The study investigated comparatively the effects of active immunization of Cetrorelix and Triptorelin on the follicle development, histological structures, and expressions of FSHR and LHR proteins in the ovary. One hundred and five female mice, 35 days old, and body weight of 26.56 ± 2.89 g, were randomly assigned into Cetrorelix (CET), Triptorelin (TRI) and control groups (CG). Mice in CET-1, CET-2 and CET-3 (n = 15) were subcutaneously injected with 0.1, 0.2 and 0.4 mL Cetrorelix antigen (100 μg/mL) for seven days, respectively. Mice in TRI-1, TRI-2 and TRI-3 were injected with 0.1, 0.2 and 0.4 mL Triptorelin antigen (100 μg/mL) for seven days. Mice in CG (n = 15) were injected with 0.2 mL saline for seven days. Western blotting was utilized to determine the expressions of follicle stimulating hormone receptor (FSHR) and luteinizing hormone receptor (LHR) proteins. ELISA was used to measure the serum FSH and LH concentrations. The ovarian slices were observed under optical microscopy. The results showed that the ovarian weights of CET and TRI groups increased slightly with a maximum increment of 27.02% of CET-1 mice on day 35. Ovarian weights in TRI group increased dose-dependently with a maximum increment of 45.77% in TRI-3 on day 35. The numbers of the primordial follicle (POF), primary follicle (PF), secondary follicle (SF) and mature follicle (MF) of CET and TRI groups increased at different degrees when compared to CG. The granular layer in SF was arranged tightly and zona pellucida (ZP) was thickened. Follicles developed fully. Follicle longitudinal diameter (FLD), follicle transverse diameter (FTD) and follicle wall thickness (FWT) in CET and TRI groups increased as compared to CG. FLD, FTD and FWT of TRI-3 had a larger increment than CG and CET-1 on days 21 and 35. Expression levels of FSHR and LHR proteins in TRI group increased when compared to CG. Expression levels of FSHR and LHR proteins of CET group decreased. Serum FSH of TRI group was slightly higher than the CG and CET group on day 21. On day 35, serum FSH levels of CET-1 and TRI-1 were greater than CG and the rest of the subgroups. Serum FSH levels had no significant differences among all groups. Expression levels of LHR and FSHR proteins in CET group had obvious negative correlations to FLD, FTD and FWT. However, in the TRI group, these correlations were positive. In conclusion, Cetrorelix and Triptorelin immunization could improve ovarian growth, increase the follicle numbers, enhance dose-dependently the FLD, FTD and FWT, and eventually promote the ovary and follicle development. Cetrorelix decreased expression levels of FSHR and LHR proteins in the ovaries of mice. Triptorelin enhanced expression levels of FSHR and LHR proteins. Triptorelin treatment had more obvious effects than Cetrorelix treatment.
- MeSH
- ELISA metody využití MeSH
- experimenty na zvířatech MeSH
- financování organizované MeSH
- folikuly stimulující hormon MeSH
- hormon uvolňující gonadotropiny * antagonisté a inhibitory terapeutické užití MeSH
- imunizace * metody trendy využití MeSH
- laboratorní zvířata MeSH
- luteinizační hormon genetika účinky léků MeSH
- myši MeSH
- ovariální folikul cytologie imunologie účinky léků MeSH
- statistika jako téma MeSH
- studie případů a kontrol MeSH
- triptorelin-pamoát * aplikace a dávkování terapeutické užití MeSH
- western blotting metody využití MeSH
- Check Tag
- myši MeSH
- ženské pohlaví MeSH
Silibinin is known to display high efficacy against cancer cells and for hepatic protection. Metformin, a well-known antidiabetic agent, has recently been reported to inhibit cancer. In the present study, we investigated the effect of metformin on silibinin-induced programmed cell death in cervical cancer cells (C-33A). MTT assay and Western blot assays were performed to quantify cell viability and the expression of signaling proteins, respectively. Combined treatment with metformin and silibinin decreased cell survival in synergistic manner in C-33A cells at a dose that did not affect nonmalignant cells (HUVECs). Silibinin and metformin increased PTEN and AMPK expression in C-33A cells, respectively. Combined treatment caused a greater increase in the expression of activated caspase-3 or AIF, indicating apoptosis. Combined treatment with silibinin and metformin may induce programmed cell death of human cervical cancer cells at a dose that does not affect HUVECs. This finding reveals a potential therapeutic strategy of cervical cancer.
