• MeSH
• imunoglobuliny - fragmenty MeSH
• vztahy mezi strukturou a aktivitou MeSH

• MeSH
• methotrexát škodlivé účinky   MeSH
• močovina analogy a deriváty   škodlivé účinky   MeSH
• poškození DNA MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH

• MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• peptidové fragmenty analýza   MeSH
• peptidové mapování metody   využití   MeSH
• proteiny chemie   klasifikace   MeSH
• spektrometrie hmotnostní - ionizace laserem za účasti matrice MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

• MeSH
• chromatin účinky léků   MeSH
• daunomycin MeSH
• DNA izolace a purifikace   MeSH
• fosfodiesterasy MeSH
• protinádorová antibiotika MeSH

• MeSH
• DNA MeSH
• játra MeSH
• karcinogeny MeSH
• krysa rodu rattus MeSH
• mutageny MeSH
• Check Tag
• krysa rodu rattus MeSH

Apoptosis has been recognized as a type of programmed cell death connected with characteristic morphological and biochemical changes in cells. This programmed cell death plays an important role in the genesis of a number of physiological and pathological processes. Thus, it can be very important to detect the signs of apoptosis in a study of cellular metabolism. The present paper provides an overview of methods often being used for detecting DNA fragmentation as one of the most specific findings in apoptosis. To date, three routine assays have been developed for detecting DNA fragmentation: DNA ladder assay, TUNEL assay, and comet assay. All these methods differ in their principles for detecting DNA fragmentation. DNA ladder assay detects the characteristic "DNA ladder" pattern formed during internucleosomal cleavage of DNA. Terminal deoxynUcleotidyl transferase Nick-End Labeling (TUNEL) assay detects DNA strand breaks using terminal deoxynucleotidyl transferase catalyzing attachment of modified deoxynucleotides on the DNA strand breaks. Comet assay can be used for detecting nucleus breakdown producing single/double-strand DNA breaks. The aim of this review is to describe the present knowledge on these three methods, including optimized approaches, techniques, and limitations.

• MeSH
• apoptóza genetika   fyziologie   MeSH
• biotest metody   MeSH
• DNA analýza   genetika   metabolismus   MeSH
• fragmentace DNA * MeSH
• kometový test metody   MeSH
• koncové značení zlomů DNA in situ metody   MeSH
• lidé MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• přehledy MeSH

Cíl. Retrospektivní analýza použití mechanické fragmentace a rozptýlení embolu při masivní plicní embolii ke zlepšení plicní hemodynamiky. Metoda. Do studie bylo zahrnuto 5 nemocných (4 ženy a 1 muž) průměrného věku 67 roků (52 - 80 let) s masivní plicní embolii, z toho 3 nemocní byli po rozsáhlém chirurgickém výkonu týž den, eventuálně 2. a 10. den: jedna nemocná po druhostranné pneumonektomii pro karcinom plic, další po nefrektomii s extirpací smíšeného trombu z dolní duté žíly a další po totální endoprotéze kyčelního kloubu. U všech 5 nemocných byla po embolizační příhodě nutná resuscitace a došlo k rozvoji kardiogenního šoku. Nemocní byli intubováni, řízené ventilováni a s inotropní podporou oběhu katecholaminy urgentně přemístěni na katetrizační sál. Do plicnice byl zaveden 9F flexibilní sheath a katétr tvaru pigtail 7-8F a provedeny pokusy o fragmentaci embolů ruční rotací katétru. Ve 3 případech bylo podáno 19 až 40 mg tkáňového plazminového aktivátoru ve snaze zvrátit nepříznivý vývoj. Výsledky. Dva nemocní (40 %) přežili, byli dále léčeni a propuštěni do domácího ošetření. Tři nemocní (60%) zemřeli v důsledku nezvratného kardiogenního šoku (z toho 2 během výkonu). Závěr. Včasná diagnóza plicní embolie nebo důvodné podezření na ni na základě klinických příznaků a okamžitá katetrizace plicnice s fragmentací embolů může u omezeného počtu nemocných se zástavou oběhu vést ke zvýšení průtoku krve plicním řečištěm a k záchraně života.

Aim. Mechanical fragmentation of pulmonary emboli was used to improve pulmonary perfusion after massive pulmonary embolization. Method. Our retrospective study included 5 patients (4 women, 1 man) of mean age 67 years (range 52 - 80 years) with massive pulmonary embolization. Three of these patients underwent extensive surgery on the same day, resp. 2 and 10 days before: pneumonectomy for carcinoma, nephrectomy for renal cell carcinoma with extirpation of a mixed thrombus from the inferior vena cava and reoperation for total hip replacement. Cardiopulmonary resuscitation was required in all of them, all patients developed cardiogenic shock. The patients were intubated, artificially ventilated and immediately transferred with inotropic support to the catheterization room. Flexible sheath (9F) was placed in the pulmonary artery. Fragmentation of pulmonary emboli was performed using manual rotation of the catheters. There were 19 to 40 mg of recombinant tissue plas-minogen activator given locally in 3 cases to accelerate unsuccessful recanalization. Results. Two patients (40 %) survived, underwent further therapy and were discharged home. Three patients (60 %) died due to irreversible cardiogenic shock (two of them during the procedure). Conclusion. Early diagnosis of massive pulmonary embolism, even based only on clinical symptoms, and urgent catheterization of pulmonary artery with fragmentation of emboli can increase blood flow in the pulmonary artery and be life saving procedure in selected cases with cardiac arrest.

• MeSH
• aterektomie metody   trendy   využití   MeSH
• intervenční radiologie metody   trendy   MeSH
• kardiogenní šok komplikace   mortalita   terapie   MeSH
• kardiopulmonální resuscitace metody   využití   MeSH
• lidé MeSH
• plicní embolie chirurgie   komplikace   krev   MeSH
• retrospektivní studie MeSH
• srdeční zástava komplikace   prevence a kontrola   MeSH
• tkáňový aktivátor plazminogenu aplikace a dávkování   MeSH
• trombektomie metody   využití   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Cíl studie: Posoudit míru fragmentace volné fetální DNA v plazmě těhotných žen v průběhu těhotenství. Typ studie: Zjištění efektivity záchytu fetálních DNA molekul s rozdílnou délkou a volné fetální DNA ve velikostních frakcích. Pracoviště: Ústav lékařské genetiky a fetální medicíny FN Olomouc. Metodika: 1. Celkem 363 vzorků těhotných žen v rozmezí 4. až 37. t.g. bylo posouzeno v lokusech STR a AMELY analýzou efektivity QF PCR. 2. Fetální DNA rozdělená do velikostních frakcí byla kvantifikována metodou QF PCR u 91 těhotných (8. t.g. - 40. t.g.). 3. Real-time PCR (SRY/vnitřní kontrola) byla použita u 22 těhotných s plodem mužského pohlaví (9. t.g - 36. t.g.). Výsledky: 1. Efektivita QF PCR byla nepřímo úměrná délce amplifikovaných molekul. 2. Kvantifikací fragmentů fetální DNA kapilární elektroforézou nebyly kromě frakce obsahující nejdelší molekuly (frakce 500-760 bp) nalezeny odlišnosti ve vztahu k týdnu těhotenství. 3. Metodou real-time PCR byl pozorován nepřímý vztah mezi množstvím fetální DNA ve frakci 150-300 bp a stadiem gravidity. Závěr: Rozborem všech tří postupů byl pozorován trend, který naznačuje nárůst větších fetálních molekul v průběhu těhotenství, zatímco množství menších molekul fetálního původu se nemění.

Aim of study: To assess cell free fetal DNA (cffDNA) fragmentation rate in pregnant women during the course of gravidity. Study design: QF PCR efficiency in cffDNA and quantitative analyses in particular cffDNA molecular size fractions. Setting: The study was performed at Department of Medical Genetics and Fetal Medicine, University Hospital Olomouc. Method: 1. 363 plasma DNA samples from women in different week of pregnancy (from 4th w.g. to 37th w.g.) were tested for QF PCR efficiency in particular STRs and AMELX/Y. 2. Size fractionated cff DNA (150–300 bp, 300–500 bp, 500–760 bp) was quantified by QF PCR in 91 pregnant women (from 9th w.g. to 40th w.g.). 3. Size fractionated cff DNA from male fetuses was quantified by real time PCR (SRY/internal control) in 22 pregnant women (from 9th w.g. to 36th w.g.). Results: 1. QF PCR efficiency decreased from longer to shorter molecules. 2. The only 500 -760 bp fraction showed cffDNA increase in relation to week of gravidity. 3. Indirect relation between amount of cffDNA and week of gravidity was found in 150-300 bp fraction by Real-time PCR. Conclusion: Assembling of all 3 approaches indicates increase of longer cffDNA molecules during the gravidity while level of the short cffDNA molecule fragments probably remains from the approximately 9th w.g. the same.

