Hlavní stanovisko práce: Na základě literárních údajů autoři upozorňují na význam hodnocení integrity DNA ve spermiích při vyšetřování příčin neplodnosti. Informace je doplněna vlastními experimentálními výsledky získanými kometovým testem a komerčním kitem Halosperm. Cíl: Abnormality v uspořádání chromatinu a/ nebo struktuře DNA spermií mohou výrazně sni- žovat fertilizační potenciál jedince i při normálním spermiogramu. Při identifikaci příčin mužské neplodnosti je proto v posledních letech kladen důraz i na hodnocení integrity DNA ve spermiích. Na našem pracovišti jsme se rozhodli k těmto účelům použít kometový test a komerčně dostupný test Halosperm s cílem porovnat obě metody při vyšetřování kontrolních jedinců a pacientů s poruchami plodnosti. Soubor pacientů a metody: U 32 kontrolních jedinců, 24 mužů s neplodností a 26 mužů s cévními poruchami mužských pohlavních orgánů (MPO) byla provedena konvenční analýza semene a následně vyšetřeny hladiny fragmentace DNA ve spermiích pomocí kometového test a Halospermu. Výsledky: Korelační analýza potvrdila dobrou shodu mezi výsledky obou metod (Pearsonův korelační keficient r=0,241; p<0,05), na rozdíl od kometového testu však výsledky Halospermu korelovaly i s motilitou (r=0,4365; p<0,001). Naproti tomu při hodnocení kometovým testem obě skupiny pacientů vykazovaly výrazně vyšší poškození DNA ve spermiích než kontroly (t-test, v obou případech p<0,001), zatímco s pomocí Halospermu se podařilo prokázat zvýšení hladin fragmentované DNA oproti kontrolám pouze u skupiny mužů s neplodností (p<0,001). Z hodnot kometového testu v kontrolním souboru byla stanovena hladina poškození 32 % Tail DNA jako horní mez tolerančního intervalu indikující snížený fertilizační potenciál. Závěr: Kometový test se osvědčil jako vhodná doplňková metoda ke standardnímu vyšetření kvality spermatu.

Major statement: Based on published data, the authors highlight the importance of assessment of sperm DNA integrity in the investigation of causes of infertility. Information is complemented by our own experimental results obtained by comet assay and commercial kit Halosperm. Aim: Abnormalities in chromatin arrangement and/or structure of the sperm DNA can significantly reduce the fertilizing potential of individuals, even in cases with normal results of conventional sperm analysis. Therefore, evaluation of sperm DNA integrity is currently emphasized in identifying the causes of male infertility. For this purpose, we decided to use comet assay and a commercially available test Halosperm with the aim to compare the two methods in the investigation of control subjects and patients with fertility disorders. Patients and Methods: Conventional semen analysis was performed in 32 control subjects, 24 men with infertility and 26 men with vascular disorders of male genital organs, and then the levels of DNA fragmentation in the sperm were examined using the comet assay and Halosperm. Results: Correlation analysis confirmed good agreement between the results of both methods (Pearson coeficient r=0.241; p< 0.05); unlike the comet assay, the results of Halosperm correlated well with sperm motility (r=0.4365; p<0.001). While comet assay showed significantly higher sperm DNA damage in both groups of patients than in the controls (t-test, both p<0.001), Halosperm demonstrated increased levels of fragmented DNA over control values only in the group of men with infertility (p<0.001). From the results of comet assay in the control group, 32% of fragmented DNA per sperm was determined as the upper limit of the tolerance interval indicating a reduced fertilizing potential. Conclusion: The comet assay has proven to be a useful complementary method to the standard examination of sperm quality

Urologická klinika 2 LF UK a FN Motol Praha

Ústav biologie a lékařské genetiky 2 LF UK a FN Motol Praha

Ústav experimentální medicíny v v i AV ČR Praha

Our first experience with the comet assay in the study of sperm DNA integrity

Literatura