The frequency of familial hypercholesterolemia (FH) in most populations is about 1/200, and so it is possible to predict that about 50,000 people could be affected by FH in the Czech Republic. The project solution can be divided into two work packages (WP). WP1 is focused on functional analysis of LDLR variants in vitro and methods as flow cytometry, live cell imaging microscopy, qRT-PCR, splicing minigene assay will be applied. LDLR variants will be evaluated on level of protein expression, maturation, localisation, function, and cell response (activation of the unfolded protein response). WP2 is focused on analysis of patients ́ DNA. Re-analysis of FH patients with so far negative genetic diagnosis will be performed by NGS, and methods for determination of the Kringle IV repeat number in the LPA gene (PFGE and Southern hybridisation) will be applied for stratification of patients into a group with lower or higher risk of premature atherosclerosis. All mentioned approaches have a common goal – to identify FH disease-causing variants and obtain new information about FH pathogenicity.

Frekvence familiární hypercholesterolémie (FH) je u většiny populací asi 1/200 a je tedy možné předpokládat, že v ČR by mohlo být postiženo přibližně 50 000 osob. Řešení projektu lze rozdělit do dvou pracovních bloků (PB). PB1 je zaměřen na funkční analýzu variant genu LDLR in vitro a využívá metod průtokové cytometrie, konfokální mikroskopie na živých buňkách, qRT-PCR a sestřihových minigenových testů. Varianty LDLR budou hodnoceny na úrovni exprese, zrání, lokalizace a funkce daného proteinu a na úrovni buněčné odpovědi (aktivace tzv. unfolded protein response). PB2 je zaměřen na analýzu DNA pacientů. Metodou NGS bude provedena re-analýza pacientů s FH s dosud negativní genetickou diagnózou a budou aplikovány metody pro stanovení počtu repetic Kringle IV v genu LPA (PFGE a Southernova hybridizace) pro rozřazení pacientů do skupiny s nižšími nebo vyšší riziky předčasné aterosklerózy. Všechny uvedené přístupy mají společný cíl – identifikovat genetické varianty způsobující FH a získat nové informace o patogenitě FH.

Mechanisms of the effect of genetic variants of LDL receptor and the role of genetic variants of lipoprotein(a) in the development of hypercholesterolemia in FH patients

Doba řešení: 2020-2023

Obsahuje literaturu