BACKGROUND: In cystic fibrosis newborn screening (CFNBS), immunoreactive trypsinogen (IRT) and pancreatitis-associated protein (PAP) can be used as screening parameters. We evaluated the IRT×PAP product as second-tier parameter in CFNBS in newborns with elevated IRT. METHODS: Data on 410,111 screened newborns including 78 patients with classical cystic fibrosis (CF) from two European centers were retrospectively analyzed by discrimination analysis to identify a screening protocol with optimal cutoffs. We also studied differences in PAP measurement methods and the association of IRT and PAP with age. RESULTS: PAP values differed systematically between fluorometric and photometric assays. The IRT×PAP product showed better discrimination for classical CF than PAP only as second-tier screening parameter (p<0.001). In CF patients, IRT decreased while PAP values remained high over years. In newborns without CF, IRT decreased after birth over weeks while PAP increased within days. CONCLUSIONS: The IRT×PAP product performs well as second-tier cutoff parameter for CFNBS. Screening quality parameters depend on the analytic method and on age at blood collection.

• MeSH
• chemické techniky analytické MeSH
• cystická fibróza * krev   diagnóza   MeSH
• lidé MeSH
• novorozenec MeSH
• novorozenecký screening metody   MeSH
• proteiny asociované s pankreatitidou analýza   MeSH
• retrospektivní studie MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• trypsinogen * analýza   imunologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• novorozenec MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Cystic fibrosis (CF) is a life-threatening disease for which early diagnosis following newborn screening (NBS) improves the prognosis. We performed a prospective assessment of the immunoreactive trypsinogen (IRT)/DNA/IRT protocol currently in use nationwide, versus the IRT/pancreatitis-associated protein (PAP) and IRT/PAP/DNA CF NBS protocols. Dried blood spots (DBS) from 106,522 Czech newborns were examined for IRT concentrations. In the IRT/DNA/IRT protocol, DNA-testing was performed for IRT ≥ 65 ng/mL. Newborns with IRT ≥ 200 ng/mL and no detected cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene (CFTR) mutations were recalled for a repeat IRT. In the same group of newborns, for both parallel protocols, PAP was measured in DBS with IRT ≥ 50 ng/mL. In PAP-positive newborns (i.e., ≥1.8 if IRT 50-99.9 or ≥1.0 if IRT ≥ 100, all in ng/mL), DNA-testing followed as part of the IRT/PAP/DNA protocol. Newborns with at least one CFTR mutation in the IRT/DNA/IRT and IRT/PAP/DNA protocols; a positive PAP in IRT/PAP; or a high repeat IRT in IRT/DNA/IRT were referred for sweat testing. CONCLUSION: the combined results of the utilized protocols led to the detection of 21 CF patients, 19 of which were identified using the IRT/DNA/IRT protocol, 16 using IRT/PAP, and 15 using IRT/PAP/DNA. Decreased cut-offs for PAP within the IRT/PAP protocol would lead to higher sensitivity but would increase false positives. Within the IRT/PAP/DNA protocol, decreased PAP cut-offs would result in high sensitivity, an acceptable number of false positives, and would reduce the number of DNA analyses. Thus, we concluded that the IRT/PAP/DNA protocol would represent the most suitable protocol in our conditions.

• MeSH
• antigeny nádorové krev   MeSH
• biologické markery krev   MeSH
• cystická fibróza krev   diagnóza   genetika   MeSH
• falešně negativní reakce MeSH
• falešně pozitivní reakce MeSH
• genetické markery MeSH
• klinické protokoly MeSH
• lektiny typu C krev   MeSH
• lidé MeSH
• mutační analýza DNA MeSH
• nádorové biomarkery krev   MeSH
• novorozenec MeSH
• novorozenecký screening metody   MeSH
• pot chemie   MeSH
• prospektivní studie MeSH
• protein CFTR genetika   MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• test suché kapky krve MeSH
• trypsinogen krev   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• novorozenec MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• klinické zkoušky MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• srovnávací studie MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

Diagnóza cystické fibrózy (CF) novorozeneckým screeningem je důležitá, protože umožňuje včasné zahájení léčby, genetického poradenství a specializované terapie. Novorozenecký screening se skládá z analýzy imunoreaktivního trypsinogenu (IRT), genetické analýzy DNA a obsahu chloridů pomocí potního testu. Potní test je považován za tzv. zlatý standard v diagnostice CF. Výsledky potního testu v tzv. šedé zóně (Cl-: 30-60 mmol/L) a genetické analýzy ovšem někdy vedou k nejednoznačnému diagnostickému závěru (CFSPID). V tomto projektu navrhujeme validaci nové metody analýzy potu, založené na neinvazivním, rychlém a jednoduchém stěru předloktí. Ve vzorku budou analyzovány poměry vybraných iontů (Cl-, K+, Na+, HCO3-) které mají významný potenciál pro zlepšení diagnostiky CF. Je plánováno na statisticky významném souboru pacientů a zdravých kontrol vyhodnotit důležité parametry (citlivost, specificita, opakovatelnost, atd.) a vytvořit databázi iontových poměrů , určení korelace s typem genetické mutace, vážností onemocnění a dalšími symptomy, umožňujícímu zlepšení klasifikace CF pacientů.; An early diagnosis of cystic fibrosis (CF) through newborn screening programmes (NBSP) is very important to initiate the treatment, genetic counseling, and specialized medical services. NBSP consists of immunoreactive trypsinogen (IRT) analysis, DNA analysis and sweat test. Sweat test is a golden standard, but many patients fall into the inconclusive diagnosis (CFSPID) due to the intermediate chloride levels (30-60 mmol/L) and unclear DNA analysis. We propose the validation of an improved method, based on non-invasive skin wipe sampling and analysis of all ions in the samples. We propose the use of ion ratios of selected ions (Cl-, K+, Na+, HCO3-) as a relevant diagnostic parameter and aim at evaluation of sensitivity, selectivity and repeatability of the method. We further propose creation of a ion ratio database of a large cohort of subjects during the NBSP as well as adult CF patients and controls to identify possible correlations between the type of mutation, severity and other symptoms with data obtained from the skin wipe samples to improve classification of CF patients.

• MeSH
• chloridy MeSH
• cystická fibróza diagnóza   MeSH
• genetické testování MeSH
• ionty MeSH
• klinické chemické testy MeSH
• novorozenec MeSH
• novorozenecký screening MeSH
• pot MeSH
• reprodukovatelnost výsledků MeSH
• Check Tag
• novorozenec MeSH

• Konspekt
• Pediatrie
• NLK Obory
• perinatologie a neonatologie
• genetika, lékařská genetika
• pneumologie a ftizeologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Pomocí celoplošného novorozeneckého laboratorního screeningu ze suché kapky krve (SKK) na filtračním papírku jsou od roku 1975 vyhledáváni pacienti s fenylketonurií/hyperfenylalaninemií (PKU/HPA); od roku 1985 s vrozenou hypotyreózou (CH); od roku 2006 s kongenitální adrenální hyperplazií (CAH) a od X/2009 pacienti s cystickou fibrózou (CF) a 9 dalšími dědičnými poruchami metabolismu – leucinózou (MSUD), glutarovou acidurií typu I (GA I), izovalerovou acidurií (IVA), deficitem dehydrogenázy acyl-CoA se středně dlouhým, 3-hydroxyacyl-CoA s dlouhým a acyl-CoA s velmi dlouhým řetězcem (MCADD, LCHADD a VLCADD), deficitem karnitinpalmitoyltransferázy I a II (CPTD I a II) a deficitem karnitinacylkarnitintranslokázy (CACTD). Metodika: V období od 1. ledna 2002 až do 31. prosince 2012 bylo vyšetřeno 1 179 136 novorozenců na PKU//HPA a CH; koncentrace fenylalaninu byla měřena různými metodami a od X/2009 jednotně tandemovou hmotnostní spektrometrií (MS/MS); koncentrace tyreotropinu byla zjišťována pomocí fluoroimunoeseje (FIA). U 752 922 novorozenců byla změřena koncentrace 17-hydroxyprogesteronu pomocí FIA. U 367 114 dětí byl změřen imunoreaktivní trypsin (IRT) pomocí FIA a u 1,05 % novorozenců s nejvyšším IRT bylo vyšetřeno v prvotních SKK 32 a později 50 nejčastějších mutací v genu CFTR s cílem minimalizovat falešnou pozitivitu. U 362 653 novorozenců byly analyzovány metabolity pro záchyt dalších 9 dědičných metabolických poruch pomocí MS/MS. Výsledky: Celkem bylo novorozeneckým screeningem zachyceno 646 pacientů s následně potvrzenou diagnózou. Screeningové prevalence jednotlivých nemocí byly následující CH 1:3562; CAH 1:12 343; CF 1:7060; PKU/HPA 1:7234; MCADD 1:17 269; LCHADD 1:51 808; VLCADD 1:90 663; GA I 1:120 884; MSUD a IVA shodně 1:181 327. Screeningem dosud nebyl zachycen žádný novorozenec s CPTD I, II a CACTD. Efektivita screeningového programu v ČR se zvyšovala, kumulativní četnost záchytů narůstala z 1:2701 v letech 2002–2005 přes 1:2072 v letech 2007–2008 až na 1:1138 po zásadním rozšíření novorozeneckého screeningu (NS) v roce 2009. Četnost falešné pozitivity (FPR) činila 0,540 % , z toho 74 % reprezentuje NS CAH. Závěr: NS je účinný nástroj sekundární prevence vzácných onemocnění s účinnou léčbou. Pro optimalizaci programu se zavádějí druhostupňová vyšetření u malého množství vzorků s cílem snížit falešnou pozitivitu a hledají se možnosti rozšíření spektra screenovaných chorob.

