Cieľ práce: Cieľom štúdie bolo stanovenie prevalencie ESBL-pozitívnych izolátov Klebsielh pneumoniae u pacientov v intenzívnej starostlivosti a ich molekulárno-biologická analýza. Materiál a metódy: V období 5 mesiacov boli od pacientov hospitalizovaných na Klinike anestéziológie a resuscitácie Fakultnej nemocnice Olomouc izolované kmene Klehsiella pneumoniae. U každého izolátu bol určený antibiogram štandardnou dilučnou mikrometódou a produkcia ESBL bola stanovená modifikovaným double disk synergy testom. Na dôkaz prítomnosti génu blaTEM a blaSHV bola použitá PCR. Izoláty produkujúce SHV a TEM typy β-laktamáz boh ďalej typizované použitím metódy polymorfizmu dĺžky restrikčných fragmentov (RFLP) na identifikáciu najbežnejšie sa vyskytujúcich mutácií zodpovedných za vznik ESBL fenotypu. Posúdenie podobnosti, resp. identity izolátov, bolo uskutočnené pulznou gelovou elektroforézou (PFGE) fragmentov DNA, naštiepených pomocou reštrikčnej endonukleázy Xbal. Výsledky: Celkovo bolo získaných 67 izolátov Klebsiella pneumoniae. U 13 z nich bola stanovená produkcia ESBL a pomocou PCR dokázaná pritomnost WasHv génu. Reštrikčné štiepenie pomocou Nhel odhalilo výskyt mutácie v pozícii 238 u všetkých SHV-pozitívnych PCR produktov. Prítomnosť génu kódujúceho širokospektrú β-laktamázu TEM typu však nebola potvrdená. Molekulárno-biologická typizácia pomocou PFGE zistila prítomnosť 11 rôznych kmeňov. Záver. Prevalencia ESBL-pozitívnych kmeňov KlebsieJJa pneumoniae dosiahla u sledovanej skupiny pacientov v intenzívnej starostlivosti hodnoty 19,4 %. Analýza SHV a TEM produktov PCR metódou RFLP preukázala výskyt ESBL typu SHV. Celkovo 84,6 % kmenov malo jedinečný reštrikčný profil. Výsledky dokladujú nielen dobrú úroveň hygienicko-epidemiologických režimov na sledovanej klinike, ale aj racionálnu antibiotickú politiku.

Objectives: The study aimed at the assessment of the prevalence of ESBL-positive isolates of Klebsiella pneumoniae in intensive care patients and their molecular biology analysis. Material and methods: Over a 5-month period, Klebsiella pneumoniae strains were isolated from patients hospitalized at the Department of Anaesthesiology and Resuscitation of the University Hospital in Olomouc. For each isolate, an antibiogram was performed by the standard microdilution method and the production of ESBL was determined by the modified double-disk synergy test. PCR was used to demonstrate the presence of the blaTEM and blaSHV genes. The isolates producing SHV- and TEM-types of β-lactamases were typed using the restriction fragment length polymorphism (RFLP) method to identify the most common mutations responsible for the development of an ESBL phenotype. Similar or identical isolates were determined by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of DNA fragments cleaved by the XbaI restriction endonuclease. Results: A total of 67 isolates of KJebsieJJa pneumoniae were obtained. In 13 of them, the production of ESBL was detected and the presence of the blaSHV gene was confirmed by PCR. Restriction cleavage by Nhei revealed mutations at position 238 in all SHV-positive PCR products. The restriction analysis did not confirm the presence of the gene encoding TEM-type extended-spectrum β-lactamase. Molecular biology typing by PFGE detected the presence of 11 different strains. Conclusions: In the observed group of intensive care patients, the prevalence of ESBL-positive strains of Klebsiella pneumoniae reached 19.4 %. The analysis of SHV and TEM products of PCR by the RFLPP method showed the prevalence of SHV-type ESBL. Overail, 84.6 % of the strains had unique restriction profiles. The results suggest both high levels of hygienic and epidemiological measures at the monitored department and rational antibiotic policy.

Ústav mikrobiologie FN a LF UP Olomouc

Molecular characterization of ESBL-producing Klebsiella pneumoniae isolates from intensive care patients

Molekulárno-biologická analýza ESBL-pozitívnych izolátov Klebsiella pneumoniae od pacientov v intenzívnej starostlivosti = Molecular characterization of ESBL-producing Klebsiella pneumoniae isolates from intensive care patients /

Molecular characterization of ESBL-producing Klebsiella pneumoniae isolates from intensive care patients /

Lit. 31