16408853 OR Polymerase chain reaction for detection of Toxoplasma gondii in human biological samples Dotaz Zobrazit nápovědu
Cíl práce: Shrnout dosavadní výsledky získané v diagnostice toxoplazmózy pomocí metody polymerázová řetězová reakce na našem pracovišti. Materiál a metody: Byl vyšetřován různý biologický materiál od pacientů. K izolaci DNA byly použity dva komerční kity: QIAamp DNA Mini kit a QIAamp DNA Blood Mini kit (QIAGEN, Německo). Pro amplifi kaci byla vybrána oblast genu TGR1E. Konvenční polymerázová řetězová reakce byla prováděna na přístroji Peltier Thermal Cycler. Výsledky: V období od roku 2005 do března 2008 bylo vyšetřeno celkem 337 biologických vzorků od 222 pacientů. DNA Toxoplasma gondii byla detekována u pěti pacientů. Závěr: Polymerázová řetězová reakce je důležitou metodou pro stanovení diagnózy toxoplazmóza u rizikových skupin pacientů (gravidní ženy a imunodefi citní pacienti).
Objective: The aim of the work was to summarize results obtained in the diagnostics of toxoplasmosis by a method of polymerase chain reaction in our workplace. Material and methods: Various biological materials were examined. DNA was isolated by QIAamp DNA Mini kit and QIAamp DNA Blood Mini kit. For amplifi cation TGR1E was selected and conventional polymerase chain reaction was performed on Peltier Thermal Cycler instrument. Results: 337 biological samples from 222 patients were examined from 2005 to March 2008. Toxoplasma gondii DNA was detected in fi ve patients. Conclusion: Polymerase chain reaction is important method for the diagnosis of toxoplasmosis in the risk group of the patients (pregnant women and immunodefi ciency patients).
- MeSH
- bronchoalveolární lavážní tekutina parazitologie MeSH
- kombinace léků trimethoprim a sulfamethoxazol aplikace a dávkování terapeutické užití MeSH
- lidé MeSH
- ligasová řetězová reakce metody MeSH
- mozkomíšní mok parazitologie MeSH
- oportunní infekce farmakoterapie parazitologie MeSH
- plodová voda parazitologie MeSH
- těhotenství MeSH
- Toxoplasma izolace a purifikace MeSH
- toxoplazmóza diagnóza farmakoterapie krev MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- těhotenství MeSH
- ženské pohlaví MeSH
V letech 1996-2000 bylo cíleně k průkazu původce vyšetřeno 54 osob (65 vzorků), u kterých bylo na základě sérologického vyšetření podezření na toxoplazmózu (kongenitální, uzlinová, nervová nebo oční forma). Od r. 1996 byly k přímému průkazu parazita Toxoplasma gondii využívány laboratorní myši. Od r. 1999 byly biologické pokusy na laboratorních myších doplněny o jednostupňovou polymerázovou řetězovou reakci (PCR) se specifickými primery z oblasti repetitivní sekvence TGRIE a „hemi-nested“ PCR s primery vybranými z oblasti Bl genu T. gondii. Z celkového počtu 65 vzorků bylo 28 vyšetřeno pouze v PCR, 23 pouze biologickým pokusem a 14 oběma metodami současně. Byly vyšetřeny plodové vody, placenty, sklivce, krve, séra, cerebrospinální moky a orgány (játra, myokard, plíce, mícha, slezina). Izolační pokus na myších byl ve všech případech negativní. Za reakčních podmínek typu 1 byl pozitivní výsledek PCR k průkazu T. gondii (TGRIE) u 48 % vzorků (n = 42). Za reakčních podmínek typu 2 byla se stejnou sekvencí TGRIE pozitivita u 76 % vzorků (n = 33). V „hemi-nested“ PCR se sekvencí z genu B1 byla pozitivita vzorků 79 % (n = 33 vzorků). Nejen odlišné sekvence, ale i použití odlišných reakčních podmínek ovlivní výsledek PCR detekce T. gondii. R detekci přítomnosti T. gondii v klinickém materiálu se osvědčila PCR (sekvence B1 a sekvence TGRIE v 2. Typu reakčních podmínek) na rozdíl od biologického pokusu na laboratorních myších.
In the period 1996-2000 we have investigated 54 subjects (65 samples), in whom serology led to a suspicion of toxoplasmosis congenital, nodular, neurological or ophthalmologic form. Since 1996 we have been using for the direct demonstration of the parasite Toxoplasma gondii laboratory mice. Since 1999 we have added to the experiments on laboratory mice a single-stage polymerase chain reaction (PCR) with specific primers from the region of the repetitive sequence TGRIE and „hemi-nested" PCR with primers selected in the region of the Bl gene of T. gondii. Of the total number of 65 samples 28 were investigated solely with PCR, 23 only in a biological experiment and 14 samples simultaneously by both methods. The investigated material: amniotic fluid, placenta, vitreous body, blood, serum, CSF and various organs - liver, myocardium, lungs, spinal cord, spleen. The isolation experiment on mice was in all cases negative. Under reaction conditions of type 1 PCR demonstrated T. gondii (TGRIE) in 48% of the samples (n=42). Under reaction conditions of type 2, using the same TGRIE sequence, 76% of the samples (n = 33) were positive for T. gondii. In „hemi-nested" PCR with a sequence from the gene Bl positivity of the samples was 79% (n = 33). Not only different sequences, but also different reaction conditions affect the results of PCR detection of T. gondii. For the detection of T. gondii in chnical material, PCR (sequence Bl and sequence TGRIE under type 2 reaction conditions) proved far more useful than biological experiments on laboratory mice.
