• MeSH
• Organelle Biogenesis MeSH
• Biopsy MeSH
• Child MeSH
• Fibroblasts MeSH
• Genome MeSH
• Chemistry, Clinical MeSH
• DNA, Mitochondrial MeSH
• Mitochondrial Diseases diagnosis   genetics   MeSH
• Mutation MeSH
• Oxidative Phosphorylation MeSH
• Metabolism, Inborn Errors MeSH
• Check Tag
• Child MeSH

• Conspectus
• Fyziologie člověka a srovnávací fyziologie
• NML Fields
• fyziologie
• pediatrie
• genetika, lékařská genetika
• vnitřní lékařství
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Adaptovat a optimalizovat moderní biochemické a funkční metody pro analýzu mitochondriálního energetického metabolizmu v krevních lymfocytech: (i) Pro analýzy energetické funkce mitochondrií využít vysoce citlivou oxygrafii izolovaných a permeabilizovaných lymfocytů, luciferázové měření tvorby ATP, spektrofotometrické měření enzymových aktivit, měření energizace mitochondriální membrány pomocí cytofluorometrické sondy TMRM a TPP+ elektrody. (ii) Pro proteinové analýzy využít BN-PAGE, SDS-PAGE a jejich kombinace a western blot detekci specifickými protilátkami proti strukturním podjednotkám respiračních komplexů. Pro analýzu ROS využit sondy AMPLEX UltraRed a DCFDA. (iii) Pro analýzu změn exprese vybraných genů využít RT-PCR Tento metodický přístup aplikovat při diagnostice mitochondriálních onemocnění na podkladě neznámých genetických defektů a při sledování vývoje mitochondriálních onemocnění a vlivu terapie.; To adapt and optimize modern biochemical and functional methods for analysis of mitochondrial energetic metabolism in blood lymphocytes: (i) To use highly sensitive oxygraphy of permeabilized lymphocytes, luciferase analysis of ATP production, spectrophotometric analysis of enzyme activities, analysis of mitochondrial membrane potential by cytofluorometric probe TMRM and by TPP+ electrode for analysis of energetic function of mitochondria. (ii) To apply BN-PAGE, SDS-PAGE and their combinations together with western blot detection using specific antibodies to structural subunits of respiratory complexes for protein analysis of lymphocyte mitochondria. (iii) To use fluorescent probes AMPLEX UltraRed and DCFDA for ROS production analysis. (iv) To analyze expression of selected genes by RT-PCR. To apply this methodical approach in diagnostics of mitochondrial diseases caused by yet unknown genetic defects, and in monitoring the course of the disease and effect of therapy.

Doba řešení: 2010-2015

Obsahuje literaturu