• Klíčová slova
• neinvazivní prenatální diagnostika, real-time PCR, QF PCR, velikostní frakce,
• MeSH
• DNA krev   MeSH
• elektroforéza kapilární MeSH
• fragmentace DNA MeSH
• lidé MeSH
• lidské chromozomy X genetika   MeSH
• lidský chromozom Y genetika   MeSH
• mikrosatelitní repetice genetika   MeSH
• plod MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• těhotenství MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• těhotenství MeSH
• ženské pohlaví MeSH

Photodynamic therapy (PDT) is an alternative method of tumour treatment. It is based on a photochemical reaction of a photosensitizer, irradiation, and O(2) which converts to cytotoxic (1)O(2) and other forms of reactive oxygen species (ROS). The comet assay (also called single-cell gel electrophoresis, SCGE) is a sensitive, simple and quantitative technique for detection of DNA damage. In our study we investigated the phototoxicity of the two porphyrin photosensitizers, TPPS4 and MgTPPS4, on HeLa cells. Three different radiation doses and six different concentrations of the photosensitizers were used. Our results show that the DNA of the cells treated with the TPPS(4) and MgTPPS(4) at the concentrations higher than 5 μM was highly fragmented indicating a strong phototoxic effect resulting in a cell apoptosis. On the base of our results we can hypothesize that even the irradiation dose of 1 J cm(-2) is sufficient enough to provoke the DNA fragmentation.

• MeSH
• apoptóza účinky léků   MeSH
• dávka záření MeSH
• fotochemoterapie metody   MeSH
• fotosenzibilizující látky aplikace a dávkování   farmakologie   MeSH
• fragmentace DNA účinky léků   MeSH
• HeLa buňky MeSH
• hořčík chemie   MeSH
• kometový test MeSH
• lidé MeSH
• metaloporfyriny aplikace a dávkování   chemie   farmakologie   MeSH
• porfyriny aplikace a dávkování   chemie   farmakologie   MeSH
• vztah mezi dávkou a účinkem léčiva MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

At present, nuclear condensation and fragmentation have been estimated also using Hoechst probes in fluorescence microscopy and flow cytometry. However, none of the methods used the Hoechst probes for quantitative spectrofluorometric assessment. Therefore, the aim of the present study was to develop a spectrofluorometric assay for detection of nuclear condensation and fragmentation in the intact cells. We used human hepatoma HepG2 and renal HK-2 cells cultured in 96-well plates treated with potent apoptotic inducers (i.e. cisplatin, staurosporine, camptothecin) for 6-48 h. Afterwards, the cells were incubated with Hoechst 33258 (2 µg/mL) and the increase of fluorescence after binding of the dye to DNA was measured. The developed spectrofluorometric assay was capable to detect nuclear changes caused by all tested apoptotic inducers. Then, we compared the outcomes of the spectrofluorometric assay with other methods detecting cell impairment and apoptosis (i.e. WST-1 and glutathione tests, TUNEL, DNA ladder, caspase activity, PARP-1 and JNKs expressions). We found that our developed spectrofluorometric assay provided results of the same sensitivity as the TUNEL assay but with the advantages of being fast processing, low-cost and a high throughput. Because nuclear condensation and fragmentation can be typical markers of cell death, especially in apoptosis, we suppose that the spectrofluorometric assay could become a routinely used method for characterizing cell death processes.

• MeSH
• apoptóza účinky léků   MeSH
• bisbenzimidazol chemie   MeSH
• buněčná smrt účinky léků   MeSH
• buněčné jádro účinky léků   metabolismus   MeSH
• buněčné linie MeSH
• buňky Hep G2 MeSH
• cisplatina farmakologie   MeSH
• fluorescenční mikroskopie metody   MeSH
• fluorescenční spektrometrie metody   MeSH
• fragmentace DNA účinky léků   MeSH
• kamptothecin farmakologie   MeSH
• lidé MeSH
• protinádorové látky farmakologie   MeSH
• průtoková cytometrie metody   MeSH
• reprodukovatelnost výsledků MeSH
• staurosporin farmakologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH