Cílem studie bylo zavedení detekce bodové mutace na 12. kodonu prvního exonu Ki-ras genu u nemocných s adenokarcinomem pankreatu použitím tří modifikací polymerázové řetězové reakce a následným restrikčním štěpením (PCR-RFLP) naamplifikovaných produktů. K detekci byly využity tři dvojice primerů generujících artefaciální místo pro restrikční enzymy s pouze jednou alelickou formou. Použitím dvoustupňové PCR-RFLP a dvou modifikací jednostupňové PCRRFLP bylo vyšetřeno 12 DNA vyizolovaných ze solidních tumorů (5), pankreatických sekretů (6) a z lymfocytů periferní krve (1) u pacienta s generalizováným stadiem onemocnění. Studie podává srovnání použitých metod k detekci mutace na Ki-ras genu a kloní se k závěru, že dvoustupňová PCR-RFLP analýza vzhledem ke své citlivosti je vhodnou metodou pro detekci bodových mutací bez použití oligonukleotidových hybridizací a sekvenace DNA.

Present study was undertaken to detect Ki-ras point mutation at codon 12 in pancreatic adenocarcinomas (CaP) using the polymerase chain reaction-restriction fi"agment lengths polymorphism (PCR-RFLP). Three modifications of PCR-RFLP were performed with a mismatched primers creating a recognition site with only one allelic form (wild or mutated). Using two-step PCR-RFLP and two modifications of one-step PCR-RFLP we examined 5 resected adenocarcinomas of pancreas, 6 pancreatic juices and one DNA sample from peripheral blood of patient with generalized stadium of CaP. We compare all techniques and conclude, that the very sensitive two step PCR-RFLP is a suitable method for detection point mutations and eliminates the need for either oligonucleotide hybridization or DNA sequencing.

UK 1 LF 1 interní klinika VFN Praha

Detection of point mutation of Ki-ras gene by PCR technology

Detekce bodové mutace na Ki-ras genu PCR technikou = Detection of point mutation of Ki-ras gene by PCR technology /

Detection of point mutation of Ki-ras gene by PCR technology /

Lit: 18

Souhrn en