Cíl práce: Sestavení a ověření postupu PCR na průkaz Borrelia burgdorferi v moči pacientů s lymeskou boréliózou (LB). Metodika: Na izolaci DNA z moče byla použita suspenze pryskyřice Chelex 100. PCR probíhala jako dvoustupňová amplifikace („nested" PCR). Byly použity dvě sady primerů : pro plazmidový gen kódující Osp C protein a pro chromozomální gen kódující 16S rDNA. Možná přítomnost inhibitorů způsobující falešně negativní výsledky byla kontrolována přidáním lidské DNA do reakční směsi a koamplifikací s lidskými genomickými primery. Výsledky: Z 28 vyšetřovaných pacientů byla DNA prokázána u 20 (11 x u neuroboréliózy, 3 x u lymeské arthritidy, 6 x u pacientů suspektních z LB). Nejvíce pozitivních výsledků bylo dosaženo pro OspC systém (17/20, 85 %), dále pro 16S rDNA systém (7/20, 35 %). Amplifikace s oběma sadami primerů se podařila pouze u 4 pacientů (4/20, 20 %)Závěr: Touto prací jsme ověřili možnost průkazu DNA Borrelia burgdorferi v moči. Současně se nám potvrdil poznatek pozorovaný i jinými autory, že při DNA diagnostice spirochéty je nutno paralelně užít nejméně dva PCR systémy.

Objective: Elaboration and verification of a PCR procedure for the detection of Borrelia burgdorferi in the urine of patients with Lyme borreliosis (LB). Methods: A suspension of the resin Chelex 100 was used for the isolation of DNA from urine. The PCR was designed as a two-step amplification („nested" PCR). Two sets of primers were used: one for the plasmid gene coding Osp C protein, and the other for chromosonal gene coding 16,168 n rDNNA. A possible presence of inhibitors causing false negative results was controlled by adding human DNA to the reaction and by co-amplification with human genome primers. Results: Of the 28 patients examined DNA was detected in 20 of them: 1 Ix in neuroborreliosis, 3x in Lyme arthritis, 6x in patients suspected of LB. Most of the positive results were obtained with the Osp C System (17/20, 85 %), followed by the 16S rDNA system (7/20, 35 %). Amplification with both sets of primers was successful in 4 patients only (4/20, 20 %). Conclclusion: The feasibility of detecting DNA of B. burgdorferi in urine was verified. Further, it was confirmed, that in the DNA diagnostics of spircpchetes at least two PCR systems must be used concurrently, a finding observed by other authors as well.

2 LF 1 infekční klinika FN Bulovka Praha

Determination of specific DNA of Borrelia burgdorferi in urine of patients with Lyme borreliosis (LB)

Průkaz specifické DNA Borrelia burgdorferi v moči pacientů s lymeskou boréliózou = Determination of specific DNA of Borrelia burgdorferi in urine of patients with Lyme borreliosis (LB) /

Determination of specific DNA of Borrelia burgdorferi in urine of patients with Lyme borreliosis (LB) /

Lit: 16

Souhrn: eng