• MeSH
• Peptides MeSH
• In Vitro Techniques MeSH
• Viral Proteins MeSH

• MeSH
• Biochemical Phenomena MeSH
• Proteins MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• biochemie
• NML Publication type
• elektronické časopisy

Chronické zánětlivé reakce probíhající v cévní stěně jsou podkladem vzniku aterosklerózy. C-reaktivní protein je snadno měřitelným ukazatelem aktivity těchto zánětlivých reakcí. Současně je CRP i jejich aktivním účastníkem. Postavení CRP v patogenezi aterosklerózy je dvojjediné: na samém počátku aterosklerotického procesu vykazuje CRP protizánětlivé účinky, které chrání cévní stěnu před ukládáním aterogenních lipoproteinů. Genetická dispozice organismu a vliv zevních rizikových faktorů mění tyto původně ochranné účinky CRP v účinky prozánětlivé, které podporují rozvoj aterosklerózy. Ochranné, protizánětlivé působení i prozánětlivé, aterogenní působení CRP je založeno na aktivaci komplementové kaskády. Ochranné působení CRP spočívá v aktivaci komplementu na úroveň fragmentů C3b/iC3b. Podmínkou je účast regulačního faktoru H. CRP může také přímo indukovat tvorbu membránových regulačních faktorů, mezi nimiž vyniká decay-accelerating factor. Membránové regulační faktory tvoří součást buněčných membrán, na prvním místě jmenujme membrány endotelových buněk, které tak jsou chráněny před autodestruktivními účinky aktivovaného komplementu. K plazmatickým regulačním faktorům se rovněž počítá clusterin/ apolipoproteinJ. Podle nových poznatků však tento působek patří mezi tzv. stresové proteiny, které se vyznačují celkově ochranným působením na buněčné struktury. Ochranné působení CRP založené na spolupráci s regulátory aktivace komplementu má obdobu v terapeutických účincích inhibitorů enzymu HMGCoA reduktázy neboli statinů.

Chronic inflammatory reactions which affect the arterial wall can be viewed as an underlying cause of atherosclerosis. C-reactive protein is an easily measurable marker which reflects the activity of inflammatory responses. At the same time, CRP represents an active partaker of the inflammatory process. The role CRP plays in the pathogenesis of atherosclerosis is ambivalent: at the very beginning, it displays anti-inflammatory properties which contribute to the protection of the arterial wall from atherogenic lipoproteins. Later on, genetic disposition of the host and the influence of many known risk factors convert CRP’s antiinflammatory activity into a net pro-inflammatory effect which boosts the development of atherosclerosis. Both the protective anti-inflammatory and the noxious pro-inflammatory activities of CRP reside in its capacity to activate the complement cascade. The protective effect of CRP, which is dependent on the plasmatic regulatory factor H, is carried out by the activation of complement up to the level of fragments C3b/iC3b. Further, CRP directly induces production of the complement membrane regulatory proteins, most important of which is the decay-accelerating factor. Membrane regulatory factors form an integral part of the outer cellular membrane, most importantly that of endothelial cells, resulting in protection of the latter from autodestructive attacks inflicted by activated complement. One of the complement regulatory factors is represented by clusterin/apolipoproteinJ. However, according to recent studies, clusterin/apoJ belongs rather to a group of stress proteins, which display overall protective effects on cellular protein structures. Protective activities of CRP based on its cooperation with complement regulatory factors are closely mimicked by the HMG-CoA reductase inhibitors or statins.

• MeSH
• Arteriosclerosis immunology   MeSH
• C-Reactive Protein immunology   MeSH
• Complement System Proteins immunology   MeSH
• Humans MeSH
• Membrane Proteins immunology   MeSH
• Hydroxymethylglutaryl-CoA Reductase Inhibitors pharmacology   MeSH
• Inflammation immunology   MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH
• Publication type
• Review MeSH

