Východisko. Pooperační hypoparatyreóza po paratyreoidektomiích (PTE) se jeví dle našich vlastních zkušeností se 243 výkony na příštítných tělíscích (PT) u nemocných se všemi typy hyperparatyreóz (HPT) jako závažný problém, i když jsou v případě totální PTE standardně prováděny implantace částí tkáně (de facto autologní transplantace), kryokonzervace a od roku 1995 i reimplantace kryokonzervovaných tkání. V poslední době zvažujeme terapii nejzávažnějších případů pooperačních hypoparatyreóz transplantací tkáně příštítných tělísek. Cílem této práce bylo zjistit viabilitu kryokonzervované autologní tkáně PT, „čerstvé“ autologní tkáně odebrané při PTE a tkáně multiorgánových dárců, určené k eventuálně uvažované alogenní transplantaci. Metody a výsledky. Skupinu 1 tvoří 55 kryokonzervovaných vzorků získaných od 41 nemocných po PTE (22 mužů, 19 žen, průměrný věk 46±11 let). Průměrná délka kryokonzervace tkáně byla 84±49 měsíců. Skupinu 2 tvoří tzv. čerstvá tkáň PT, odebraná během PTE a uchovaná v ledové tříšti. Viabilita byla vyšetřována v určitých časových intervalech u 42 nemocných s HPT (11 mužů, 31 žen, věk 55±13 let). Skupinu 3 tvoří 14 kadaverózních dárců tkáně PT (7 mužů, 7 žen, věk 31±5 let), která byla odebrána v rámci multiorgánových odběrů (teplá ischémie 32 minut). Vyšetření byla prováděna průtokovou cytometrií na přístrojích Coulter Epics a Becton Dickinson po dezintegraci tkáně a kvantifikaci počtu buněk v suspenzi, a to pomocí propidium jodidu, který jsou viabilní buňky schopny vyloučit. Histologickým vyšetřením zbytků tkáně po dezintegraci a cytospinů vyšetřovaných suspenzí bylo potvrzeno, že byla vyšetřena skutečně tkáň PT. Zjištěná viabilita ve skupině 1 byla v průměru 36,9±24,7%. Nebyl prokázán významný vztah viability a délky skladování kryokonzervované tkáně. Průměrná viabilita všech vzorků ve skupině 2 byla 51,4±24 %, nebyla zde prokázána závislost na čase, ani rozdíl ve viabilitě dle použitého média. Viabilita ve 3. skupině byla 66,8±32 %. Mezi skupinami 1 vs. 2 byl zachycen statistický rozdíl s p<0,05, mezi skupinami 2 a 3 nebyl statistický rozdíl prokázán (při hraničním p=0,06) a mezi skupinami 1 a 3 byl prokázán rozdíl s p<0,001. Závěry. Nejvyšší viabilita tkáně PT byla nalezena u tkáně kadaverózních dárců, nejnižší u kryokonzervované tkáně, a to bez ohledu na délku jejího skladování.

Background. Postoperative hypoparathyroidism after the total parathyroidectomy (PTX) remains a problem, no matter our experiences with 243 operations on parathyroid glands (PG). Implantation of „fresh“ tissue, cryopreservation and reimplantation of cryopreserved tissue are performed with uncertain results. The aim of this project was to compare viability of cryopreserved tissue of parathyroid glands with „fresh“ tissue obtained during parathyreoidectomy and with tissue from cadaverous donors. Methods and Results. Group 1 included 55 cryopreserved samples obtained from 41 patients after PTX (22M, 19F, a mean age of 46±11 years). Average duration of storage in liquid nitrogen was 84±49 months. Group 2 included „fresh“ tissue of PG, harvested during PTX. Viability was measured in different time in samples from 42 patients with hyperparathyroidism (11M, 31F, a mean age of 55±13 years). Group 3 included tissue of 14 cadaverous donors obtained during multiorgan harvesting (7M, 7F, a mean age of 31±5 years, WIT 32 min). Viability was measured by flow cytometry with propidium iodide after dissociation of tissue. Evaluation of PG tissue was proven by histology. Average viability in group 1 was 36,9±24,7 %, no correlation with the duration of storage in liquid nitrogen was found. Average viability in group 2 was 51,4±24 %. Viability in group 3 was 66,8±32 %. Group 1 vs. group 2 were different with p<0.05, group 2 vs. 3 did not reach significance (with marginal p=0.06) and group 1 vs 3 were different with p<0.001. Conclusions. The highest viability was found in tissue of cadaverous donors, the lowest in cryopreserved tissue (with no correlation to the duration of storage in liquid nitrogen).

Klinika nefrologie TC IKEM Praha

Viability of the parathyroid gland tissue measured by flow cytometry

Viabilita tkáně příštítných tělísek měřená průtokovou cytometrií = Viability of the parathyroid gland tissue measured by flow cytometry /

Lit: 13

Souhrn: eng