Článek přehledově pojednává o významu molekulární diagnostiky chronické myeloidní leukemie, molekulárního monitorování účinnosti léčby, zbytkové nemoci a rezistence na terapii a role Národní referenční laboratoře ÚHKT v těchto oblastech vyšetřování. Kvalitativní detekce založená na multiplexové reverzně transkriptázové PCR potvrzuje přítomnost mRNA fúzního genu BCR-ABL ve vyšetřovaném vzorku, a tedy diagnózu chronické myeloidní leukemie. Charakterizace typu přestavby je rovněž významná pro následující monitorování nemoci, které probíhá na úrovni kvantifikace transkriptů BCR-ABL. Kvantitativní stanovování BCR-ABL transkriptů probíhá v pravidelných intervalech a umožňuje sledovat kinetiku nemoci v průběhu léčby na molekulární úrovni. Milníkem úspěšného managementu léčby chronické myeloidní leukemie inhibitory tyrozinových kináz je dosažení velké molekulární odpovědi, která odpovídá úrovni BCR-ABL transkriptů ≤ 0,1 %IS. Tudíž zcela zásadní je sjednocování kvantifikace BCR-ABL mezi laboratořemi, které probíhá na národní a mezinárodní úrovni. Celosvětově je v současné době intenzivně řešena otázka definice a monitorování kompletní molekulární remise, resp. míry hluboké molekulární odpovědi, jelikož s nástupem nové generace léčiv se vyšší procento pacientů dostává do molekulární remise. Nejvíce probádaným a jasně prokázaným mechanizmem rezistence na léčbu TKI jsou mutace kinázové domény v BCR-ABL. Sangerovo sekvenování je zlatým standardem pro rutinní detekci a charakterizace BCR-ABL mutací. V současnosti se do popředí zájmu dostává sekvenování 2. generace, od kterého se očekává možné objasnění vzniku mutací a klonálního vývoje pod tlakem TK inhibitorů a případné dopady této extrémně citlivé technologie na prognózu.

This overview discusses an importance of molecular diagnostics of chronic myeloid leukemia, molecular monitoring of treatment efficacy, residual disease and resistance to therapy and the role of the National reference laboratory ÚHKT in these issues. The qualitative detection based on the multiplex reverse transcriptase PCR confirms the presence of mRNA of the fusion gene BCR-ABL in the examined sample, thus a diagnosis of chronic myeloid leukemia. Characterization of the type of BCR-ABL rearrangement is also important for the subsequent monitoring based on the quantification of BCR-ABL transcripts. The quantitative determination of BCR-ABL transcripts at regular intervals monitors the kinetics of the disease during the treatment at the molecular level. A milestone in the successful management of chronic myeloid leukemia by tyrosine kinase inhibitors is the achievement of the major molecular response, which corresponds to the levels of BCR-ABL transcripts ≤ 0.1%IS. Thus, a fundamental aim is national and international harmonization of BCR-ABL transcripts quantification among laboratories. Currently, definition and monitoring of the complete molecular remission or deep molecular response rates is currently intensively studied worldwide, because of a higher number of patients achieving complete molecular response under 2nd generation TKI. The most studied and proved mechanism of the resistance to TKI therapy are mutations in the kinase domain of BCR-ABL. Sanger sequencing is the gold standard for the routine detection and characterization of BCR-ABL mutations. At present, mutation studies starting with using of the second-generation sequencing, which is expected to help in understanding of mutation development and clonal evolution under the pressure of TK inhibitors and the potential impact of this extremely sensitive technology for the prognosis.

Ústav hematologie a krevní transfuze Praha

Molecular genetics in the chronic myeloid leukemia diagnostics and therapy

Literatura