K udržování buněčné homeostázy je nutné, aby buněčné proteiny vytvářely složité a dynamické molekulární komplexy. Proto je i vysvětlení základních fyziologických procesů na molekulární úrovni založeno na studiu protein‑proteinových interakcí. Nejdříve probíhá kvalitativní analýza proteinových komplexů. Následně jsou identifikované proteinové interakce kvantifikovány po bio­chemické stránce. Detailní informace o strukturní podstatě daných protein‑proteinových interakcí pak mohou být získány pomocí krystalografických metod. Náhled do uspořádání proteinových komplexů na molekulární úrovni umožňuje racionálně navrhovat nové syntetické látky, které cíleně ovlivňují proteinové interakce a tím i nejrůznější fyziologické nebo patologické procesy. Tato souhrnná práce je zaměřena na popis nejčastěji používaných metod pro kvalitativní i kvantitativní hodnocení proteinových interakcí. Metody koimunoprecipitace (Co‑IP) a afinitní koprecipitace je možné využít jako prvotní nástroj pro identifikaci interakčních partnerů studovaného proteinu. Detailní bio­chemická analýza mezimolekulární interakce pak vyžaduje definování kinetických a termodynamických parametrů. Pro studium afinity dvou interakčních partnerů a kinetiky reakce je možné použít metodu rezonance povrchového plazmonu (surface plasmon resonance – SPR), pro studium afinity a inhibičního potenciálu inhibitorů metodu fluo­rescenční polarizace (FP) a pro detailní popis afinity a termodynamických parametrů interakce (∆G, ∆H a ∆S) metodu izotermální titrační kalorimetrie (isothermal titration calorimetry – ITC). Výzkum proteinových interakcí na molekulární úrovni je nejen významný pro základní výzkum, ale přináší i nové metodické přístupy, které otvírají další možnosti při racionálním navrhování nových terapeutických látek.

In order to maintain cellular homeostasis, cellular proteins coexist in complex and variable molecular assemblies. Therefore, understanding of major physiological processes at molecular level is based on analysis of protein‑protein interaction networks. Firstly, composition of the molecular assembly has to be qualitatively analyzed. In the next step, quantitative bio­chemical properties of the identified protein‑protein interactions are determined. Detailed information about the protein‑protein interaction interface can be obtained by crystallographic methods. Accordingly, the insight into the molecular architecture of these protein‑protein complexes allows us to rationally design new synthetic compounds that specifically influence various physiological or pathological processes by targeted modulation of protein interactions. This review is focused on description of the most used methods applied in both qualitative and quantitative analysis of protein‑protein interactions. Co‑immunoprecipitation and affinity co‑precipitation are basic methods designed for qualitative analysis of protein binding partners. Further bio­chemical analysis of the interaction requires definition of kinetic and thermodynamic parameters. Surface plasmon resonance (SPR) is used for description of affinity and kinetic profile of the interaction, fluorescence polarization (FP) method for fast determination of inhibition potential of inhibitors and isothermal titration calorimetry (ITC) for definition of thermodynamic parameters of the interaction (∆G, ∆H and ∆S). Besides the importance of uncovering the molecular basis of protein interactions for basic research, the same methodological approaches open new possibilities in rational design of novel therapeutic agents. Key words: protein interaction networks – co‑immunoprecipitation – pull‑down analysis – surface plasmon resonance – fluorescence polarization – isothermal titration calorimetry This work was supported by the European Regional Development Fund and the State Budget of the Czech Republic (RECAMO, CZ.1.05/2.1.00/03.0101) and by MH CZ – DRO (MMCI, 00209805). The authors declare they have no potential conflicts of interest concerning drugs, products, or services used in the study. The Editorial Board declares that the manuscript met the ICMJE “uniform requirements” for biomedical papers. Submitted: 31. 1. 2014 Accepted: 10. 3. 2014

• Keywords
• koimunoprecipitace, izotermální titrační kalorimetrie, afinitní koprecipitace, pull-down analýza,
• MeSH
• Fluorescence Polarization methods   MeSH
• Immunoprecipitation methods   MeSH
• Calorimetry methods   MeSH
• Ligands MeSH
• Protein Interaction Mapping * methods   MeSH
• Protein Interaction Maps MeSH
• Surface Plasmon Resonance methods   MeSH
• Thermodynamics MeSH
• Protein Binding * MeSH
• Publication type
• Research Support, Non-U.S. Gov't MeSH
• Review MeSH

