Cíl studie: Rozlišit genotypy a subtypy Borrelia burgdorferi sensu lato a Ehrlichia spp. V kulturách, ve vzorcích mozkomíšního moku a krve pacientů a ve tkáních zvířat. Studie byla zaměřena na střední a východní Čechy a Moravu. Materiál: Zkoumáno bylo 16 kmenů borelií, izolovaných z krve a moku pacientů, dále 49 vzorků mozkomíšního moku a krve pacientů s boreliózou, tkáně 80 kusů lovné zvěře a krev 55 krav. Metody: Diferenciaci a kvantifikaci obou patogenů umožnilo užití LightCycler PCR v reálném čase s příměry 16S rRNA, OspA, recA genů a přímá PCR-sekvenační analýza produktů. Výsledky: Prokázali jsme 11 kmenů Borrelia garinii, OspA-typy 5,6,4 a pět kmenů B. afélii. B. burgdorferi sensu stricto nebyla v kulturách prokázána. Sekvenační analýzou PCR produktů ze 49 vzorků mozkomíšního moku jsme prokázali B. burgdorferi s.s. v 20,4 %, B. afzeJii v 12,2 %, B. garinii, subtypy 6, 5, 4 a 3 v 61,3 %, z nichž 8,2 % vzorků obsahovalo kombinace blízkých OspA-typů. Koinfekce s EhrJichia phagocytophiia byla zjištěna v 6,1 % vzorků. E. phagocytophiia subtyp Frankonia I a II jsme prokázali u 12,5 % lovné zvěře a u 9 % skotu. B. burgdorferi sensu strigo a B. garinii byla zjištěna u 17,5 % lovné zvěře. Light Cycler PCR v reálném čase byla méně sensitivní v tekutinách pacientů než v kulturách a v tkáních zvířat. Závěr: Prokázali jsme, že neuroboreliózu mohou působit všechny tři genospecies B. burgdorferi sensu lato. Průběh infekce a symptomy mohou ovlivnit různé OspA- subtypy.

Purpose of the study: To differentiate the genotypes and subtypes of Borreiia burgdorferi sensu lato and Ehrlichia spp. in cultures, in samples of patients' cerebrospinal fluid and blood and in animal tissues. The study focuses on southern and eastern Bohemia and on Moravia. Material: The investigation involved 16 borrelia strains isolated from the blood and CSP of patients and further 49 samples of CSF and blood of borreliosis patients, tissues from 80 pieces of game animals and blood from 55 cows. Methods: The differentiation and quantification of the two pathogenes was done using real-time LightCycler PCR with the primers loS rRNA, OpA, recA genes and direct PCR sequential analysis of the products. Results: We demonstrated 11 strains of Borreiia garinii, OspA types 5, 6, 4 and 5 strains of B. afzelii. B. burgdorferi sensu stricto was not demonstrated in the cultures. The sequential analysis PCR of the products from 49 CSF samples demonstrated B, burgdorferi s.s. in 20.4 %, B. afzelii in 12.2 %, B. garnii subtypes 6, 5, 4 and 3 in 61.3 % - out of these 8.2 % of the samples contained combinations similar to OspA types. Co-infection with Ehrlichia phagocytophila was found in 6.1 % of samples. E. phagocytophila subtype Frankonia I and II was demonstrated in 12.5 % of game animals and in 9 % of cattle. B. burgdorferi sensu stricto and B. garinii were identified in 17.5 % of game. Real-time LightCycler PCR was less sensitive in patients' fluids than in cultures and animal tissues. Conclusions: We demonstrated that all three genotypes of B. burgdorferi sensu lato are capable of causing neuroborreliosis. The course of the infection and its symptoms may be affected by various OspA subtypes.

Státní zdravotní ústav Praha 10

Sequential analysis and real-time LightCycler polymerase chain reaction in the identification of Borrelia and Ehrlichia spp

Identifikace Borrelia a Ehrlichia spp. sekvenční analýzou a LightCycler polymerázovou řetězovou reakcí v reálném čase = Sequential analysis and real-time LightCycler polymerase chain reaction in the identification of Borrelia and Ehrlichia spp /

Sequential analysis and real-time LightCycler polymerase chain reaction in the identification of Borrelia and Ehrlichia spp /

Lit: 21

Souhrn: eng