Zavedli jsme metodu detekce chromozomální DNA Treponema pallidum subsp. pallidum dvoukrokovou (nested) PCR reakcí, která amplifikuje část genu TP0319, kódujícího hypotetický membránový lipoprotein (gen tmpC). Vyšetřili jsme 138 sér od 111 dospělých pacientů v primárním, sekundárním, časně latentním a pozdně latentním stadiu a také pacientů s podezřením na syfilis. Chromozomální DNA T. p. pallidum se v séru dospělých pacientů nepodařilo detegovat. Při vyšetření 11 kožních a slizničních stěrů (7 genitálních, 4 faryngeálních) jsme nalezli 6 pozitivních od 3 pacientů ve stadiu primární a sekundární syfilis. Pozitivní byl rovněž jeden stěr pacienta s časnou kongenitální syfilis. Sekvenování DNA genů TP0136 a TP0548 z pozitivních vzorků prokázalo výskyt dvou kmenů sekvenčně identických s kmenem T. p. pallidum SS14 a dvou unikátních syfilitických kmenů, doposud u T. p. pallidum nepopsaných. U jednoho vyšetřovaného novorozence s pozitivním výsledkem vyšetření kožního vzorku jsme prokázali treponemální DNA také v séru a v cerebrospinálním moku. Pokroky v molekulární typizaci T. p. pallidum v klinickém materiálu přispějí k rozvoji epidemiologie syfilis a přinesou možnosti rozlišení mezi reinfekcí a reaktivací syfilitického procesu.
An in-house two-step nested PCR amplification targeting the tmpC gene (TP0319, encoding putative membrane lipoprotein) was used for detection of chromosomal DNA of Treponema pallidum subsp. pallidum in clinical specimens.We tested 138 blood serum samples from 111 adult patients with suspected, primary, secondary, early or late latent syphilis. T. p. pallidum DNA was not detected in any of the analyzed specimens. Out of 11 mucocutaneous swabs (7 genital and 4 pharyngeal), 6 collected from 3 patients with primary or secondary syphilis tested positive. One skin swab from a patient with early congenital syphilis was also positive as were his serum and cerebrospinal fluid samples. DNA sequencing of the genes TP0136 and TP0548 from the positive samples revealed two strains with DNA sequences identical to that of T. p. pallidum strain SS14 and two unique previously undescribed T. p. pallidum strains. The advances in molecular typing of T. p. pallidum in clinical specimens will be of relevance to the epidemiology of syphilis and will allow for clinical discrimination between reinfection and syphilitic reactivation.
- MeSH
- diagnostické techniky molekulární metody statistika a číselné údaje využití MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- lidé MeSH
- odběr biologického vzorku klasifikace metody statistika a číselné údaje MeSH
- polymerázová řetězová reakce klasifikace metody statistika a číselné údaje MeSH
- sekvence nukleotidů účinky léků MeSH
- techniky typizace bakterií metody statistika a číselné údaje využití MeSH
- Treponema pallidum genetika izolace a purifikace klasifikace MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- srovnávací studie MeSH
- O autorovi
- Tomášek, Václav, 1893-1962 Autorita
- O autorovi
- Tomášek, Václav, 1893-1962 Autorita
- MeSH
- biofilmy klasifikace MeSH
- hlen mikrobiologie MeSH
- operon genetika imunologie MeSH
- Staphylococcus epidermidis patogenita MeSH
- Publikační typ
- kongresy MeSH
- MeSH
- audiovizuální záznam využití MeSH
- mikrobiologie výchova MeSH
- školy lékařské MeSH
- Publikační typ
- kongresy MeSH
K průkazu protilátek proti fosfolipáze D (PLD) Arcanobacterium haemolyticum byl použit neutralizační test na neživném krevním agaru připraveném z ovčích erytrocytů senzibilizovaných equi-faktorem Rhodococcus equi. Celkem bylo vyšetřeno 433 sér od 404 nemocných s příznaky akutní tonzilitidy ve věku 1 až 251et. Protilátky proti PLD byly nalezeny u 28 pacientů (6,9 %). Ve 116 sérech osob bez příznaků tonzilitidy byly protilátky proti PLD zjištěny jednou (0,9 %). Dosažené titry se pohybovaly od 4 do 1i4. Z 84 dvojvzorků byl pětkrát zaznamenán signifikantní, tj. alespoň čtyřnásobný pohyb titru: třikrát šlo o sérokonverzi, dvakrát o pokles titru. Protilátky byly nalezeny nejčastěji ve věkové skupině 11-15 let (u 10 dětí z 97, tj. v 10,3 %). U 253 osob s tonzilitidou byl k dispozici výsledek souběžného bakteriologického vyšetření výtěrů z krku. A. haemolyticum se podařilo izolovat ve 3 případech (1,2 %), ale pouze na podkladě inhibice stafylokokové hemolýzy v okolí kolonií A. haemolyticum. Všechny tři osoby byly rovněž sérologicky pozitivní. Naše výsledky tedy ukazují, že u nemocných s tonzilitidou lze prokazovat neutralizační protilátky proti PLD A. haemolyticum.
