BACKGROUND: The Czech Republic decided to build the frozen red blood cell (RBC) bank for military contingency and civil emergency preparedness. Storage methods were validated with (51)Cr recovery measures out to 21 days postthaw. STUDY DESIGN AND METHODS: A total of 139 apheresis RBC units collected in additive solution (additive solution 3 [AS-3] or saline-adenine-glucose-mannitol [SAG-M]) were obtained from volunteers by double erythrocytapheresis; all were sterilely glycerolized, frozen, stored for at least 30 days at a minimum of -65 degrees C in collection or cryogenic bags, thawed, sterilely deglycerolized, and stored at 4 +/- 2 degrees C for up to 21 days in AS-3 or SAG-M. Units were sampled before storage and after thaw weekly. Metabolic intermediates and (51)Cr recovery measures were obtained to determine the index of therapeutic effectiveness (ITE). RESULTS: Despite losses associated with cryoconservation and eventual transfer to cryogenic bags, 3-week storage with optimum ITE was obtained with frozen storage in primary collection or cryogenic bags and postthaw storage in AS-3. Such cells would pass as acceptable in vitro hematology and biochemistry variables. CONCLUSIONS: A system for frozen RBC storage with 3-week, postthaw, liquid storage has been validated. With commercially available components and automated processing, it is capable of supporting civilian rare blood and emergency and international military combat and peacekeeping support use patterns.

• MeSH
• adenin MeSH
• chlorid sodný MeSH
• citráty MeSH
• dospělí MeSH
• erytrocyty metabolismus   MeSH
• fosfáty MeSH
• glukosa MeSH
• hemoglobiny analýza   MeSH
• konzervace krve normy   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• radioizotopy chromu diagnostické užití   MeSH
• separace krevních složek MeSH
• zmrazování MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

Práce je dílčím výsledkem projektu, jehož cílem byl vývoj a zavedení metodiky získávání a dlouhodobého skladování erytrocytů pro strategické, speciální a léčebné potřeby Armády České republiky a státu. Cílem studie bylo zhodnocení kvality a stability různým způsobem připravených kryokonzervovaných erytrocytů ve smyslu vstupního meziproduktu před zmražením. Předmětem zkoumání byly erytrocyty s jen sníženým obsahem leukocytů, jednak získané z dvojité erytrocytaferézy, tj. erytrocyty z aferézy (EAR, skupina A) nebo erytrocyty bez buffy-coatu získané z odběrů plné krve, tj. erytrocyty bez buffy-coatu (EBR, skupina B) a dále erytrocyty deleukotizované, též připravené z dvojité erytrocytaferézy – erytrocyty z aferézy deleukotizované (EAD, skupina C) nebo erytrocyty deleukotizované z plné krve (ERD, skupina D). Zkoumané erytrocyty byly zmražené ve 40% glycerolu, skladované při -65 °C po minimální dobu 30 dní a po rozmražení rekonstituované v Nutricelu a skladované ve 4±2 °C maximálně 21 dní. Glycelorizace a deglycerolizace byla prováděna v uzavřeném systému prostřednictvím zařízení Haemonetics ACP 215. Zkoumány byly in vitro hematologické a biochemické parametry ve dnech 0-7-14-21 po deglycerolizaci. Změny sledovaných parametrů pravděpodobně souvisí především s rozpadem nevitálních erytrocytů poškozených v průběhu procesu zmražení a rozmražení. Některé z nich (např. 2,3-DPG, fosfor, pH a osmolality) ukazují na vytváření rovnováhy v prvních 7 dnech po rekonstituci. Výsledky sledovaných parametrů prokazují vyšší stabilitu kryokonzervovaných EAD/ERD po rekonstituci, ve srovnání s EAR/EBR. U EAD/ERD je patrný pomalejší vývoj hemolýzy s nižší hodnotou hemoglobinu v supernatantu v závislosti na délce skladování. Rekonstituované deleukotizované erytrocyty vykazují významně vyšší časovou stabilitu. Žádné změny mezi EAD/ERD a EAR/EBR nebyly pozorovány v hladině 2,3-DPG parametru, což bude pravděpodobně ukazatel fyziologické funkce přežívajících erytrocytů. Na rozdíl od vlivu deleukotizace na kvalitu rekonstituovaných erytrocytů nebyl pozorován vliv typ odběru (aferéza nebo odběr plné krve). Studie tedy prokazuje lepší vlastnosti zmražených, rekonstituovaných a následně skladovaných až 21 dnů při 2–6 °C erytrocytů deleukotizovaných ve srovnání s erytrocyty bez buffy-coatu.

