Cieľ štúdie: Zhodnotenie využiteľnosti vyšetrovania metylačného stavu vybraných tumor-supresorických génov vo včasnej diagnostike ovariálneho karcinómu. Typ štúdie: Prospektívna klinická štúdia. Názov a sídlo pracoviska: Gynekologicko-pôrodnícka klinika, Ústav molekulovej biológie, Jesseniova lekárska fakulta, Univerzita Komenského, Martin, Slovenská republika. Metodika: V tejto štúdii bola analyzovaná hypermetylácia 5 génov RASSF1A, GSTP, E-kadherín, p16 a APC vo vzorkch ovariálnych tkanív od 34 pacientok – od 13 pacientok s epiteliálnym karcinómom ovárií, od 2 pacientok s border-line tumorom ovária, od 12 pacientok s benígnymi ovariálnymi léziami a od 7 pacientok so zdravým ovariálnym tkanivom. Metylačný stav promotorových oblastí tumor-supresorických génov bol stanovený na základe metylačne špecifickej polymerázovej reťazovej reakcie s využitím dvojkrokového prístupu s bisulfidovou modifikáciou DNA a špecifickými primermi. Výsledky: Analýza metylácie génov odhalila hypermetyláciu génu RASSF1A (46%) a GSTP (8%) len vo vzorkách malígnych ovariálnych tkanív. Gény E-cad, p16 a APC boli metylované v malígnych aj benígnych tkanivových vzorkách. Metylácia vyšetrovaných génov bola prítomná nezávisle od klinického štádia a od gradingu tumorov. Bol pozorovaný trend zvýšeného počtu a selektívnej prítomnosti metylovaných génov so stúpajúcim štádiom ochorenia. Nebola zaznamenaná asociácia medzi pozitivitou metylácie a histologickými subtypmi ovariálneho karcinómu. Záver: Metylácia RASSF1A a GSTP je asociovaná s ovariálnym karcinómom. Odhalená génovo-selektívna pozitivita metylácie a zvyšujúce sa množstvo metylovaných génov so stúpajúcim štádiom ochorenia by mohli byť užitočným molekulárnym markerom pre včasnú detekciu ovariálneho karcinómu. Stále je však potrebné pátrať po ďalších špecificky a frekventne metylovaných génoch, determinujúcich metylačný fenotyp pre včasnú diagnostiku ovariálnych malignít.

Objective: To evaluate the usefullness of examination of methylation status of selected tumor-supressor genes in early diagnosis of ovarian cancer. Design: Prospective clinical study. Setting: Department of Gynecology and Obstetrics, Department of Molecular Biology, Jessenius Medical Faculty, Commenius University, Martin, Slovak Republic. Methods: In this study we analyzed hypermethylation of 5 genes RASSF1A, GSTP, E-cadherin, p16 and APC in ovarian tumor samples from 34 patients – 13 patients with epithelial ovarian cancer, 2 patients with border-line ovarian tumors, 12 patients with benign lesions of ovaries and 7 patients with healthy ovarian tissue. The methylation status of promoter region of tumor-supressor genes was determined by Methylation Specific Polymerase Chain Reaction (MSP) using a nested two-step approach with bisulfite modified DNA template and specific primers. Results: Gene methylation analysis revealed hypermethylation of gene RASSF1A (46%) and GSTP (8%) only in malignant ovarian tissue samples. Ecad, p16 and APC genes were methylated both in maignant and benign tissue samples. Methylation positivity in observed genes was present independently to all clinical stages of ovarian cancer and to tumor grades. However, there was observed a trend of increased number and selective involvement of methylated genes with increasing disease stages. Furthermore, there was no association between positive methylation status and histological subtypes of ovarian carcinomas. Conclusion: RASSF1A and GSTP promoter methylation positivity is associated with ovarian cancer. The revealed gene-selective methylation positivity and the increased number of methylated genes with advancing disease stages could be considered as a useful molecular marker for early detection of ovarian cancer. However, there is need to find diagnostic approach of specifically and frequently methylated genes to determining a methylation phenotype for early detection of ovarian malignancies.

Gynekologicko pôrodnícka klinika JLF UK a UNM Martin

Methylation of selected tumor-supressor genes in benign and malignant ovarian tumors

Lit.: 34