• MeSH
• Glycoproteins MeSH
• Immunity MeSH
• Contraceptives, Oral MeSH
• Blood Proteins MeSH
• Pregnancy MeSH
• Check Tag
• Pregnancy MeSH

Při hledání nových cest k pochopení mechanizmu regulace ukládání lipidů do tukové tkáně se sleduje vliv nejrůznějších hormonů. Jedním z nich je i acylaci stimulující protein. Je produkován zejména adipocyty. Acylaci stimulující protein po navázání na specifický receptor na povrchu adipocytu způsobuje prostřednictvím aktivace proteinkinázy C zvýšení syntézy triacylglycerolů. Současně dochází k přesunu glukózových transportérů z cytoplazmy na povrch adipocytu. Tím je umožněn rychlejší vstup glukózy do buňky a zajištěn dostatek substrátu pro tvorbu triacylglyceridů. Tyto děje vedou k větší tvorbě tukové tkáně. Dalším efektem acylaci stimulujícího proteinu je stimulace pankreatické sekrece inzulínu. Celková hladina acylaci stimulujícího proteinu v plazmě je úměrná množství tukové tkáně a pozitivně koreluje s řadou antropometrických ukazatelů a s hladinou inzulínu. U acylaci stimulujícího proteinu deficientních myší studie prokázaly větší schopnost redukovat tukovou tkáň. Při dietě s vysokým obsahem lipidů byly tyto acylaci stimulující protein deficientní myši rezistentní proti rozvoji obezity a množství tukové tkáně bylo u nich trvale nižší než u skupiny myší s normální tvorbou acylaci stimulujícího proteinu. Zároveň byla pozorována i vyšší senzitivita k působení inzulínu. Acylaci stimulující protein je jedním z faktorů, který se může podílet na vzniku obezity.

Multiple hormones and enzymes participate in the lipid storage. One of them is acylation stimulating protein. Acylation stimulating protein is produced predominantly by adipocytes. After the binding on specific receptor at the surface of adipocytes, acylation stimulating protein leads to enhancement of triglyceride synthesis. This process is mediated by protein-kinase C. Concurrently, glucose transporters move from the cytoplasm to the adipocyte surface. Higher glucose disposal leads to a sufficient substrate availability for triglyceride synthesis. Acylation stimulating protein also stimulates pancreatic insulin secretion. Total acylation stimulating protein level in plasma is related to the adipose tissue mass and it positively correlates with many anthropometric parameters and with serum insulin level. In acylation stimulating protein deficient mice, resistance to the obesity development after a high fat diet was observed. Adipose tissue mass is lower in the acylation stimulating protein deficient mice and higher insulin sensitivity was shown in acylation stimulating protein deficient mice compared to a wild type mice. Acylation stimulating protein pathway may have an important role in the obesity development.

• MeSH
• Acylation MeSH
• Research Support as Topic MeSH
• Fatty Acids, Nonesterified blood   metabolism   MeSH
• Humans MeSH
• Lipids MeSH
• Lipid Metabolism MeSH
• Obesity metabolism   physiopathology   MeSH
• Motor Activity MeSH
• Postprandial Period MeSH
• Review Literature as Topic MeSH
• Proteins physiology   MeSH
• Protein Biosynthesis MeSH
• Adipose Tissue metabolism   secretion   MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH

• Keywords
• Metabolismus, Proteiny,
• MeSH
• Metabolism MeSH
• Proteins MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• biochemie
• vnitřní lékařství

• Keywords
• Metabolismus, Proteiny,
• MeSH
• Metabolism MeSH
• Proteins MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• biochemie
• vnitřní lékařství

