Poljrmerázová řetězová reakce je dnes běžnou součástí postupů sloužících k identifikaci osob v soudním lékařství. Tato metoda je jednoduše proveditehiá, pozornost však vždy musí být venována optimalizaci reakčních podmínek a interpretaci výsledků. Z literatury jsou známy případy, kdy při amplifikaci extrémně malého množství DNA (uapř. z jediné buňky) došlo během polymerázové řetězové reakce k preferenčnímu namnožení jen jedné ze dvou v templátové DNA přítomných alel. Pokud se amplifikované fragmenty liší délkou, dochází k preferenční amplifikaci u kratšího z nich, což může b3H příčinou zavádějících výsledků. V prezentované práci bylo 23 skvrn mužské krve na různých textilních materiálech podrobeno izolaci DNA dvěmi různými metodami (pomocí proteinázy K a povaření a pomocí Chelexu 100). Získaná DNA byla amplifikována za použití primerů komplementárních k sekvencím genu pro amelogenin. Systém je vhodný pro určení pohlaví jedince, neboť namnožením X chromosomální sekvence poskytuje fragment o délce 632 bp, amplifikaci Y chromosomální sekvence fragpnent o délce 443 bp. Izolační metoda ,využívající proteinázy K vedla v 17,38 % vzorků k velmi intenzivní preferenční amplifikaci delší alely a tím k nesprávnému výsledku. Izolační metoda založená na působení Chelexu 100 poskytla vždy správný výsledek s jasně patrnou preferenční amplifikaci kratší alely. Uvedené výsledky podtrhují důležitost volby vhodné izolační metody, nutnost pečlivé optimalizace PCR a opatrné interpretace jejích výstupů.

Today, polymerase chain reaction is a common part of approaches sei-ving for identification of individuals in legal medicine. This method is easily practicable, however attention must be paid to the optimization of reaction conditions and to the interpretation of results. From the literature, such cases are known, in which during amplification of extremely small amount of DNA (e.g. from one cell) the polymerase chain reaction preferably amplifies only one of two in the template DNA present alleles. If the amplified fragments differ in length, the shorter one is amplified preferably, and it may be cause of false results. In the presented study, DNA from 23 stains of male blood on different fabrics was isolated by two different methods (by treatment with proteinase Kand boiling and by treatment with Chelex 100). The obtained DNA samples were amplified using primers, they are complementary to the amelogenin gene sequences. The system is suitable for sex determination, because amplification of the X-chromosomal sequence provides a fragment in length of 632 bp, amplification of the Y-chromosomal one a fragpnent in length of 443 bp. The isolation method based on proteinase K led in 17.38 % of samples to the very intensive preferential amplification of the longer allele, and therefore to a false result. The isolation method based on Chelex 100 provided in all cases correct results with clearly recognizable preferential amplification of the shorter allele. The reported results accentuate the meaning of choice of the appropriate isolation method, the need of accurate PCR optimization, and the careful interpretations of its outputs.

Biologický ústav LF UK Plzeň

Method of DNA isolation can affect the rate of preferential amplification of alleles by the polymerase chain reaction

Metoda izolace DNA může ovlivnit stupeň preferenční amplifikace alel polymerázovou řetězovou reakcí = The method of DNA isolation can affect the rate of preferential amplification of alleles by the polymerase chain reaction /

The method of DNA isolation can affect the rate of preferential amplification of alleles by the polymerase chain reaction /

Lit: 9

Souhrn: eng