S100A11 belongs to the family of calcium binding S100 proteins. Some S100 proteins exert cytokine-like properties and are associated with the activity of rheumatoid arthritis (RA) and with the structural progression. Recent papers show an accumulation of S100A11 in the cartilage of patients with osteoarthritis and its implication in chondrocytes hypertrophy, cartilage catabolism and inflammation. Our preliminary data show significant elevation of S100A11 in serum and synovial fluid and its relation to inflammation and disease activity in RA. Our aim is to analyze the levels of S100A11 in patients with early and established RA and their relation to the laboratory and clinical markers and to the radiographic progression of RA. The effect of extra- and intracellular S100A11 with respect to inflammation and tissue damage will be studied in vitro. We expect that S100A11 will correlate with the activity and structural progression of RA and take part in the process of joint destruction and inflammation. This project should help to characterize the role of S100A11 in the pathogenesis of RA.

S100A11 patří do rodiny kalcium vázajících S100 proteinů. Některé S100 proteiny vykazují prozánětlivé vlastnosti cytokinů, mají vztah k aktivitě choroby a rentgenové progresi u pacientů s revmatoidní artritidou (RA). Byla popsána zvýšená exprese S100A11 v artrotické chrupavce a jeho vliv na hypertrofii chondrocytů, katabolismus chrupavky a zánět. Naše předběžná data ukazují signifikantně zvýšené hladiny S100A11 v séru a synoviální tekutině u pacientů s RA a jejich vztah k zánětu a aktivitě RA. Proto je naším cílem analyzovat S100A11 u pacientů s časnou a etablovanou RA a jeho vztah k laboratorním a klinickým markerům onemocnění a k rentgenové progresi. Bude zkoumán vliv S100A11 na buňky kloubního kompartmentu “in vitro“, a jeho intracelulární role. Očekáváme, že S100A11 bude mít vztah k aktivitě a rentgenovému poškození u pacientů s RA a přímo se podílet na procesu kloubního poškození a zánětu. Tento projekt by měl pomoci charakterizovat význam S100A11 v patogenezi RA.

• MeSH
• antiflogistika MeSH
• autoimunita MeSH
• cytokiny MeSH
• myozitida MeSH
• prognóza MeSH
• proteiny S100 MeSH
• revmatoidní artritida MeSH
• systémový lupus erythematodes MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• revmatologie
• alergologie a imunologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

The exact role of visfatin in the processes of pathological joint diseases has not yet been fully explained. The grant project focuses upon the evaluation of the function visfatin fulfils in the immune response in the course of RA. Using cytometry methods, visfatin-producing cells of the peripheral blood and synovial fluid will be characterised in more detail. Using gene interference, the intracellular role of visfatin in these cells will be monitored and the impact of biotherapeutic pharmacological intervention upon visfatin levels will be monitored in order to obtain a more detailed characteristics of visfatin as a potential prognostic marker for rheumatoid arthritis, and, furthermore, to study the potential therapeutic application of its inhibition in autoimmune diseases.

Přesná úloha visfatinu v průběhu patologických kloubních onemocnění není doposud zcela objasněna. Grantový projekt je zaměřen na zhodnocení podílu visfatinu na imunitní odpovědi v průběhu RA. Pomocí cytometrických metod budou blíže typizovány buňky periferní krve a synoviální tekutiny produkující visfatin. Pomocí genové interference bude sledována intracelulární role visfatinu v těchto buňkách a bude hodnocen vliv farmakologické intervence biologickou léčbou na hladiny visfatinu s cílem blíže charakterizovat visfatin jako potenciální prognostický marker revmatoidní artritidy a dále prostudovat potenciální terapeutické využití jeho inhibice u autoimunitních onemocnění.

• MeSH
• antigeny CD20 krev   účinky léků   MeSH
• biologická terapie MeSH
• biologické markery analýza   MeSH
• nikotinamidfosforibosyltransferasa MeSH
• prognóza MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• revmatoidní artritida patofyziologie   MeSH
• RNA interference MeSH
• synoviální tekutina MeSH
• TNF-alfa antagonisté a inhibitory   krev   účinky léků   MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biochemie
• farmacie a farmakologie
• alergologie a imunologie
• revmatologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

S100A4 protein is increased in the blood circulation of patients with established RA and correlates with the disease activity. The protein will be analysed by ELISA in patients with early and established disease and its plasma levels will be correlated with laboratory markers and clinical characteristics of the disease, particularly with radiographic progression. S100A4 can regulate some pathophysiological functions involved in tissue destruction; therefore we will study the effect of the protein on chondrocytes and osteoblasts, and intracellular function of S100A4 using gene array and protein determination in “in vitro” experiments. The effect of S100A4 blockade on synovial inflammation and joint destruction will be studied in an experimental model of arthritis.

