Cíl: Zavedení, charakterizace a porovnaní dvou metod kvantitativního stanovení viru hepatitidy B-HBV DNA. Obě metody používají totožného principu měření na bázi reál time PCR. První z nich je prováděna pomocí analytického systému LightCycler Roche Diagnostics a druhá na přístroji Rotorgene Corbett Research. Předmětem porovnávání metod byla linearita a pracovní rozsah stanovení, mez detekce, klinická senzitivita a specifičnost obou metod a jejich diagnostická správnost. Materiál: Oběma metodami bylo simultánně analyzováno 68 sér pacientů s diagnostikovanou chronickou hepatitidou B v různých fázích choroby. Výsledky: Regresní analýzou jsme stanovili hodnotu korelačního koeficientu r= 0,995 (p < 0,0001), potvrzující velmi úzký vztah mezi souborem výsledků získaných oběma metodami. Přesnost měření obou metod nepřekračuje hodnotu CV = 15 %. Obě metody disponují vysokým rozsahem linearity měření v intervalu lO 3-lO 8 kopií HBV DNA/ml. Diagnostická správnost srovnávaných metod byla vyhodnocena ROC analýzou. Pro obě metody byla zjištěna hodnota klinické sensitivity 100 %, klinická specifičnost metody LightCycler činila 96 % ve srovnání s 95 % u metody Rotorgene. Klinická efektivita, vyjádřená hodnotou AUC (plochy pod krivkou) byla 0,995 (LightCycler) respektive 0,994 (Rotorgene). Metoda LightCycler vykázala vyšší hodnotu pozitivního pravděpodobnostního poměru + LR = 26 oproti hodnotě 19,5 u Rotorgenu. Závěr: Uvedené údaje vypovídají o velmi vysoké hodnotě klinické užitečnosti obou metod.

Objective: Introduce, characterize and compare two methods of hepatitis virus B DNA quantification in serum. Both methods are based on real time PCR principle. Two measurement systems, LightCycler Roche and Rotorgene Corbett Research were used. We evaluated and compared their precision, linearity, limit of detection, clinical sensitivity, clinical specificity and diagnostic accuracy. Materials: By use of mentioned methods we analysed 68 sera from patients with diagnosed chronic hepatitis B in different stages of disease. Results: Correlation coefficient 0,995 (p < 0,0001) obtained by linear regression analysis shows excellent relationship between results of evaluated methods. The coefficients of variation for repeatability and reproducibility indicate very good measurement precision and are in all cases lower than 15 %. Linearity of both methods has very broad range lO 3 -lO 8copies of HBV DNA/ml. It means that majority of samples may be analysed without repeating after sample dilution. By use of ROC analysis we determined AUC value 0,995, clinical sensitivity 100 %, specificity 96 % and positive likelihood ratio (+LR) 26,0 for LightCycler, resp. AUC = 0,994, specificity 95 %, +LR = 19,5 for Rotorgene. Conclusion: All analytical and clinical characteristics of introduced methods show their usefulness for diagnosis and treatment of chronic hepatitis B.

Ústav klinické biochemie a diagnostiky FN Hradec Králové

Quantitation of hepatitis B virus DNA by real-time detection PCR on LightCycler instrument and on Rotorgene instrument

Kvantifikace HBV DNA metodou real-time PCR na přístrojích LightCycler a Rotorgene = Quantitation of hepatitis B virus DNA by real-time detection PCR on LightCycler instrument and on Rotorgene instrument /

Quantitation of hepatitis B virus DNA by real-time detection PCR on LightCycler instrument and on Rotorgene instrument /

Lit: 14

Souhrn: eng