Ve snaze zabránit možnosti kontaminace při provádění dvoustupňové polymerázové řetězové reakce (nested PCR), byl vyzkoušen postup nested PCR v jedné zkumavce. Vysušená kapka kompletní směsi pro polymerázovou reakci bez Taq DNA polymerázy a kapka hygroskopické Taq DNA polymerázy v 50% glycerolu byly umístěny na dně a na víčku PCR zkumavky a testovány na průběh amplifikace. Shledali jsme plnou aktivitu reakční směsi po dobu jednoho měsíce při skladování zkumavek při -20 °C a jeden týden při skladováni při +20 °C. Tento jednozkumavkový nested PCR systém byl ověřen v klinické praxi u diagnostiky lymské boreliózy.

In order to prevent any possible contamination during nested PCR, we have explored the possibility of nested PCR in a single test tube. A dry drop of the complete mixture for a polymerase reaction without Taq DNA polymerase and a drop of hygroscopic Taq DNA polymerase in 50% glycerol were deposited on the bottom and on the cap of a PCR test-tube to examine the course of amplification. The reaction mixture displayed its full activity over a period of one month with the test-tubes stored at -20 °C and for one week when stored at +20 °C. This single test-tube nested PCR system was verified in clinical practice in the diagnosis of Lyme disease (borreliosis).

1 infekční klinika 2 LF UK FN Bulovka Praha

Single test-tube nested polymerase chain reaction in the detection of Borrelia burgdorferi in body fluids

Dvoustupňová polymerázová řetězová reakce (nested PCR) v jedné zkumavce na průkaz Borrelia burgdorferi sensu lato v biologických tekutinách = Single test-tube nested polymerase chain reaction in the detection of Borrelia burgdorferi in body fluids /

Single test-tube nested polymerase chain reaction in the detection of Borrelia burgdorferi in body fluids /

Lit: 5

Souhrn: eng