Za zlatý standard je v laboratorní diagnostice leptospir považován mikroaglutinační test (MAT), který však je pozitivní asi až po 7-14 dnech od počátku infekce. Proto jsme vyvinuli metodu PCR, která je nezbytná ke správné a především včasné diagnostice leptospirózy,. V tomto projektu jsme vybírali z různých typů průkazu DNA (amplifikace úseků různých genů dle literatury) nejvhodnější set primerů (LipL32) pro detekci leptospir. Testovali jsme specificitu a senzitivitu pomocí různě koncentrovaných sérovarů leptospir a jim příbuzných bakterií. Provedli jsme optimalizaci konvenční PCR a zjistili vhodné koncentrace primerů, hořčíku a nejvhodnější teplotu annealingu. Cílem tohoto projektu bylo zavést metodu PCR do rutinního laboratorního provozu a zvýšit tak spektrum nabízených služeb zákazníkům.

The microscopic agglutination test (MAT) is designated the gold standard for the laboratory diagnosis of leptospirosis; nevertheless, the immune system needs 7 to 14 days after infection to produce enough antibody for a positive result. In an attempt to enable an earlier diagnosis of leptospirosis, we have developed a PCR assay. To this end, different types of DNA detection (amplification of gene sequences from the literature) and primer sets (LipL32) were compared. The specificity and sensitivity were tested using different concentrations of various serovars of Leptospira and some related bacteria. The conventional PCR assay was optimized and the appropriate concentrations of primers and magnesium were identified as well as the optimal annealing temperature. The aim of the project was to implement the PCR assay into routine laboratory practice, thus extending the range of service we can offer to our customers.

NRL pro leptospiry SZÚ CEM

PCR detection of DNA of pathogenic Leptospirae in the National Reference Laboratory for Leptospira

Literatura