nested PCR
Dotaz
Zobrazit nápovědu
Cíl práce: Ověřit použití komerčně dostupného setu pro rychlou DNA diagnostiku technikou PCR k průkazu komplexu M. tuberculosis v klinickěm materiálu. Metoctika: Bylo vyšetřeno 65 vzorků - 44 (67,7 %) sput a 21 (32,3 %) bronchoalveolárních laváží, resp. bronchiálních aspirátů od nemocných ze spolupracujících pražských plicních a interních klinik. Ze všech vzorků byla vyizolována DNA, amplifikována a amplifikovaný produkt analyzován. Podstatou metody je amplifikace sekvencí DNA specifických pro 65 kDa antigen M. tuberculosis, vymezených 4 primery Mic Tul - Mic Tu4, pomoci tzv. „nested" PCR. Detekce namnoženého úseku DNA byla prováděna v 1,5% agarozovém gelu za přítomnosti ethidiumbromidu. Následovala vizualizace na UV transiluminátoru. Paralelně probíhala přímá mikroskopie a kultivace na pevných a tekutých půdách. Výsledky: Jednotlivé vzorky byly porovnávány s výsledkem pozitivní kontroly, která je součástí setu. Technikou „nested" PCR I bylo M. tuberculosis prokázáno ve 32 (49,2 %) případech, v 8 případech mikroskopicky (12,3 %) a ve 25 případech kultivací (38,5 %). U šesti (9,2 %) vzorků s negativní PCR byly izolovány jiné mykobakteriální druhy - M. gordonae, M. kansasii a M. avium. U sedmi vzorků (10,8 %) bylo M. tuberculosis detekováno pouze pomocí PCR, kultivace i mikroskopie byly negativní. Tento materiál byl opakovaně vyšetřen dalšími amplifikačními technikami (MTD test - Gen - Probe, Inc., San Diego, USA a Amplicor TM - Hoffmann - La Roche, Alameda, USA), u pacientů bylo provedeno i vyšetření sérových protilátek třídy IgG, IgM a IgA a jsou nadále sledováni. U vzorků kultivačně pozitivních nebyl ani v jednom případě zaznamenán negativní výsledek PCR. Senzitivita testu činila 90,3 %, specificita 88,2 %. Závěr: V posledních 10 letech nachází metoda PCR stále častější uplatnění v diagnostice mykobakteriálních infekcí v rutinních laboratořích. Pozornost je soustředěna zvláště na komerčně dostupně, standardizované soupravy umožňující průkaz komplexu M. íufeercu/osis v klinickém materiálu. Vzhledem k výsledkům pilotní studie (vysoká senzitivita a specificita) lze doporučit zkušeným laboratorním pracovníkům (molekulárním biologům) testovanou soupravu k včasné diagnostice tuberkulózy z klinického materiálu.
Objective: Verification of a commercially available kit for rapid DNA diagnostics by the PCR technique in the detection of the M. tuberculosis complex in clinical material. Methods: A total of 65 specimens was examined comprising 44 sputa (67.7 %) and 21 fluids of bronchoalveolar lavages of bronchial aspirates (32.3 %), from patients of cooperating Prague departments of pulmonary diseases and internal medicine. From each specimen DNA was isolated, amplified, and the amplification product was analyzed. The technique is based on amplification of DNA sequences specific for 65 kDa antigen of M. tuberculosis, determined by four primers Mic Tul - Mic Tu4, using the „nested" PCR. The amplified DNA sequence was detected in 1.5% agarose gel in the presence of ethidium bromide and visualized in an UV transilluminator. Specimens were examined in parallel lei by microscopy and cultivation in liquid and solid media. Results: Each specimen was compared with results of a positive control which is in the kit. M. tuberculosis y]2& demonstrated by the „nested" PCR technique in 32 cases (49.2 %), by microscopy in 8 cases (12.3 %), and by cultivation in 25 cases (38.5 %). In 6 PCR-negative specimens (9.2 %) Other species of mycobacteria were isolated, i.e. M. gordonae, M. kansasii, and M. avium. In 7 specimens (10.8 %) M. tuberculosis was detected by PCR only (cultivation and microscopy were negative). These materials were repeatedly examined using other amplification techniques (MTD test - Gen Probe Incs., San Diego and Amplicor™ - Hoffmann - La Roche, Alameda, U.S.A.). The patients were also examined for serum IgC, IgM, and IgA antibodies and are being followed up. All cultivation positive specimens were also PCR-positive. Sensitivity of the test was 90.3 %, and specificity 88.2 %. Conclusions: The PCR technique in the diagnostics of mycobacterial infections in routine laboratories was increasingly implemented during the past ten years. Attention is paticularly focussed on commercially available standartized kits enabling the detection of the M. tuberculosis complex in clinical material. In view of the pilot investigation's results (high sensitivity and specificity) the tested kit can be recommended to experienced laboratory workers (molecular biologists) for early diagnostics of tuberculosis from clinical material.