The nationwide newborn screening (NBS) using dried blood spots (DBS) was started in 1975 for phenylketonuria//hyperphenylalaninemia (PKU/HPA); in 1985 for congenital hypothyroidism (CH); in 2006 for congenital adrenal hyperplasia (CAH) and in X/2009 screening for cystic fibrosis (CF) and 9 inherited metabolic diseases – maple syrup urine disease (MSUD), glutaric aciduria type I (GA I), isovaleric aciduria (IVA), medium chain acyl-CoA, long chain 3-hydroxyacyl-CoA and very long chain acyl-CoA dehydrogenase deficiency (MCADD, LCHADD and VLCADD), carnitine palmitoyltransferase I and II deficiency (CPTD I and II) and carnitine-acylcarnitine translocase deficiency (CACTD) was mandated. Methods: From 1st January 2002 through 31st December 2012 a total of 1 179,136 newborns were screened for PKU//HPA and CH; phenylalanine was measured by different methods, since X/2009 solely by tandem mass spectrometry (MS/MS); the levels of thyreotropin were measured by fluoroimmunoassay (FIA). The of 17-hydroxyprogesterone concentrations were determined in 752,922 newborns by FIA. The level of immunoreactive trypsinogen (IRT) was measured in 367,114 newborns by FIA and the CFTR gene (at first 32, later 50 most common mutations) was analysed in original DBS in 1.05% of newborns with the highest IRT levels to minimize false positive results. The spectrum of metabolites for 9 expanded inborn errors of metabolism was analysed in 362,653 newborns by MS/MS. Results: NS detected in total 646 patients with subsequently confirmed diagnosis. Screening prevalence were as follows PKU/HPA 1:7,234; CH 1:3,562; CAH 1:12,343; CF 1:7,060; MCADD 1:17,269; LCHADD 1:51,808; VLCADD 1:90,663; GA I 1:120,884; MSUD and IVA both 1:181,327. No case of CPTD I and CPTDII/CACTD was detected. Efficacy of NBS increased with the expansion of diseases in the programme: detection rate rose from 1:2,701 in 2002–2005 over 1:2,072 in 2007–2008 to 1:1,138 after last expansion of NBS in 2009. False positive rate (FPR) was 0.540%, of which 74% represent results of CAH screening. Conclusion: NBS is an effective approach for presymptomatic detection of serious rare diseases. Further optimization is a subject of current research including the introduction of additional analytical tests (second tiers) to reduce FPR and by further expanding of screened disorders.

• MeSH
• biochemická analýza krve MeSH
• falešně negativní reakce MeSH
• falešně pozitivní reakce MeSH
• fenylketonurie MeSH
• kongenitální hypotyreóza MeSH
• krev MeSH
• lidé MeSH
• novorozenec MeSH
• novorozenecký screening * MeSH
• plošný screening * MeSH
• porodní hmotnost MeSH
• prevalence MeSH
• vrozené vady diagnóza   MeSH
• vzácné nemoci diagnóza   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• novorozenec MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH