesterol accumulation in the plasma and results in familial hypercholesterolemia (FH). Knowledge of the impact of a mutation on the LDLR protein structure and function is very important for the diagnosis and management of FH. Unfortunately, for a large proportion of mutations this information is still missing. In this study, we focused on the LDLR signal sequence and carried out functional and in silico analyses of two sequence changes, p.(Gly20Arg) and p.(Leu15Pro), localized in this part of the LDLR. Our results revealed that the p.(Gly20Arg) change, previously described as disease causing, has no detrimental effect on protein expression or LDL particle binding. In silico analysis supports this observation, showing that both the wt and p.(Gly20Arg) signal sequences adopt an expected α-helix structure. In contrast, the mutation p.(Leu15Pro) is not associated with functional protein expression and exhibits a structure with disrupted a α-helical arrangement in the signal sequence, which most likely affects protein folding in the endoplasmic reticulum.

• MeSH
• arginin chemie   MeSH
• CHO buňky MeSH
• Cricetulus MeSH
• endoplazmatické retikulum metabolismus   MeSH
• glycin chemie   MeSH
• heterozygot MeSH
• hyperlipoproteinemie typ II krev   genetika   MeSH
• konfokální mikroskopie MeSH
• křečci praví MeSH
• leucin chemie   MeSH
• lidé MeSH
• mutace MeSH
• prolin chemie   MeSH
• proteiny - lokalizační signály genetika   MeSH
• receptory LDL genetika   metabolismus   MeSH
• rodokmen MeSH
• sbalování proteinů MeSH
• sekundární struktura proteinů MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• křečci praví MeSH
• lidé MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Translokace chromozómů jsou prokázány u 50–70 % případů lidské leukémie. Gen kódující protein PML (promyelocytární leukémie) se účastní přestavby chromozómů t(15;17) u akutní promyelocytární leukémie (APL). Gen PML kóduje protein, který se koncentruje v PML-jaderných tělíscích. Histonacetyltransferázy a histondeacetylázy, proteiny modifikující chromatin, se také hromadí v těchto nukleárních tělíscích v komplexech s proteinem PML a svědčí o úloze těchto komplexů v regulaci transkripce. Prokázané interakce proteinu PML s transkripčními faktory, koaktivátory a korepresory transkripce odpovídají účasti PML v regulaci transkripce. PML hraje důležitou úlohu v apoptóze, proliferaci a stárnutí buněk. Gen pro PML je genem potlačujícím vznik nádorů (tumour suppressor gene) a produkt jeho exprese ovlivňuje v negativním smyslu buněčné množení. Všechny tyto aktivity proteinu PML jsou připisovány jeho funkcím v jádře buněk. Cytoplazmatická forma PML (cPML) je také velmi důležitá a má významnou roli v přenosu signálu transformačního růstového faktoru-β (TGF-β). Cytoplazmatický PML reaguje s dvěma receptory pro TGF-β (TβRI a TβRII) na povrchu buňky a tvoří můstek mezi proteinem SARA (Smad anchor of receptor activation) a proteiny Smad a je důležitý pro dopravu celého komplexu do raných endozómů v přenosu signálu TGF-β. Ztráta funkčního cPML vede nejen k APL, ale přispívá obecně k rezistenci buněk na TGF-β a vzniku nádorů.

Chromosome translocations are detected in 50-70 % of human leukaemia. The promyelocytic leukaemia (PML) gene is involved in the t(15;17) chromosomal translocation of acute promyelocytic leukaemia (APL). PML gene encodes a protein, which was shown to be concentrated in PML-nuclear bodies. Histone acetyltransferases and deacetylases, and chromatin-modifying proteins are accumulated in complexes with PML protein in these nuclear bodies giving the evidence of their role in transcription regulation. Physical interactions of PML protein with transcription factors, co-activators and co-repressors of transcription correspond with the role of PML in transcription regulation. PML plays an important role in apoptosis, proliferation and senescence of cells. PML gene is a tumour-suppressor gene and a product of its expression acts as a potent cell growth suppressor. All these activities of PML protein are ascribed to its nuclear functions. Cytoplasmic form of PML (cPML) is also very important and it is critical for transforming growth factor-β (TGF-β) signalling. Cytoplasmic PML interacts with two TGF-β receptors (TβRI and TβRII) and acts as a bridging factor between protein called Smad anchor of receptor activation (SARA) and Smad proteins and it plays a role in the transport of whole complex into the early endosomes in TGF-β signalling. The loss of functional cPML induces not only APL but it might influence behaviour of cancer cells and their resistance to TGF-β.

• MeSH
• akutní myeloidní leukemie genetika   patologie   MeSH
• cytoplazmatické struktury fyziologie   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• genetická transkripce MeSH
• geny MeSH
• lidé MeSH
• nádorové proteiny genetika   imunologie   MeSH
• proteiny - lokalizační signály genetika   MeSH
• transformující růstový faktor beta genetika   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

• MeSH
• Alzheimerova nemoc farmakoterapie   patologie   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• glykogensynthasa antagonisté a inhibitory   fyziologie   chemie   MeSH
• lithium farmakologie   fyziologie   terapeutické užití   MeSH
• proteiny - lokalizační signály fyziologie   genetika   MeSH
• sloučeniny lithia farmakologie   terapeutické užití   MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH
• srovnávací studie MeSH