Cíl práce: Detekovat a charakterizovat kmeny meticilin-rezistentních bakterií Staphylococcus aureus (MRSA) v chovech prasat, na porážce a ve vzorcích masa v tržní síti. Materiál a metody: Celkem bylo v letech 2013-2015 vyšetřeno 890 vzorků, z prvovýroby (prasat na farmách) pocházelo 59 vzorků, ze zpracovatelských podniků (jatek) pocházelo 463 stěrů a z tržní sítě bylo odebráno 368 vzorků vepřového masa a jater. K detekci MRSA byla použita kultivační metoda. Po homogenizaci vzorků bylo provedeno neselektivní pomnožení v pufrované peptonové vodě při 37 °C po dobu 18-24 hodin a dále bylo provedeno dvoustupňové selektivní pomnožení. Pět mililitrů PPV bylo přeneseno do média Mueller-Hinton s 6,5% přídavkem NaCl a po inkubaci, která probíhala ve všech krocích při 37 °C po dobu 18-24 hodin, byl 1 ml inokulován do trypton-sojového bujónu s cefoxitinem a aztreonamem. Další den pak byla suspenze vyočkována na Baird-Parker a Brilliance TM MRSA 2 agary. Suspektní kolonie byly konfirmovány metodou PCR, byl detekován fragment SA442 specifický pro kmeny druhu S. aureus, mecA gen kódující rezistenci k meticilinu a bylo provedeno potvrzení příslušnosti izolátu ke klonálnímu komplexu CC398. Dále byla stanovena rezistence k panelu 11 antimikrobiálních látek za použití diskové difuzní metody. Výsledky: V rámci studie bylo získáno 51 kmenů MRSA, 15 pocházelo od živých prasat, 31 izolátů z jatek a 5 bylo detekováno ve vzorcích z tržní sítě. Ke klonálnímu komplexu CC398 náleželo 47 (92,2 %) kmenů MRSA. Čtyři izoláty non-CC398 byly získány z prostředí dvou porážek a pocházely od zvířat ze tří různých farem. Izoláty často vykazovaly vícečetnou rezistenci. U izolátů MRSA byla detekována rezistence k erytromycinu (36; 70,6 %), tetracyklinu (29; 56,9 %), fluorochinolonům (7; 13,7 %), ko-trimoxazolu (6; 11,8 %) a aminoglykosidům (4; 7,8 %). Závěr. V potravinách živočišného původu byly detekovány izoláty MRSA náležející do klonálního komplexu CC398, jenž pochází z chovů hospodářských zvířat. Tyto kmeny jsou často charakterizovány vícečetnou rezistencí. Role potravního řetězce v šíření LA-MRSA zatím není jednoznačně objasněna.

Objectives: To detect and characterize strains of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) on pig farms, at slaughterhouses and meat samples at retail sale. Material and Methods; A total of 890 samples were examined in the years 2013-2015, comprising 59 samples from primary production (pig farms), 463 swabs from processing plants (slaughterhouses) and 368 samples of pork meat and liver collected at retail sale. The culture method was used for the detection of MRSA. After homogenization, the samples were enriched in buffered peptone water at 37 °C for 18-24 hours and two-stage selective enrichment was performed. Five milliliters of PPV were transferred to Mueller-Hinton medium with addition of 6.5% NaCl and after incubation at 37 °C for 18-24 hours, 1 ml was inoculated into tryptone soy broth with cefoxitin and aztreonam. The suspension was plated onto Baird-Parker and Brilliance TM MRSA 2 agar on the next day. Suspected colonies were confirmed by PCR, the specific S. aureus fragment SA442, the mecA gene encoding resistance to methicillin and relation to the clonal complex CC398 were detected. Further, resistance test to a panel of 11 antimicrobial agents using the disk diffusion method was performed. Results: Within this study, 51 MRSA strains were obtained, of which 15 originated from live pigs, 31 isolates were from slaughterhouses and 5 were detected in retail samples. Forty-seven (92.2 %) MRSA strains belonged to the clonal complex CC398. Four non-CC398 isolates were obtained from two slaughterhouses and came from three farms. The strains often showed multiple resistance. In some MRSA isolates, resistance to erythromycin (36; 70.6 %), tetracychne (29; 56.9 %), fluoroquinolones (7; 13.7 %), co-trimoxazole (6; 11.8 %) and aminoglycosides (4; 7.8 %) was detected. Conclusion: MRSA isolates of the clonal complex CC398 dominate in foods of animal origin. These strains originate from livestock and are often characterized by multiple resistance to antimicrobials. The role of the food chain in the spread of LA-MRSA is not yet clearly understood.

Veterinární a farmaceutická univerzita Brno

Výzkumný ústav veterinárního lékařství v v i Brno

Prevalence and characteristics of MRSA strains isolated from pigs on farms, at slaughterhouses and in pork meat at retail sale in the Czech Republic

Literatura