Úvod: Jedním z problémů současné medicíny je zvyšující se počet bakteriálních kmenů s nebezpečnými fenotypy rezistence. K tomuto vývoji dochází i na novorozeneckých odděleních, kde nozokomiální infekce vyvolané multirezistentními bakteriemi představují velmi vážné ohrožení novorozených dětí. Mezi obávané bakteriální patogeny patří kmeny Klebsiella pneumoniae s produkcí širokospektrých beta-laktamáz AmpA (ESBL). Cílem studie byla molekulárně-biologická charakteristika ESBL-pozitivních kmenů K. pneumoniae, zachycených na novorozeneckém oddělení Fakultní nemocnice Olomouc (FNO). Materiál a metody: Z klinického materiálu novorozenců, hospitalizovaných na novorozeneckém oddělení FNO v období leden-červen 2004, byly izolovány a standardními identifikačními postupy určovány kmeny K pneumoniae. Jejich citlivost k antibiotikům byla testována diluční mikrometodou. K fenotypovému průkazu produkce ESBL byl použit Double Disk Synergy Test. Gen bJa, kódující produkci ESBL, byl prokazován pomocí PCR Molekulárně-biologická charakteristika ESBL-pozitivních kmenů byla provedena izolací genomové DNA, naštěpením restriktázou Xbal a rozdělením pomocí PFGE. Získané restrikční mapy jednotlivých izolátů byly porovnány pomoci programu GelCompare, poté byla stanovena jejich příbuznost. Selekční tlak antimikrobních léčiv byl hodnocen pomocí absolutního počtu definovaných denních dávek jednotlivých antibiotik. Výsledky: Ve sledovaném období bylo izolováno celkem 112 kmenů K pneumoniae, přičemž u 22 (19,6 %) byla prokázána produkce ESBL typu TEM. ESBL-pozitivní kmeny byly zachyceny pouze ve výtěrech z horních cest dýchacích a rekta novorozenců bez známek infekce. Molekulárně-biologická analýza prokázala, že 21 ESBL-pozitivních kmenů K. pneumoniae má shodný restrikční profil, jsou tedy s vysokou pravděpodobností totožné. Selekční tlak cefalosporinů IIL a TV. Generace byl ve sledovaném období velmi nízký, jejich spotřeba činila 1,9 % ze všech aplikovaných antimikrobních léčiv. Závěr. Na základě uvedených výsledků lze konstatovat, že výskyt ESBL-pozitivních kmenů K pneumoniae na novorozeneckém oddělení FNO v roce 2004 byl způsoben klonálním a horizontálním šířením z nezjištěného zdroje.

Background: One of the problems of contemporary medicine is an increasing number of bacterial strains with hazardous phenotypes of resistance. This is also true for neonatal units where nosocomial infections caused by multiresistant bacteria pose a serious threat to newborns. The feared bacterial pathogens include Klebsiella pneumoniae strains producing AmpA Extended-Spectrum Beta-Lactamases. The study focused on the molecular biology characteristics of ESBL-positive strains of K. pneumoniae collected in the Neonatal Unit of the Teaching Hospital in Olomouc (THO). Materials and Methods: Clinical material from newborns hospitalized in the THO Neonatal Unit between January and June 2004 was used to isolate and determine K. pneumoniae strains by standard identification procedures. Their susceptibility to antibiotics was tested using a dilution micromethod. A Double-Disk Synergy Test was used for phenotype determination of ESBL production. The bla gene coding ESBL production was demonstrated by PCR. Molecular biology characteristics of ESBL-positive strains utilized the genomic DNA isolation, Xbal restrictase digestion and PFGE differentiation. The acquired restriction maps of individual isolates were compared using the GelCompare software and their relationship was determined. The selection pressure of antimicrobial agents was assessed according to the absolute number of defined daily doses of individual antibiotics. Results: During the monitored period, 112 K. pneumoniae strains were isolated in total. In 22 of them (19.6%), the TEM-type ESBL production was determined. ESBL-positive strains were only observed in upper respiratory tract and rectal swabs collectcted from newboms with no signs of infection. The molecular biology analysis showed that 21 ESBL-positive strains had an identical restriction profile, i.e. they were very likely to be identical. The selection pressure of third- and fourth-generation cephalosporins was very low over the observed period and their consumption accounted for 1.9 % of all administered antimicrobial agents. Conclusion: The results presented above suggest that ESBL-positive strains of K. pneumoniae occurred in the THO Neonatal Unit due to clonal and horizontal spread from an unidentified source.

Ústav mikrobiologie LF UP a FNO Olomouc

Molecular-biology characteristics of ESBL-positive strains of Klebsiella pneumoniae collected in the neonatal unit of the Teaching Hospital in Olomouc

Molekulárně-biologická analýza ESBL-pozitivních kmenů Klebsiella pneumoniae na novorozeneckém oddělení Fakultní nemocnice Olomouc = Molecular-biology characteristics of ESBL-positive strains of Klebsiella pneumoniae collected in the neonatal unit of the Teaching Hospital in Olomouc /

Molecular-biology characteristics of ESBL-positive strains of Klebsiella pneumoniae collected in the neonatal unit of the Teaching Hospital in Olomouc /

Lit. 17