- MeSH
- antigeny bakteriální analýza genetika MeSH
- diagnostické testy rutinní metody normy MeSH
- DNA bakterií analýza MeSH
- lidé MeSH
- Mycobacterium tuberculosis genetika MeSH
- mykobakteriózy diagnóza mikrobiologie MeSH
- polymerázová řetězová reakce metody MeSH
- senzitivita a specificita MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Cíl práce: Sestavení a ověření postupu PCR na průkaz Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Listeria monocytogenes, Staphylococcus species, Streptococcus pneumoniae a Neisseria menigitidis séroskupiny B a C z jednoho vzorku mozkomíšního moku u pacientů s hnisavou meningitidou. Materiál a metody: Na izolaci DNA z mozkomíšního moku byl použit QIAamp DNA Mini Kit. PCR probíhala jako dvoustupňová amplifikace (nested PCR). Pro E. coli, H. influenzae, L. monocytogenes, S. species a S. pneumoniae byly v první reakci použity univerzální a ve druhé druhově specifické primery kódující bakteriální 16S rDNA. Pro N. menigitidis séroskupiny B a C byl použit amplifikačni systém s primery pro gen SiaD. Výsledky. Z 25 vyšetřených pacientů na začátku léčby byla DNA bakterií prokázána v mozkomíšním moku u 17 (68 %). Šestkrát se jednalo o N. meningitidis séroskupiny B, 4x N. meningitidis séroskupiny C, 5x S. pneumoniae ,lx H, influenzae a Ix L. monocytogenes. Ze 7 pacientů, u kterých byla antibiotická terapie zahájena před diagnostickou lumbální punkcí, byla PCR pozitivní ve čtyřech případech. Závěr. Navržený postup nested PCR je rychlejší než klasická kultivace a hodí se pro včasnou laboratorní diagnostiku infekčního agens. v porovnání s kultivací poskytuje technika mírně vyšší pozitivitu (o 16 %), podobně je tomu i u vzorků vyšetřených po nasazení antibiotické terapie. Metodou PCR nebyla nikdy prokázána jiná bakterie než ta, která byla vykultivována.
Objectives: To propose and verify a PCR assay for detecting Escherichia coii, Haemophilus influenzae, Listeria monocytogenes, Staphylococcus species, Streptococcus pneumoniae and Neisseria meningitidis serogroups B and C in a single sample of the cerebrospinal fluid of patients with purulent meningitis. Material and methods: DNA from the cerebrospinal fluid was isolated using the QIAamp DNA Mini Kit. PCR was performed as twostep amplification (nested PCR). For E. coli, H. influenzae, L. monocytogenes, S. species and S. pneumoniae, universal and speciesspecific primers encoding bacterial 16S rDNA were used in the first and second reaction, respectively. For N. meningitidis serogroups B and C, an amplification system with primers for the SiaD gene was utilized. Resiilts: Of 25 patients examined at the beginning of their treatment, bacterial DNA was detected in the cerebrospinal fluid of 17 (68 %) of them. Those were six cases of N. meningitidis serogroup B, four of N. meningitidis serogroup C, five of S. pneumoniae, one of H. influenzae and one of L. monocytogenes. Of 7 patients in whom antibiotic therapy was initiated prior to diagnostic lumbar puncture, PCR was positive in four cases. Conclusions: The proposed nested PCR approach is faster than traditional culture methods and suitable for early laboratory diagnosis of infectious agents. When compared to culture methods, the technique offers slightly higher positivity (by 16 %). This is similar in samples analyzed after the initiation of antibiotic therapy. The PCR method never detected other bacteria than the cultured ones.