- MeSH
- apoptóza * fyziologie genetika účinky léků MeSH
- buněčná smrt * fyziologie genetika účinky léků MeSH
- cytotoxické testy imunologické metody trendy využití MeSH
- endoteliální buňky pupečníkové žíly (lidské) cytologie účinky léků MeSH
- faktor vyvolávající apoptózu diagnostické užití účinky léků MeSH
- kaspasa 3 imunologie účinky léků MeSH
- lidé MeSH
- metformin farmakologie terapeutické užití MeSH
- nádorové buňky kultivované cytologie účinky léků MeSH
- nádory děložního čípku enzymologie farmakoterapie genetika MeSH
- rostlinné extrakty * aplikace a dávkování metabolismus škodlivé účinky MeSH
- silymarin aplikace a dávkování škodlivé účinky terapeutické užití MeSH
- statistika jako téma MeSH
- western blotting využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- MeSH
- extracelulárním signálem regulované MAP kinasy * analýza MeSH
- histologické techniky MeSH
- homocystein * analýza aplikace a dávkování škodlivé účinky MeSH
- hyperhomocysteinemie * chemicky indukované patofyziologie MeSH
- infarkt myokardu * etiologie MeSH
- interpretace statistických dat MeSH
- kardiomyocyty * fyziologie patologie MeSH
- matematické výpočty počítačové MeSH
- mitogenem aktivované proteinkinasy kinas * analýza MeSH
- potkani Wistar MeSH
- srdce fyziologie patofyziologie MeSH
- western blotting metody využití MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- mužské pohlaví MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Western blotting je běžně používanou laboratorní technikou pro přenos nejčastěji elektroforeticky rozdělených proteinů na membránu. Efektivita přenosu je ovlivněna několika aspekty - např. typem membrány, podmínkami přenosu. Western blotting se používá pro validaci metod kapalinové chromatografie a metod elektroforetických.
Western blotting is a method commonly used to transfer proteins mostly separated by gel electrophoresis to a membrane. The efficiency of the transfer is affected by several aspects, e.g., membrane type, blotting conditions. Western blotting is mainly used for liquid chromatography and electrophoretic methods validation.
- Klíčová slova
- podmínky přenosu,
- MeSH
- membrány MeSH
- molekulární sondy - techniky MeSH
- western blotting metody přístrojové vybavení využití MeSH
Our present study aimed to investigate the effect of lentiviral-mediated RNAi using short hairpin RNA (shRNA) targeting Smad4 on TGF-beta1 induced fibrosis. shRNAs targeting Smad4 were designed and the most efficient shRNA was screened. This shRNA was introduced into a lentiviral vector which was used to infect C2C12 myoblasts, and then the Smad4 expression was detected. Cells were divided into: C2C12 cells group, TGF-beta1 induction group, transfection group, and transfection after TGF-beta1 induction group. C2C12 myoblasts were transfected with lentivirus carrying Smad4-shRNA and treated with TGF-beta1 to induce the differentiation into myofibroblasts. Fluorescence Real-time-PCR and the western blot assay were employed to detect the expressions of collagen I and alpha-SMA. The results showed that the protein and mRNA expression of Smad4 in the C2C12 cells transfected with Smad4-shRNA1 was significantly reduced when compared with C2C12 before transfection. In the TGF-beta1 induction group, the mRNA expressions of alpha-SMA and collagen I were significantly increased as compared to the C2C12 cells group. In the transfection after TGF-beta1 induction group, the mRNA expressions of alpha-SMA and collagen I were significantly increased compared to the transfection group, and the protein expressions significantly increased, respectively. In the transfection after TGF-beta1 induction group, the mRNA expressions of alpha-SMA and collagen I were significantly decreased compared to the TGF-beta1 induction group, and the protein expressions significantly reduced, respectively. The results indicate that suppression of Smad4 expression can efficiently inhibit the TGF-beta1 induced fibrosis in myoblasts. The findings suggest Smad4 may become a novel target for the treatment of skeletal muscle fibrosis.
- MeSH
- barvení a značení metody využití MeSH
- fibróza genetika komplikace terapie MeSH
- financování organizované MeSH
- fluorescenční mikroskopie využití MeSH
- kosterní svaly cytologie zranění MeSH
- lidé MeSH
- malá interferující RNA genetika metabolismus MeSH
- myoblasty kosterní cytologie fyziologie patologie MeSH
- polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí metody využití MeSH
- protein Smad4 genetika metabolismus MeSH
- satelitní buňky kosterního svalu fyziologie metabolismus MeSH
- statistika jako téma MeSH
- transformující růstový faktor beta1 genetika metabolismus MeSH
- western blotting využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Many stress conditions are accompanied by skeletal muscle dysfunction and regeneration, which is essentially a recapitulation of the embryonic development. However, regeneration usually occurs under conditions of hypothalamus-pituitary-adrenal gland axis activation and therefore increased glucocorticoid (GC) levels. Glucocorticoid receptor (GR), the main determinant of cellular responsiveness to GCs, exists in two isoforms (GRalpha and GRbeta) in humans. While the role of GRalpha is well characterized, GRbeta remains an elusive player in GC signalling. To elucidate basic characteristics of GC signalling in the regenerating human skeletal muscle we assessed GRalpha and GRbeta expression pattern in cultured human myoblasts and myotubes and their response to 24-hour dexamethasone (DEX) treatment. There was no difference in GRalpha mRNA and protein expression or DEX-mediated GRalpha down-regulation in myoblasts and myotubes. GRbeta mRNA level was very low in myoblasts and remained unaffected by differentiation and/or DEX. GRbeta protein could not be detected. These results indicate that response to GCs is established very early during human skeletal muscle regeneration and that it remains practically unchanged before innervation is established. Very low GRbeta mRNA expression and inability to detect GRbeta protein suggests that GRbeta is not a major player in the early stages of human skeletal muscle regeneration.
- MeSH
- buněčné kultury metody MeSH
- dexamethason terapeutické užití MeSH
- exprese genu genetika MeSH
- financování organizované MeSH
- glukokortikoidy genetika metabolismus MeSH
- kvantitativní polymerázová řetězová reakce využití MeSH
- lidé MeSH
- muskuloskeletální systém patofyziologie MeSH
- myoblasty kosterní fyziologie patologie účinky léků MeSH
- psychický stres metabolismus patofyziologie patologie MeSH
- receptory glukokortikoidů genetika metabolismus MeSH
- statistika jako téma MeSH
- vývoj svalů fyziologie genetika účinky léků MeSH
- western blotting využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Cíl: Cílem práce bylo prokázat přítomnost solubilní formy CA IX proteinu (s-CA IX) v kultivačním médiu nádorových buněk in vitro a v tělních tekutinách in vivo u CA IX protein pozitivních nádorů. Následně přizpůsobit současné diagnostické metody ke stanovení s-CA IX a pokusit se zjistit jeho možný význam jako markeru u adenokarcinomu ledviny (RCC) a uroteliálních karcinomů (TCC). Materiál a metoda: Do studie jsme zahrnuli dvě skupiny: 1. nemocní s RCC, 2. nemocní s TTC vývodných močových cest. V první skupině bylo testováno 31 pacientů s RCC a 61 kontrol, ve druhé 32 pacientů s endoskopickým podezřením na TCC a 16 kontrol. K průkazu CA IX antigenu ve vzorcích nádorů jsme použili imunohistochemické barvení pomocí monoklonální protilátky M75. V extraktech z nádorů a v tělních tekutinách jsme přítomnost CA IX stanovovali metodou "Western blot" nebo ELISA. Výsledky: V 1. skupině jsme v séru přítomnost s-CA IX zjistili pouze v podskupině s prokázaným RCC. Z 31 vzorků jich bylo 13 (41,9%) pozitivních. V moči v podskupině s RCC byl s-CA IX protein prokázán u 19 (70 %) z 27 vzorků. V kontrolní skupině byly všechny vzorky s-CA IX negativní. Ve 2. skupině byl TCC histologicky prokázán u 23 nemocných. Pozitivní nález s-CA IX v moči byl u 16 z nich (69,6 %). Negativní nález s-CA IX byl u 7 (30, 4%) nemocných. U žádného z TCC pozitivních pacientů jsme v séru s-CA IX antigen neprokázali. Závěr: Naše práce prokázala uvolňování CA IX do tělních tekutin u nemocných s RCC a TCC a možnost jeho detekce. Western blot v kombinaci s použitím zvýšené chemiluminiscence je specifickou a vysoce citlivou metodou pro laboratorní hodnocení, avšak je to technika pracná a časově náročná. Současné výsledky ukazují, že by se dalo uvažovat o vyvinutí vhodné kvantitativní metody pro stanovení s-CA IX, jež by umožnila zpracování větších souborů nemocných ke zhodnocení klinického významu jeho exprese u nemocných s RCC a TCC.
Aim: The aim of our study was to investigate the presence of soluble CA IX protein (s-CA IX) in tumor culture media in vitro and body fluids of patients carrying CA IX protein positive tumors. The final purpose was to improve present diagnostic methods to s-CA IX detection and to determine its possible use as a marker of renal clear cell carcinoma (RCC) and transitional cell carcinoma (TCC). Material and methods: In the preliminary study were two groups of patients: 1. RCC patients, 2. TCC patients. In the first group were included 31 RCC patients and 61 controles, in the second group 32 patients with endoscopic suspicion for TCC and 16 controles. We used immunohistochemical staining employing MAb M75 for CA IX identification in tumor tissue. In tumor extracts and body fluids we used Western blotting and ELIS A for quantitation of the s-CA IX protein. Results: In the RCC group s-CA IX protein was detected only in patients with proven RCC. In the blood 13 (41,9%) from 31 were positive. In urine 19 (70%) from 27 were CA IX protein positive. Control specimens were all s-CA IX negative. In the TCC group the tumor was identified in 23 patients histologically Positive s-CA IX was in 16 (69,6%) of them. Negative finding of s-CA IX was in 7 (30,4%) patients. Serum from all TCC patients was s-CA IX negative, even the serum from patients with CA IX positive urine. Conclusion: We demonstrated shedding of CA IX into body fluids in patients with RCC and TCC, although in exremely low concentrations. Nevertheless, Western blotting combined with enhanced chemiluminiscence is specific and extremely sensitive method allowing s-CA IX detection in body fluids. Our present data suggest that suitable quantitave method for s-CA IX detection should be developed, which in turn will enable evaluation of clinical significance of CA IX expression in RCC and TCC patients.
- Klíčová slova
- uroteliální nádory vývodných močových cest,
- MeSH
- antigeny nádorové izolace a purifikace krev moč MeSH
- ELISA využití MeSH
- financování organizované MeSH
- karboanhydrasy izolace a purifikace krev moč MeSH
- karcinom z přechodných buněk diagnóza enzymologie etiologie MeSH
- karcinom z renálních buněk diagnóza MeSH
- lidé MeSH
- nádorové biomarkery izolace a purifikace krev moč MeSH
- nádorové proteiny izolace a purifikace krev moč MeSH
- nádory ledvin diagnóza MeSH
- nádory močového měchýře diagnóza MeSH
- studie případů a kontrol MeSH
- urotel patologie MeSH
- western blotting využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
The present study aimed to investigate the roles of fibrin deposition and protease activated receptor-1 (PAR-1) in renal cytokine/chemokine production and inflammatory cell infiltration in rats of different ages. Acute inflammation was induced by lipopolysaccharide (LPS) in rats which were then treated with tranexamic acid (TA), TA+urokinase (UK) or TA+low-molecular-weight heparin (HP). Fibrin deposition, inflammatory cells and expressions of PAR-1, monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) and intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) were detected. A reduction in fibrin deposition and PAR-1 expression in the LPS+TA+HP group was associated with decreased infiltration of inflammatory cells and down-regulated expressions of MCP-1 and ICAM-1. In the LPS+TA+UK group, the fibrin deposition, but not the PAR-1 expression, was reduced, However, the infiltration of inflammatory cells decreased and the expressions of MCP-1 and ICAM-1 down-regulated. There were significant differences in the fibrin deposition, infiltration of inflammatory cells and expression of PAR-1, MCP-1 and ICAM-1 between young and old rats undergoing the same treatment. These findings demonstrated that fibrin deposition plays more important roles than PAR-1 dose in cytokine/chemokine production and inflammatory cell infiltration in vivo, and ageing may deteriorate the fibrin deposition-induced production of cytokines/chemokines and infiltration of inflammatory cells.
- MeSH
- barvení a značení metody využití MeSH
- chemokiny chemie izolace a purifikace účinky léků MeSH
- cytokiny chemie účinky léků MeSH
- experimenty na zvířatech MeSH
- fibrin chemie účinky léků MeSH
- financování organizované MeSH
- hemokoagulace genetika imunologie MeSH
- ledviny cytologie enzymologie účinky léků MeSH
- northern blotting metody využití MeSH
- potkani Wistar MeSH
- receptor PAR-1 genetika imunologie účinky léků MeSH
- stárnutí MeSH
- statistika jako téma MeSH
- western blotting metody využití MeSH
- zánět MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- ženské pohlaví MeSH
- zvířata MeSH
- MeSH
- 2D gelová elektroforéza metody využití MeSH
- bakteriální proteiny analýza izolace a purifikace metabolismus MeSH
- chromatografie afinitní metody využití MeSH
- chromatografie MeSH
- financování organizované MeSH
- glykoproteiny analýza izolace a purifikace metabolismus MeSH
- glykosylace MeSH
- hmotnostní spektrometrie metody využití MeSH
- lidé MeSH
- polysacharidy chemie izolace a purifikace metabolismus MeSH
- western blotting metody využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Řada pacientů alergických na pyl břízy v oblastech střední a severní Evropy trpí po požití čerstvých jablek projevy orálního alergického syndromu. Tento typ alergické reakce na jablka způsobuje zkřížená reaktivita IgE protilátek mezi hlavním alergenem břízy Bet v 1 a hlavním alergenem jablka Mal d 1. Je známo, že závažnost alergické reakce na jablka závisí nejen na specifické senzibilizaci pacienta, ale je závislá i na jablečné odrůdě. Výběr jablečných odrůd se sníženým obsahem Mal d1 může přispět ke snížení rizika vzniku klinických potíží u polinotiků s alergickou reakcí na jablka a může pomoci se zařazením některých jablek do stravy. U pacientů s prokázanou alergií na jablka byla hodnocena alergenicita vybraných 17 odrůd jablek kožními testy metodou prick to prick. Pro laboratorní vyšetření, test aktivace bazofilů, byla použita vylisovaná jablečná šťáva. Intenzita alergické reakce na jednotlivé odrůdy byla potvrzena SDS-PAGE elektroforézou a imunitní reakcí krevního séra metodou Western blot. V naší práci jsme potvrdili, že různé odrůdy jablek obsahují odlišné množství alergenu Mal d1. U odrůd Boskoopské, Florina, Topaz a Angold byla prokázána nejnižší reaktivita, lze je zařadit mezi kultivary s nízkou alergenicitou. Nejvyšší alergenicita byla zjištěna u odrůd Hetlina a Resista.
Many birch pollen sensitized patients in Central and Northern Europe suffer from oral allergy symptoms after eating fresh apples. This type of apple allergy is caused by cross reactivity of IgE antibodies against the major birch pollen allergen Bet v 1 with Mal d 1. It is known, that severity of allergic reaction to apples was not only related to the specific sensitivity of the individual, but also largely depended on the apple cultivar. Selection of apple cultivars could help for reduction of symptoms in patient with birch pollen-apple allergy and might offer Mal d1 reactive patients a safe way to reintroduce apples to their diets. Using 17 selected apple cultivars, the allergenicity was studied by prick to prick tests in patients. Pressed apple juice was used for laboratory evaluation, basophil activation test. Intensity of patient’s allergic reaction to particular cultivars was confirmed by SDS-PAGE electrophoresis and immunity reaction of blood serum by Western blot method. We demonstrated, that different cultivars of apples have different amount of Mal d 1. Cultivars Boskoop, Florina, Topaz and Angold were classified as cultivars with low allergenicity. Hetlina and Resista apples showed the highest allergenicity.
- Klíčová slova
- jablečné odrůdy, Mal d 1, prick to prick, BAT, immunoblotting,
- MeSH
- antigeny rostlinné izolace a purifikace škodlivé účinky MeSH
- bazofily imunologie účinky léků MeSH
- bříza imunologie škodlivé účinky MeSH
- elektroforéza v polyakrylamidovém gelu metody využití MeSH
- financování organizované MeSH
- hodnotící studie jako téma MeSH
- kožní testy metody využití MeSH
- lidé MeSH
- ovoce škodlivé účinky účinky léků MeSH
- potravinová alergie diagnóza MeSH
- pyl imunologie škodlivé účinky MeSH
- statistika jako téma MeSH
- western blotting metody využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