The article has summarized partial results of the project of evaluation and implementation method for collection and long-term storage packed red cells (RBC) for strategic, special and therapeutic findings of the Army of the Czech Republic as well as the state. The aim of the study was quality and stability evaluation of cryopreserved RBCs collected by different methods. The source of studied RBCs was double erytrocytapheresis (Group A), whole blood collection with buffy-coat removing (Group B), double erytrocytapheresis with in-line leukofiltration (Group C) and whole blood collection with in-line leukofiltration (Group D). This study compares “non-leukodepleted” RBCs (Group Aand B) and “leukodepleted” RBCs (Group C and D). Tested RBCs were frozen in 40% glycerol and stored at minimum - 65°C for at least 30 days, thawed, deglycerolized, and stored for 21 days at 4±2°C. Glycerolization and deglycerolization were performed with functionally closed system using the Haemonetics ACP 215 machine. In-vitro haematological and biochemical variables were tested on day 0-7-14-21 after deglycerolization. The observed changes of studied haematological and biochemical parameters could be most probably consistent with gradual degradation of non-survival RBCs after freeze-thaw-wash-reconstitution process. Some variables (such as 2,3-DPG, phosphate levels, pH and osmolality) indicate the equilibrium establishment in RBCs during the first 7 days after reconstitution. The results suggest the superior stability of leukodepleted cryopreserved RBCs, collected from whole blood or apheresis, reconstituted in AS-3 after reconstitution related to the non-leukodepleted RBCs, obtained by use of the both methods. It is confirmed by the slow haemolysis and supernatant haemoglobin growth in dependence of storage time. Reconstituted leukodepleted RBCs exhibit significantly higher time stability. No change of 2,3-DPG variable was observed between nonleukodepleted and leukodepleted RBCs. It could be supposed, that this variable is the physiological function of survival RBCs. In contrast to the leukodepletion, the primary source of red blood cells collection (apheresis or whole blood) does not affect stability a quality of RBCs units reconstituted in AS-3. The study demonstrate the superiority of leukodepleted RBCs obtained by apheresis or from whole blood over the non-leukodepleted RBCs (non-filtrated RBCs), reconstituted in AS-3, for extended storage up to 21 days at temperature of 2–6 °C.

• Klíčová slova
• Nutricel,
• MeSH
• cytaferéza metody   MeSH
• financování organizované MeSH
• glycerol terapeutické užití   MeSH
• katastrofy MeSH
• kryoprezervace metody   využití   MeSH
• transfuze erytrocytů metody   MeSH
• vojenské lékařství MeSH
• Publikační typ
• hodnotící studie MeSH