Ve snaze zabránit možnosti kontaminace při provádění dvoustupňové polymerázové řetězové reakce (nested PCR), byl vyzkoušen postup nested PCR v jedné zkumavce. Vysušená kapka kompletní směsi pro polymerázovou reakci bez Taq DNA polymerázy a kapka hygroskopické Taq DNA polymerázy v 50% glycerolu byly umístěny na dně a na víčku PCR zkumavky a testovány na průběh amplifikace. Shledali jsme plnou aktivitu reakční směsi po dobu jednoho měsíce při skladování zkumavek při -20 °C a jeden týden při skladováni při +20 °C. Tento jednozkumavkový nested PCR systém byl ověřen v klinické praxi u diagnostiky lymské boreliózy.
In order to prevent any possible contamination during nested PCR, we have explored the possibility of nested PCR in a single test tube. A dry drop of the complete mixture for a polymerase reaction without Taq DNA polymerase and a drop of hygroscopic Taq DNA polymerase in 50% glycerol were deposited on the bottom and on the cap of a PCR test-tube to examine the course of amplification. The reaction mixture displayed its full activity over a period of one month with the test-tubes stored at -20 °C and for one week when stored at +20 °C. This single test-tube nested PCR system was verified in clinical practice in the diagnosis of Lyme disease (borreliosis).
Cieľ štúdie: Autori testovali variant polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) – „nested“ (N-PCR)na detekciu ľudského papilomavírusu (HPV) vo vzorkách cervikálnych sterov u gynekologickýchpacientok. Táto metodika je založená na opakovanej amplifi kácii špecifi ckých úsekov DNA vírusu.Porovnávali citlivosť N-PCR s používanou hybridizačnou metodikou. Pozitívne vzorky v druhejčasti pokusov použili na typizáciu detekovaných HPV-DNA pomocou PCR.Súbor: Účinnosť N-PCR pri detekcii HPV overili na 30 vzorkách z cytologicky/histologicky suspektnýchcervikálnych lézií, kde bola predchádzajúca detekcia HPV hybridizačnou metódou neúspešná.Druhý súbor tvorilo 21 vzoriek odobratých po konizácii, u ktorých sa hybridizačnou metódou prítomnosťHPV pred zákrokom potvrdila, ale po operácii hybridizácia HPV-DNA bola negatívna.Výsledky: „Nested“ PCR detekovala prítomnosť HPV-DNA vo všetkých 30 vzorkách (100 %) z prvéhosúboru a v 8 vzorkách (38 %) získaných po konizácii.V 20 prípadoch z prvej série bol typovo-špecifi ckou PCR dokázaný vírus HPV 16, v 6 prípadochHPV 18, vo zvyšných 4 prípadoch typizácia zameraná na HPV 16, 18, 31, 33 nebola úspešná. Vovšetkých 8 vzorkách, kde sa pomocou N-PCR preukázala prítomnosť HPV-DNA po konizácii, satypovo-špecifi ckou PCR detekoval HR-HPV 16.Záver: „Nested“-PCR je v súčasnosti pravdepodobne najcitlivejšou metodikou na detekciu HPV.Nevýhodou je pomerne zložitý metodický postup a nároky na prístrojové a personálne vybavenielaboratórií, schopných rutinne využívať túto metodiku.
Objective: The authors tested PCR – so called nested (N-PCR) for the detection of HPV in cervicallesions of uterus. This method is based on repeated amplifi cation of specifi c viral DNA fragments.The sensitivity of N-PCR was compared to the sensitivity of the hybridization method. In the secondpart of the experiment positive samples underwent HPV typing by PCR.Background: The effectiveness of N-PCR for HPV detection was verifi ed on 30 samples fromcytologically/histologically suspected cervical lesions. In these cases, previous detection byhybridization method was unsuccessful. The second group consisted of 21 samples acquired byconisation, in which HPV presence was confi rmed by hybridization method. Post surgery HPVdetection using hybridization technique was negative in this group of patients.Results: By means of N-PCR the presence of HPV DNA was confi rmed in all 30 samples fromthe fi rst group (100%) and in 8 (38%) cases from the group of samples obtained after conisation.Type-specifi c PCR detection indicated HPV type 16 in 20 cases, HPV type 18 in 6 cases (from thefi rst series). In the remaining 4 cases typing for HPV 16, 18, 31 and 33 was negative. In the secondseries all 8 samples were HR-HPV type 16.Conclusion: At the present time, N-PCR is probably the most sensitive HPV detection method. Theonly real disadvantages of the given technique are relatively high costs of diagnostics equipmentand the requirement of highly qualifi ed personel.
- MeSH
- DNA primery aplikace a dávkování diagnostické užití chemie MeSH
- lidé MeSH
- nádory děložního čípku diagnóza etiologie MeSH
- Papillomaviridae genetika patogenita MeSH
- plošný screening MeSH
- polymerázová řetězová reakce metody přístrojové vybavení MeSH
- prognóza MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
- srovnávací studie MeSH
Přestože PCR detekce mykotických patogenů v klinických vzorcích se na stránkách odborných časopisů objevuje již více než dvacet let, je použití této metody pro rutinní diagnostiku invazivní aspergilózy stále diskutabilní. A to i přesto, že metody molekulární biologie již našly své stálé místo v mnoha odvětvích moderní mikrobiologie. Genotypizace bakteriálních kmenů rezistentních na antibiotika, molekulární epidemiologie, ale i rutinní detekce, např. virových infekcí z nejrůznějších klinických materiálů je v dnešní době zcela běžnou praxí. Ve všech těchto oblastech znamenalo zavedení metody PCR diagnostiky zrychlení, zfpřesnění a zjednodušení celého procesu. Tento přehledový článek má za cíl ukázat, v čem je detekce původců mykotických infekcí jiná a proč se ji dosud nepodařilo zavést do rutinní praxe.
PCR detection of fungal pathogens in clinical samples has been discussed in journals for more than two decades. However, its use for diagnosing invasive aspergillosis is still controversial, despite the fact that molecular methods are routinely used in various fields of modern microbiology. These are e. g. genotyping of bacterial strains resistant to antibiotics, molecular epidemiology or routine detection of viral infections in clinical material. PCR methods have made the diagnostic apphcations faster, simpler and more accurate. This review deals with issues related to molecular methods for diagnosing invasive fungal infections and the main factors limiting their use in everyday clinical practice.
Cíl: Cílem retrospektivní studie bylo sumarizovat a zhodnotit výsledky pacientů s podezřením na infekci rodem Chlamydia vyšetřených pomocí „in house“ metody nested PCR (polymerázová řetězová reakce). Studie pracuje s daty získanými vyšetřením pacientů v letech 2001-2003 z regionu východních Čech na Oddělení molekulární biologie společného pracoviště Ústavu klinické mikrobiologie (ÚKM) a Ústavu klinické biochemie a diagnostiky (ÚKBD). Materiál a metodika: V roce 2001 bylo provedeno 291 vyšetření, v roce 2002 to bylo již 562 a v roce 2003 dokonce 760 vyšetření. Celkem bylo za toto období přijato 1 613 vzorků k vyšetření, z nichž jich bylo 1 587 vyšetřeno (26 nepoužitelných vzorků). Více jak 70 % všech vyšetření se provádělo ze tří druhů materiálu: moči (41,8 % všech vyšetřených vzorků), BALu (bronchoalveolární laváž; 15,3 % všech vyšetřených vzorků) a plné krve (14,9 % všech vyšetřených vzorků). Vyšetření bylo provedeno pomocí „in house“ metody nested PCR využívající primery z oblasti MOMP (ompA) genu Chlamydia spp. Výsledky: Celková pozitivita činila 5,67 %, 1,26 % vzorků bylo vyhodnoceno jako nejasný výsledek a 93,07 % vyšetřovaných vzorků bylo negativních. U mužů byla zachycena PCR pozitivita u 6,11 % a u žen toto číslo činilo 5,35 %. Nejvíce pozitivních vzorků pocházelo z věkových skupin 70-791etých (11,67 %), 10-191etých (6,51 %) a 40-491etých (6,45 %). Celková pozitivita u stěrů z urogenitálního systému byla 6,48 %, z moči 3,92 %, BALu 10,70 % a plné krve 5,51 %.
Purpose of the study. The study was intended to summarize and evaluate the results in patients with a suspected infection by the genus Chiamydia, investigated with an „in-house" method of nested PCR (polymerase chain reaction). The study worked with data from patients living in eastern Bohemia, who were examined in the years 2001-2003 at the Dept. of Molecular Biology a research laboratory shared by the Institute of Clinical Microbiology and the Institute of Clinical Biochemistry and Diagnostics. Material and methods: 291 explorations were done in 2001, in 2002 already 562 and in 2003 their figure reached 760. The total number of samples received for investigation during that period was I 613. 1 587 were actually investigated, 26 were unsuitable and could not be used. More than 70 % of all investigations were done with three types of material: urine (41.8 % of all the investigated samples), BAL (15.3 % of all the investigated samples) and whole blood (14.9 % of all the investigated samples). The investigations were carried out with the „in-house" nested PCR method, which uses primers from the MOMP(ompA) area of the genus Chlamydia spp. Results: Total positivity was 5.67 %, in 1.26 % of the samples the resulted was considered uncertain and 93.07 % of the investigated sampies were negative. In men PCR positivity was 6.11 %, in women 5.35 %. The major proportion of positive samples was from the age groups 70-79 years (11.67 %), 10-19 years (6.51 %) and 40-49 years (6.45 %). Overall positivity in smears from the urogenital system was 6.48 %, from urine 3.92 %, from BAL 10.70 % and from whole blood 5.51 %.
- MeSH
- diagnostické techniky molekulární metody MeSH
- hodnocení výsledků zdravotní péče MeSH
- infekce bakteriemi čeledi Chlamydiaceae diagnóza patologie MeSH
- lidé MeSH
- molekulární biologie metody MeSH
- pohlavní dimorfismus MeSH
- polymerázová řetězová reakce MeSH
- populační charakteristiky MeSH
- retrospektivní studie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
Cíl práce: Zavedení další bezkultivační metody invazivního meningokokového onemocnění, polymerase chain reaction (PCR), která obohatí současně užívané bezkultivační metody a zvýší procento laboratorně potvrzených onemocnění. Materiál a metody: Metoda PCR byla optimalizována na kmenech Neisseria meningitidis B a C. Senzitivita a specificita PCR detekce Neissera meningitidis B a C z klinického materiálu byla hodnocena na 195 vzorcích likvoru od pacientů s invazivním meningokokovým onemocněním (80 vzorku likvoru), non-meningokokovou bakteriálni meningitidou (49 vzorku likvoru) a virovou meningitidou (66 vzorků likvoru). Výsledky: Pro PCR detekci Neisseria meningitidis B a C z likvoru byly zjištěny následující parametry, senzitivita = 0,85, specificita = 0,95, pozitivní předpovědní hodnota = 0,88 a negativní předpovědní hodnota = 0,93. Metoda PCR posada laboratorní potvrzení etiologie u 47,4 % z 19 vyšetřených likvoru u pravděpodobných invazivních meningokokových onemocnění, jejichž meningokoková etiologie nebyla potvrzena klasickými metodami. V současné době je zaváděna semi-nested PCR strategie k detekci Neisseria meningitidis z likvoru, krve a séra, jakož i rozšířená PCR metoda pro detekci Haemophilus influenzae b a Streptococcus pneumoniae z likvoru, krve a séra. Závěr: V Národní referenční laboratoři pro meningokokové nákazy SZÚ Praha byla zavedena PCR metoda detekce Neisseria meningitidis B a C z likvoru a je nabízena k rutinnímu použití.
Objectives: To introdukce a further non-culture method for diagnosis of invasive meningococcal dinase, polymerase chain reaction (PCR), in addition to those currently used to increase the percentage of laboratory confirmed cases. Materials and methods: The PCR method was optimist on Neisseria meningitidis B and C strains. Sensitivity and specificity of PCR detection of Neisseria meningitidis B and C from clinical material was assessed in 195 samples of the cerebrospinal fluid obtained from patiens with invasive meningococcal dinase (80 CSF samples), non-meningococcal bacterial meningitis (49 CSF samples) and viral meningitis (66 CSF samples). Results: The following parameters of the PCR method for detection of Neisseria meningitidis B and C from the CSF were found: sensitivity = 0.85, specificity = 0.95, positive predictive value = 0.88 and negative predictive value = 0.93. PCR gave laboratory confirmation in 47.4 % of 19 CSF samples from patiens with suspected invasive meningococcal dinase, whose meningococcal infection was not confirmed by classical methods. The semi-nested PCR strategy and an extended PCR method for detection of Haemophilus influenzae h and Streptococcus pneumoniae from CSF, blood and serum has been introduced recently in our laboratory. Conclusions: The PCR method for detection of Neisseria meningitidis B and C from the cerebrospinal fluid was introduced in the National Reference Laboratory for Meningococcal Infections in NIPH, Prague and is propřed for routine use.
Pro zrychlení identifikace mykobakteriálních druhů z urychlené kultivace byla zavedeny a optimalizovány molekulárně biologické metody - PCR/RFLP (polymerázová řetězová reakce s následnou restrikční analýzou naamplifikovaného produktu). Pro tyto metody využíváme amplifikaci konzervativních oblastí dna J genu a HSP 65 kDa genu mykobakteriálního genomu. V období od května 1999 do června 2001 bylo identifikováno 144 kmenů klasickými metodami a zároveň metodou PCR/RFLP. Zavedením metody PCR/RFLP byla doba identifikace zkrácena z původních 3 týdnů na 2-7 dní.
A rapid procedure for the identification of cultured Mycobacterium isolates, based on the combination of enzymatic amplificauon and restnction analysis (PCR/RFLP), was optimalized and Qy the polvmerase chain reaction (PCR) is amplified part of dna J gene res. HSP 65 kDA gene common to all mycobacteria. 144 mycobacterial strains were identified parallel by conventional bacteriological determination and by PCR/RFLP from May 1999 to June 2001. Differentiation of Mycobacteria using PCR/RFLP methods can be completed within 2-7 days.
Východisko. Kvantifikace fluorescenčně značených PCR produktů na kapilární elektroforéze (QF PCR) má své limity především v citlivějších analýzách, ve kterých je potřebné zachytit minoritní buněčnou linii a rozpoznat malé změny v závislosti na čase. V těchto případech může být chyba měření a reprodukovatelnost výsledků velmi ovlivněna hlavně lidským faktorem a efektivitou PCR. Hlavním cílem studie bylo posoudit a optimalizovat kvantitativní možnosti inovované QF PCR s přímou návazností na kvantifikaci Y sekvencí u gonozomálních mozaik. Metody a výsledky. Arteficiálně vytvořené Y/X DNA mozaiky byly testovány a kvantifikovány inovovanou QF PCR, která nahrazuje a rozšiřuje real-time PCR. Na základě porovnání intenzity fluorescence PCR produktů po jednotlivých cyklech byly sestrojeny grafy nárůstu fluorescence pro různá ředění. Analýzou podílu signálu vnitřní kontroly a příslušné mozaiky byla sestrojena kalibrační křivka pro kvantifikaci Y sekvencí. Pro výpočet vzácných mozaik byl sestaven empirický vzorec. Závěry. Rozšíření QF PCR o manuální real-time PCR eliminuje meze QF PCR a zpřesňuje kvantifikační analýzy založené na PCR. Novelizovaný DNA diagnostický přístup – IQF PCR, který se vyznačuje vysokou citlivostí a přesností, umožňuje významný posun v analýze gonozomálních Y/X mozaik.
Background. Quantification of fluorescence labelled PCR products on capillary electrophoresis (QF PCR) has limits primarily in the possibility of more sensitive analyses to detect minority cell lines and small time related variations. PCR efficiency and human factor affect measuring error and reproducibility of results in these cases. The aim of this work was to assess and optimise of innovated (I)QF PCR in quantification of Y sequences in gonosomal mosaics. Methods and Results. Artificially prepared Y/X mosaics were tested and quantified by IQF PCR, which replaces real-time PCR. Comparison of relative fluorescence to PCR cycles in different Y/X dilutions was plotted on the graphs. Calibration curve for Y sequences quantification was set by the analyses of ratio of Y/X fluorescent signals. An empirical formula was created for the rare mosaic calculation. Conclusions. QF PCR refined by manual real-time PCR eliminates limits of QF PCR and specifies quantitative analyses based on PCR. The outstanding feature of IQF PCR is its high sensitivity and accuracy in quantification of Y/X gonosomal mosaics.