Neutralization test carried on a non-nutrient blond agar prepared from sheep erythrocytes sensibilized with equi factor of Rhodococcus equi was used for the detection of antibodies against phospholipase D (PLD) of Arcanobacterium haemolyticum. Altogether, 433 sera from 404 patients aged 1 to 25 years with the signs of acute tonsillitis were examined. Antibodies against PLD were found in 28 patients (6.9 %). In 116 sera from persons without the signs of tonsillitis the antibodies against PLD were detected in one tase (0.9 %). The titres reached the values from 4 to 1i4. Out of 84 paired sera, the significant change of the titre, i.e. at least the four-fold one, was observed five times: three times as the seroconversions, twice as the declines of the titre. The antibodies were found most often in children aged 11 to 15 years, 10 times out of 97 (10.3 %). In 253 patients with the tonsillitis, the result of the parallel bacteriologic examinations of throat swabs was at the disposal. A. haemolyticum was successfully isolated in 3 cases, but only owing to the inhibition of staphylococcal hemolysis around its colonies. All three cases were also serologically positive. Consequently, our results show that neutralizing antibodies against PLD ofA. haemolyticum can be detected in patients with tonsillitis.
Kolonie Arcanobacterium haemolyticum na běžném krevním agaru mohou být snadno přehlédnuty.Proto byla vyvinuta diagnostická půda, na níž kolonie A. haemolyticum vytvářejí nápadnou zónuúplné hemolýzy. Jde o krevní agar připravený z Columbia Blood Agar Base (Oxoid) a 5 % pranýchovčích erytrocytů senzibilizovaných equi-faktorem (EF) Rhodococcus equi. Jako optimální se uká-zalo použití 10 jednotek aktivity (JA) EF/ml. EF byl titrován na neživném médiu skládajícím sez Agar Purified (Difco) a 5 % praných ovčích erytrocytů senzibilizovaných b-hemolyzinem (BL)Staphylococcus aureus v množství 10 JA/ml. Na stejné půdě se titroval stafylokokový b-hemolyzinna základě svého přímého hemolytického efektu. Přes velmi zřetelné hemolytické reakce kontrol-ních kmenů na diagnostické půdě s EF se během dvou let cíleného vyšetřování klinických vzorkůnepodařilo vykultivovat A. haemolyticum ani v jednom případu z 2 597 výtěrů z krku; A. haemolyti-cum však bylo na této půdě vypěstováno ve dvou případech z 223 stěrů z ran a z kožních afekcí.Navržená půda umožňuje na základě hemolytického synergismu rovněž rychlou diagnostiku druhůCorynebacterium ulcerans, Dermatophilus congolensis a Listeria monocytogenes.
Colonies of Arcanobacterium haemolyticum on common blood agar can be easily overlooked.Therefore a diagnostic medium was developed, on which A. haemolyticum colonies produce a con-spicuous zone of complete hemolysis. The medium under question is blood agar prepared from theColumbia Blood Agar Base and 5% washed sheep erythrocytes sensitised with equi factor (EF) ofRhodococcus equi. Optimally, 10 activity units (AU) of EF per 1 ml were used. EF was titrated ona non-nutrient medium consisting of agar Purified (Difco) and 5% washed sheep erythrocytessensitized with b-haemolysin (BL) of Staphylococcus aureus, 10 AU/ml. On the same medium,staphylococcal BL was titrated on the basis of its direct haemolytic effect. Despite the very distincthaemolytic reaction of the control strains evident on the diagnostic medium with EF, A. haemolyti-cum failed to grow from 2.597 throat swabs examined especially for the particular microbe duringthe a period of two years. However, A. haemolyticum was isolated on this medium twice from 223swabs from wounds and skin lesions. The proposed medium makes also the rapid diagnosis of speciesCorynebacterium ulcerans, Dermatophilus congolensis and Listeria monocytogenes on the basis ofhaemolytic synergism possible.
- MeSH
- biomedicínský výzkum MeSH
- Corynebacterium izolace a purifikace MeSH
- dítě MeSH
- dospělí MeSH
- grampozitivní nesporulující tyčinky izolace a purifikace MeSH
- hemolýza MeSH
- hemolyzinové faktory diagnostické užití izolace a purifikace MeSH
- kultivační média speciální diagnostické užití MeSH
- lidé MeSH
- Rhodococcus equi MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