• Publikační typ
• abstrakt z konference MeSH

Práce je dílčím výsledkem projektu, jehož cílem byl vývoj a zavedení metodiky získávání a dlouhodobého skladování erytrocytů pro strategické, speciální a léčebné potřeby Armády České republiky a státu. Jako základní zkoumaná metoda bylo zvoleno mražení erytrocytů, získaných metodou dvojité erytrocytaferézy, ve vysoké koncentraci glycerolu při -85 °C a teplotě skladování -65 °C a nižší. Glycerolizace a deglycerolizace erytrocytů, včetně jejich závěrečné resuspenze v Nutricelu (AS-3), byla prováděna uzavřeným a automatizovaným systémem na zařízení Haemonetics ACP 215. Stabilita EAK rekonstituovaných v AS-3 byla ověřena jak klinickým hodnocením u zdravých dobrovolníků pomocí tzv. indexu terapeutické účinnosti, tak biochemickými a hematologickými parametry. Rekonstituované erytrocytární jednotky byly hodnoceny ve dnech 0, 7, 14 a 21 po rozmražení 51Cr značenými erytrocyty ve dvou skupinách: mražené a skladované v primárních vacích (skupina A) a mražené a skladované po přepuštění do speciálních vaků pro hluboké zmražení (skupina B). Bylo měřeno 24hodinové přežívání autologních erytrocytů podávaných zdravým dobrovolníkům a stanoven index terapeutické účinnosti (ITE) za pomoci tzv. freeze-thaw-wash-recovery (FTW%) závislého na množství hemoglobinu v odpadu po promytí rozmražených erytrocytů. Celkem bylo zmraženo, rekonstituováno a takto vyšetřeno 104 TU erytrocytů. Hodnocené erytrocyty v obou skupinách vykazují téměř shodné hodnoty ITE: 74,01 (±CI95 %: 71,97–76,04) a 74,02 (±CI95 %: 71,18–76,87) bez ohledu na délku sledované doby uchovávání po rekonstituci (21 dní). U skupiny B bylo zjištěno 4% snížení hodnoty přežití po 24 hod. a 4% zvýšení hodnoty FTW%. Hodnoty hemolýzy na konci doby skladování byly u všech hodnocených skupin nižší než 1 %. Z hematologických a biochemických parametrů byly sledovány změny hemoglobinu, hematokritu, leukocytů, hemolýzy, osmolality, pH, K, P, ATP, NH3 a 2,3-DPG. Také výsledky měření těchto laboratorních parametrů prokázaly dobrou použitelnost zmražených erytrocytů ještě 3 týdny po rozmražení, rekonstituci v Nutricelu a uchovávání při teplotě 2–6 °C.

The article summarised partial results the project of evaluation and implementation method for collection and longterm storage packed red cells (RBC) for strategic, special and therapeutic findings Army of Czech Republic as well as the country. The essential surveyed method was freezing of RBC collected by double erythrocytapheresis in high glycerol at -80 °C and stored at -65 °C and lower. Glycerolisation, deglycerolisation and resuspension in Nutricel (AS- 3) was performed with the Haemonetics ACP 215 machine by closed system. Stability of RBC in AS-3 was evaluated by clinical study with health volunteers by index of therapeutic effectiveness (ITE) as well as by biochemical and haematological parameters. Reconstituted RBC units were evaluated in days 0,7,47 and 21 after thawing by 51Cr labelled red cells in two groups: freezing and storage in primary collection bags (group A) and freeing and storage in special bags for deep freezing (group B). 24-hour survival autologous red cell at health volunteers were observed and set ITE and via “freeze-thaw-wash-recovery” (FTW%) dependent on amount of haemoglobin in waste after washing deglycerolised RBCs. Totally 104 RBC units were frozen, reconstituted and measured. Evaluated RBCs both groups were almost statistically identical ITE: 74.01 (±CI95%: 71.97–76.04), 74.02 (±CI95%: 71.18–76.87) and 74.5 (±CI95%: 71.62–77.38), respectively, regardless of storage time after RBCs deglycerolization. The 4-percent decrease of 24-hour posttransfusion survival (%) means as well as 4-percent increase of FTW% means were statistically significant between RBCs group B and A. Haemolysis in the end of storage was below 1% at both group. From haematological and biochemical parameters haemoglobin, haematocrit, leucocytes, haemolysis, osmolality, pH, potassium, phosphorus, ATP, ammoniac and 2,3-DPG were observed. Results of these tests demonstrate good applicability frozen RBC 3 week after thawing and reconstitution in Nutricel and following storage at 2–6 °C.

• Klíčová slova
• Nutricel,
• MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• konzervace krve metody   MeSH
• kryoprezervace metody   využití   MeSH
• lidé MeSH
• separace krevních složek metody   MeSH
• transfuze erytrocytů metody   MeSH
• vojenské lékařství MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• hodnotící studie MeSH