Cíl: Proveřit možnost monitorace efektu anti TNFα terapie u pacientů léčených pro revmatoidní artritidu pomocí multiplexového stanovení sérových hladin vybraných biomarkerů odrážejících základní patofyziologické mechanizmy a aktivitu onemocnění. Metody: Byla hodnocena skupina 23 pacientů s aktivní revmatoidní artritidou, z toho 20 žen, 3 muži, průměrný věk 48,6 ± 10,3 let, průměrná hmotnost 68,5 ± 13 kg před léčbou a po 14–16 týdnech léčby s inhibitorem TNFα adalimumabem 40 mg subkutánně podávaným jednou za dva týdny (N = 21) nebo etanerceptem 25 mg podávaným podkožně dvakrát týdně (N= 2). Z 23 pacientů, 16 (70 %) užívalo současně s glukokortikoidy (GC) a 19 subjektů (84 %) methotrexát. Krev byla odebrána ze žíly pomocí odběrové zkumavky Vacuette (Greiner Bio One, Rakousko). Krevní vzorky byly odstřeďeny při 640 g po dobu 10 min. Sérum bylo rozděleno na alikvoty a zamraženo do provedení analýzy při teplotě -75 °C. Sérové hladiny IL 1β, IL10, IL6, VEGF, MMP9 a adiponektinu byly stanoveny multiplexovou analýzou pomocí technologie XMAP komerčním kitem Human Cardiovascular 1, Lineo Research (USA) podle návodu výrobce k použití. Analýza byla provedena na přístroji Luminex 100 a analýza dat pomocí Luminex 100 IS software verze 2.3. Tyto parametry byly korelovány s krevními hladinami CRP, PCT, TK (stanoveno radioenzymaticky), hmotností pacienta a DAS-28. Pro všechny parametry byl vypočten průměr, medián, směrodatná odchylka, minimální a maximální hodnoty z výsledků před a po terapii. Data byla analyzována Wilcoxonovým párovým testem a koeficientem pořadové korelace. Výsledky: Potvrdili jsme statisticky signifikantní snížení hladiny CRP (p = 0,001), VEGF (p = 0,05) a adiponektinu (p = 0,05), aktivity onemocnění hodnocené pomocí DAS-28 (p = 0,001) a významné zvýšení hmotnosti po léčbě (p = 0,01). Pokles hodnot všech tří prozánětlivých interleukinů nebyl významný. Závěry: Naše pilotní studie prokázala potencionální využitelnost i limity multiplexové analýzy cytokinů a některých dalších biomarkerů v monitorování léčby revmatoidní artritidy. Ke stanovení doporučení pro rutinní klinickou praxi je nezbytné zvolit vhodnější panel a rozšířit skupinu pacientů.

Methods: A group of 23 patients with active rheumatoid arthritis, 20 female, 3 male, average age 48.6 years ± 10.3, average weight 68,5 ± 13 kg was evaluated prior therapy and after 14–16 weeks of therapy with TNFα blocking agent adalimumab 40 mg subcutaneously every two weeks (No = 21) and etanercept 25 mg subcutaneously twice weekly (No = 2). Of 23 patients, 16 (70 %) of subject were treated concomitantly with glucocorticoids (GC), and 19 subject ( 84 %) with methotrexate. The blood was collected by venipuncture using Vacuette collection tubes (Greiner Bio-One, Austria). The blood samples were centrifuged at 640 g for 10 min, serum was aliquoted and stored until analysed in freezer at -75 °C. Serum levels of six parameters: IL 1β, IL10, IL6, VEGF, MMP9 and adiponectin were assessed by multiplex immunoanalysis using xMAP technology with commercially available multiplex kits Human Cardiovascular 1 panel and Human Cytokines-Chemokines panel, both from Linco Research (USA) according to manufacturer‘s instructions for use. The analysis was performed on Luminex 100 instrument and data analysis on Luminex 100 IS software version 2.3. These parameters were correlated with blood levels of CRP, PCT, TK (assessed by traditional immunoassays), patient weight and DAS-2828. For all parameters there was counted average, median, standard deviation, minimal and maximal values from results prior and after therapy. Furthermore, data were analysed by Wilcoxon pair test and Rank-order correlation. Results: We confirmed significantly decreased CRP levels (p = 0,001), VEGF(p = 0,05) and adiponectin (p = 0,05), disease activity score DAS-28 (p = 0,001) and significant increase of weight after therapy (p = 0,01). Decrease of all of three proinflammatory interleukins were not significant. Conclusions: Our pilot study showed the usefulness and limitations of multiplex measurements of cytokines and some other biomarkers in monitoring of rheumatoid arthritis therapy. But to establish guidelines for the routine clinical practice it is necessary to select preferable panel and to enlarge a group of the patients.

Department of Clinical Pharmacology University Hospital in Pilsen Charles University Prague Medical Faculty in Pilsen Czech Republic

Research Laboratory for Immunoanalysis University Hospital in Pilsen Charles University Prague Medical Faculty in Pilsen Czech Republic

Monitorování sérových biomarkerů během léčby pacientů s revmatoidní atritidou. Pilotní studie

References provided by Crossref.org

Literatura