Cíl práce: Shrnutí současných poznatků o proteinech tepelného šoku (HSPs) humánního a bakteriálního(chlamydiového) původu a jejich účasti při poruchách fertility.Typ studie: Přehledný článek vhodný pro doškolování lékařů (gynekologů, porodníků).Název a sídlo pracoviště: Výzkumný ústav veterinárního lékařství, Brno.Předmět a metoda studie: Předmětem studie je protein tepelného šoku - hsp60 jako významný epitopChlamydia trachomatis. Proteiny tepelného šoku jsou indukovány jako odpověď na různé stresovéinzulty ze zevního prostředí (hypertermie, UV záření, volné radikály kyslíku, těžké kovy, etanolapod.) a některými procesy v souvislosti s buněčným cyklem. Senzibilizace proteinem tepelnéhošoku C. trachomatis a následné vylučování vysoce homologního lidského proteinu tepelného šokujsou kooperující faktory při vzniku poruch plodnosti. IgA protilátky proti hsp60 se vyskytují veznačném procentu v cervikálním hlenu žen a v seminální plazmě mužů s poruchami plodnosti.Závěr: Předcházející infekce C. trachomatis a z ní rezultující senzibilizace chlamydiálním šokovýmproteinem znamená vždy špatnou prognózu pro výsledek reprodukce a zhoršuje pravděpodobnostvýsledku fertilizace in vitro.

Objective: Summarization of recent knowledge on heat shock proteins (HSPs) of human andbacterial (chlamydial) origin and their participation in fertility disturbances.Design: Review article for training of physicians (gynecologists and obstetricians).Setting: Veterinary Research Institute, Brno.Method and results: The subject of the study is heat shock protein - hsp60 as a significant epitopeChlamydia trachomatis. Heat shock proteins are induced as a response to various stress insults fromexternal environment (hyperthermy, UV radiation, free oxygen radicals, heavy metals, ethanol etc.)and certain processes related to the cell cycle. Sensitization with the heat shock protein Chlamydiatrachomatis and subsequent excretion of highly homologous human heat shock protein are co-operatingfactors in the development of fertility disturbances. Significant levels of IgA antibodies tohsp60 occur in cervical mucus of women and in seminal plasma of men with fertility disturbances.Conclusion: Preceding infection C. trachomatis and resulting sensitization with chlamydial heatshock protein indicate an unfavourable prognosis of the reproductive outcome and impairs theperspective of a successful in vitro fertilization.

• MeSH
• Chlamydia trachomatis pathogenicity   MeSH
• Adult MeSH
• Humans MeSH
• Heat-Shock Proteins physiology   MeSH
• Antibodies blood   MeSH
• Pregnancy MeSH
• Infertility, Female diagnosis   etiology   therapy   MeSH
• Check Tag
• Adult MeSH
• Humans MeSH
• Pregnancy MeSH
• Female MeSH
• Publication type
• Review MeSH
• Comparative Study MeSH

Ribosome biosynthesis, best studied in opisthokonts, is a highly complex process involving numerous protein and RNA factors. Yet, very little is known about the early stages of pre-18S rRNA processing even in these model organisms, let alone the conservation of this mechanism in other eukaryotes. Here we extend our knowledge of this process by identifying and characterizing the essential protein TbUTP10, a homolog of yeast U3 small nucleolar RNA-associated protein 10 - UTP10 (HEATR1 in human), in the excavate parasitic protist Trypanosoma brucei. We show that TbUTP10 localizes to the nucleolus and that its ablation by RNAi knock-down in two different T. brucei life cycle stages results in similar phenotypes: a disruption of pre-18S rRNA processing, exemplified by the accumulation of rRNA precursors, a reduction of mature 18S rRNA, and also a decrease in the level of U3 snoRNA. Moreover, polysome profiles of the RNAi-induced knock-down cells show a complete disappearance of the 40S ribosomal subunit, and a prominent accumulation of the 60S large ribosomal subunit, reflecting impaired ribosome assembly. Thus, TbUTP10 is an important protein in the processing of 18S rRNA.

• MeSH
• Genes, Essential * MeSH
• RNA, Small Nucleolar metabolism   MeSH
• RNA Processing, Post-Transcriptional * MeSH
• RNA-Binding Proteins genetics   metabolism   MeSH
• Protozoan Proteins genetics   metabolism   MeSH
• RNA, Ribosomal, 18S metabolism   MeSH
• Trypanosoma brucei brucei enzymology   metabolism   MeSH
• Gene Silencing MeSH
• Publication type
• Journal Article MeSH
• Research Support, Non-U.S. Gov't MeSH