Duchenneova a Beckerova svalová dystrofie (DMD/BMD) jsou na X chromosom vázaná recesivně dědičná onemocnění způsobená mutacemi v genu, který kóduje protein dystrofiu. U približně 65 % pacientů postižených DMD a BMD se zjistí velká intragenová delece v dystrofínovém genu. Matky postižených chlapců jsou asi ve dvou třetinách případů přenašečkami prislušné mutace v dystrofínovém genu. U postižených probandů se detekce delecí v dystrofínovém genu rutinně provádí metodami vícenásobné polymerázové řetězové reakce (mPCR), RT-PCR (reverzně transkriptázové PCR) s testem na zkrácený protein (PTT - protein truncation test) či Southern blottingem. Detekce delecí u přenašeček je komplikována přítomností kopie genu pro dystrofiu na druhém chromosomu X. V naší studii prezentujeme diagnostickou strategii, která využívá metodu fluorescenční in situ hybridizace (FISH) pro detekci přenašeček DMD/BMD. Použili jsme set šesti kosmidových prob na detekci nejčastěji deletovaných oblastí dystrofínového genu získaných z oddělení lékařské genetiky Leidenské Univerzity (Department of Human Genetics, Leiden University Medical Center). Vyšetřili jsme 14 matek probandů, u nichž byla metodou mPCR nebo RT-PCR/PTT zjištěna a definována delece v dystrofinovém genu. Ve 4 případech byla matka postiženého probanda identifikována jako přenašečka delece v dystrofínovém genu. U čtyř zdravých žen kontrolní skupiny jsme neprokázali delece ve vyšetřovaných exonech. Žádný ze získaných výsledků nebyl v rozporu s výsledky mPCR či RT-PCR/PTT. Na základě našich výsledků jsme tíospěli k závěru, že fluorescenční in situ hybridizace je efektivní a přímou metodou pro identifíkaci přenašeček delecí v dystrofínovém genu a navrhujeme ji jako metodu první volby v diagnostice přenašeček DMD/BMD.

Duchenne and Becker muscular dystrophies (DMD/BMD) are X-linked recessive disorders caused by mutations in the dystrophin gene. A large intragenic deletion has been described in about 65% of DMD/BMD patients. Mothers of affected males are DMD/BMD carriers in two thirds of the cases. Routine deletions detection in DMD/BMD males is performed using multiplex polymerase chain reaction (mPCR), RT-PCR with a protein truncation test (PTT) or using Southern blotting. In females the deletions detection is complicated by the presence of a normal gene copy on the second X-chromosome. We are presenting the diagnostic strategy using FISH for the deletions detection in the dystrophin gene of female DMD/BMD carriers. We have used a set of six cosmid probes for the detection of the most ft-equently deleted areas of the dystrophin gene from the Department of Human Genetics, Leiden University Medical Center. We have examined 14 mothers of DMD/BMD males with a deletion in the dystrophin gene identifíed using mPCR. Four mothers of affected males have been diagnosed as carriers of a deletion in the dystrophin gene. We have revealed no deletion mutations in the exons examined in a control group of four healthy females. No discrepancy has been found between the FISH analysis residts and the results of mPCR. Our results indicate that FISH is an effective and direct method for the identification of DMD/BMD carriers and we suggest this method as a method of a first choice in the identification of DMD/BMD carriers.

Patologicko anatomický ústav FN Brno

Identification of Duchenne and Becker muscular dystrophy carriers by fluorescence in situ hybridization

Identifikace přenašeček Duchenneovy a Beckerovy svalové dystrofie metodou fluorescenční in situ hybridizace = Identification of Duchenne and Becker muscular dystrophy carriers by fluorescence in situ hybridization /

Lit: 30

Souhrn: eng