S100A4 je ve zvýšených hladinách přítomen v plazmě pacientů s chronickým průběhem RA a koreluje s aktivitou onemocnění. Hladiny S100A4 budou měřeny metodou ELISA u pacientů s časnou a etablovanou RA a jeho hladiny v plazmě budou korelovány s laboratorními a klinickými ukazateli onemocnění, především s rentgenovou progresí. Vzhledem k tomu, že se S100A4 může podílet na regulaci některých patofyziologických mechanismů souvisejících s tkáňovým poškozením, bude významná část našeho projektu zaměřena na studium vlivu S100A4 na chondrocyty a osteoblasty, a intracelulární roli S100A4 v monocytech. Pro „in vitro“ experimenty bude využita metoda genových arrays a proteinové detekce. Vliv inhibice S100A4 na zánět synoviální membrány a destrukci kloubu bude studován na experimentálním myším modelu artritidy.

• MeSH
• ELISA MeSH
• exprese genu MeSH
• malá interferující RNA MeSH
• myši transgenní MeSH
• revmatoidní artritida MeSH
• S100 kalcium vázající protein A4 MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• molekulární biologie, molekulární medicína
• revmatologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Annotation I: Peripheral blood and synovial fluid will be obtained from patients with rheumatoid arthritis and osteoarthritis. Synovial membrane and hyaline cartilage will be obtained from the registry of samples of the Institute of Rheumatology. Annotation II: FABP4 will be analyzed in serum, synovial fluid, synovial membrane and hyaline cartilage. Methods of immunohistochemistry, commercially available ELISA kit, Western blot and gene expression will be used for the analysis. An extracellular role ofFABP4 will be studied with stimulation experiments on cell lines of monocytes, synovial fibroblasts and chondrocytes. An impact of FABP4 on the expression of genes participating in the pathogenesis of rheumatic diseases will be studied. Annotation III: An intracellular role of increased expression of FABP4 by the cells of articular compartment will be evaluated by gene interference. A relationship of FABP4 to an inflammatory state, activity and severity of the disease will be evaluated.

Anotace I: Periferní krev a synoviální tekutina bude získána od pacientů s revmatoidní artritidou a osteoartrózou. Synoviální membrána a hyalinní chrupavka budou získány z registru vzorků Revmatologického ústavu. Monocyty budou izolovány z krve a synoviální tekutiny, synoviální fibroblasty a chondrocyty budou izolovány z příslušných tkání. Anotace II: Protein FABP4 bude analyzován v séru, synoviální tekutině, synoviální membráně a hyalinní chrupavce. K analýze budou použity metody imunohistochemické, komerčně dostupný ELISA kit, Western blot a genová exprese. Extracelulární úloha FABP4 bude studována pomocí stimulačních experimentů na liniích monocytů, synoviálních fibroblastů a chondrocytů. Studován bude vliv FABP4 na expresi genů podílejících se na patogenezi revmatických onemocnění. Anotace III: Intracelulární úloha zvýšeně exprimovaného FABP4 buňkami kloubního kompartmentu bude hodnocena pomocí genové interference. Bude hodnocen i vztah FABP4 k zánětlivému stavu, aktivitě a závažnosti onemocnění

• MeSH
• ELISA MeSH
• exprese genu MeSH
• imunohistochemie metody   MeSH
• obezita patofyziologie   MeSH
• osteoartróza MeSH
• proteiny vázající mastné kyseliny MeSH
• revmatoidní artritida MeSH
• western blotting MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• revmatologie
• biochemie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

1. Patients with arthritis will be examined in the Early Arthritis Clinic based on referral by a primary care physician within 2 weeks. The cohort will be prospectively followed, clinical exams, laboratory tests and imaging studies will be performed in accordance with a prespecified schedule. Results will be recorded in electronic CRF. 2. Total RNA will be isolated from whole blood, mRNA will be transcribed to cDNA and expression profile of 90 genes targeted for their possible important role in immune inflammatory response will be performed using the TaqMan Low Density Array. 3. CD11c on monocytes will be measured after separation of the population of inflammatory a resident monocytes (CD14+/CD16dim a CD14+/CD16bright) in samples obtained at baseline and follow-up visits. 4. Levels of selected S100 proteins will be measured in serum and/or plasma using commercial ELISA kits (CircuLex). Measurements will be done at baseline, at 3 months and possibly after a year.

1. V ambulanci pro časnou artritidu budou vyšetřeni nemocní s klinicky přítomnou artritidou na doporučení ošetřujícího lékaře do 2 týdnů. Kohorta bude prospektivně sledována, podle předem určeného harmonogramu budou prováděna klinická, laboratorní a zobrazovací vyšetření. Výsledky budou zaznamenávány do elektronického CRF. 2. Celková RNA bude izolována z plné periferní krve, mRNA bude převedena na cDNA a pomocí TaqMan Low Density Array bude detekován expresní profil 90 genů vytypovaných pro možnou významnou úlohu v imunitní zánětlivé reakci. 3. CD11c na monocytech bude měřeno po vymezení populace zánětlivých a rezidentních monocytů (CD14+/CD16dim a CD14+/CD16bright) ve vzorcích získaných na počátku onemocnění a při každé z kontrolních návštěv. 4. Hladiny vybraných S100 proteinů budou stanoveny v séru a/nebo v plazmě pomocí komerčně dostupných ELISA kitů (CircuLex). Měření bude provedeno při zařazení, po 3 měsících a případně po roce.

• MeSH
• ambulantní zařízení MeSH
• antigeny CD11c MeSH
• biologické markery MeSH
• cytokiny MeSH
• ELISA MeSH
• prognóza MeSH
• proteiny S100 analýza   MeSH
• raná péče MeSH
• revmatoidní artritida diagnóza   terapie   MeSH
• rizikové faktory MeSH
• sekvenční analýza hybridizací s uspořádaným souborem oligonukleotidů MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• revmatologie
• alergologie a imunologie
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Peripheral blood monocytes will be obtained after the blood withdrawal and synovial fibroblasts after the mechanical and enzymatical modifications of the synovial tissue obtained during the joint surgery. Extracellular roles will be studied by stimulatory experiments with an additional inhibition of the RAGE and intracellular roles by means of gene silencing using small interfering (si) RNA. Nucleofector device Amaxa will be used for cell transfection. Gene expression of apoptotic molecules (bax, bcl-family, XIAP, smac), pro-inflammatory cytokines (TNF, IL-1, IL-6 and MCP-1) and matrix degrading enzymes (MMP-1, MMP-3 and MMP-13) will be analyzed using real-time PCR. The protein synthesis will be confirmed by means of ELISA and Western-blot. Activationof the programmed cell death pathway will be measured using fluorimetric Caspase-3 activity assay.

Periferní krevní monocyty budou získány stočením krve po krevním odběru a synoviální fibroblasty po mechanické a enzymatické úpravě synoviální tkáně získané během transplantace kloubu. Extracelulární působení bude studováno pomocí stimulačních experimentů s využitím inhibice receptoru RAGE a intracelulární úloha pomocí utlumení genové exprese za použití malého inhibitoru (si) RNA s využitím nukleofekčního přístroje Amaxa. Genová exprese apoptotických molekul (bax, bcl rodiny, XIAP, smac), prozánětlivýchcytokinů (TNF, IL-1, IL-6 a MCP-1) a matrix degradujících enzymů (MMP-1, MMP-3 a MMP-13) bude analyzována pomocí real-time PCR. Syntéza proteinů bude potvrzena pomocí metod ELISA a Western-blot. Aktivace dráhy vedoucí k programované smrti buněk bude analyzována pomocí fluorimetrické eseje měřící aktivitu kaspázy-3.

• MeSH
• apoptóza MeSH
• cytokiny MeSH
• malá interferující RNA MeSH
• matrixové metaloproteinasy MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• proteiny S100 MeSH
• revmatoidní artritida patofyziologie   MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• revmatologie
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR