Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) represents a bioanalytical strategy frequently used for rapid screening of mycotoxin deoxynivalenol (DON) in cereals and derived products. Due to a considerable affinity of some anti-DON antibodies to structurally similar DON metabolites, such as DON-3-glucoside (DON-3-Glc) and 3-acetyl-DON (3-ADON), a significant overestimation of DON concentrations may occur. A validation study of six commercial DON-dedicated ELISA kits, namely Ridascreen DON, Ridascreen FAST, DON, DON EIA, AgraQuant DON Assay, Veratox 5/5, and Veratox HS was carried out on wheat, barley, and malt matrices. Performance characteristics of all tested ELISAs were determined using aqueous solutions of DON, DON-3-Glc, and 3-ADON analytical standards, further with extracts of artificially spiked blank cereals, and finally with matrix-matched standards of all three compounds. In the final phase, the accuracy of data was assessed through a comparison of DON concentrations determined by particular ELISAs and reference ultra-high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method. For this purpose, both quality control materials and a comprehensive set of naturally and artificially contaminated samples of wheat, barley, and malt were analyzed. High cross-reactivities were proved for both DON-3-Glc and 3-ADON in the majority of examined assays, and moreover, a considerable contribution of some matrix components to overestimation of DON results was confirmed.
- MeSH
- artefakty * MeSH
- ELISA normy MeSH
- glukosidy chemie MeSH
- ječmen (rod) chemie mikrobiologie MeSH
- mykotoxiny analýza MeSH
- protilátky chemie MeSH
- pšenice chemie mikrobiologie MeSH
- reagenční diagnostické soupravy normy MeSH
- specificita protilátek MeSH
- tandemová hmotnostní spektrometrie MeSH
- trichotheceny analýza chemie MeSH
- vysokoúčinná kapalinová chromatografie MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Alkylresorcinols (ARs) are amphiphilic phenolic lipids and their two main metabolites, 3-(3,5-dihydroxyphenyl)-propanoic acid (DHPPA) and 3,5-dihydroxybenzoic acid (DHBA), can be used as biomarkers of whole grain wheat and rye intake. The aim of this study was to develop antibodies against DHBA and DHPPA for use in ELISA analysis. Good calibration curves were obtained for ELISA using alkaline phosphatase (AP) conjugates. The highest sensitivity for DHPPA was found using a reagent combination of anti-DHPPA-BSA and DHPAA-AP in a direct ELISA (IC50=1.5μmol/L), and for DHBA using a reagent combination of anti-DHBA-OV and DHBA-AP (IC50=1.3μmol/L). Calibration was conducted in the linear range (0.3-27.4μmol/L), with limit of detection (LOD) 0.1μmol/L. Intra and inter CVs was in the range of 0.7-7.2% and 5.1-11.5%, respectively, for DHPPA and 1.3-9.4% and 3.5-20%, respectively, for DHBA. Mean recovery was 104% for DHPPA and 102% for DHBA. The ELISA method developed was then used for analysis of 120 urine samples from free-living men and women that had previously been analysed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). ELISA produced several-fold higher values than GC-MS. Application of high-resolution Orbitrap mass spectrometry (HR Orbitrap MS) allowed several compounds, including novel putative AR metabolites, to be identified, synthesised and confirmed as compounds with high ELISA cross-reactivity.
- MeSH
- alkalická fosfatasa chemie MeSH
- dietní sacharidy moč MeSH
- ELISA metody normy MeSH
- hapteny chemie MeSH
- hydroxybenzoáty moč MeSH
- jedlá semena metabolismus MeSH
- kalibrace MeSH
- králíci MeSH
- kyseliny fenylpyrohroznové moč MeSH
- lidé MeSH
- limita detekce MeSH
- plynová chromatografie s hmotnostně spektrometrickou detekcí MeSH
- protilátky chemie MeSH
- pšenice metabolismus MeSH
- resorcinoly moč MeSH
- žito metabolismus MeSH
- zkřížené reakce MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- králíci MeSH
- lidé MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- MeSH
- biologické markery * analýza MeSH
- C-reaktivní protein analýza MeSH
- Crohnova nemoc diagnóza MeSH
- dítě MeSH
- ELISA metody normy využití MeSH
- feces * MeSH
- hemoglobiny analýza MeSH
- idiopatické střevní záněty * diagnóza MeSH
- klinické laboratorní techniky metody normy využití MeSH
- leukocytární L1-antigenní komplex * diagnostické užití MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- odběr biologického vzorku metody normy MeSH
- recidiva prevence a kontrola MeSH
- senzitivita a specificita MeSH
- ulcerózní kolitida diagnóza MeSH
- výsledek terapie MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- kazuistiky MeSH
ELISA is widely used for urinary 8-oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine (8-oxodG) analysis. It is the method of choice for laboratories that lack specialized chromatographic instrumentation. It allows fast, high-throughput sample analysis without a need for extensive samples processing. However, a lack of agreement between ELISA and chromatographic methods confines its application to the assessment of relative urinary 8-oxodG levels. We investigated various ELISA modifications, seeking optimal conditions that would yield a good agreement between ELISA and high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS /MS). Purification of urine by solid phase extraction (SPE), then incubation with the anti-8-oxodG antibody at 4 °C overnight and subsequent normalization of 8-oxodG levels per urinary creatinine resulted in a near-perfect correlation and agreement in mean levels between ELISA and HPLC-MS /MS (r=0.917, p<0.001; and paired t-test p=0.803, respectively). Our data show that, after introduction of a simple modification, ELISA quantification urinary 8-oxodG substantially improves. Although more sample manipulation is required, the method retains its key advantages over chromatography (high-throughput analysis that does not require expensive instrumentation). This represents a significant advance for the ELISA, and encouraging its use in more studies adding to our knowledge of the role of this biomarker of oxidative stress in health and disease.
- MeSH
- biologické markery moč MeSH
- deoxyguanosin analogy a deriváty moč MeSH
- dospělí MeSH
- ELISA normy MeSH
- extrakce na pevné fázi MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- oxidační stres MeSH
- senzitivita a specificita MeSH
- tandemová hmotnostní spektrometrie normy MeSH
- vysokoúčinná kapalinová chromatografie normy MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Cíl studie: Metabolismus železa musí být velmi pečlivě regulován. Klíčovým systémovým regulátorem je peptidový hormon hepcidin, který způsobuje “uzamčení” železa uvnitř buňky; to pak nemůže být utilizováno. Dialyzovaní pacienti často trpí anémií, která je způsobena mnoha faktory, mj. stavem mikrozánětu a také zřejmě zvýšenou retencí hepcidinu v důsledku snížené glomerulární filtrace. Naším cílem bylo popsat vztahy mezi hepcidinem a dalšími parametry metabolismu železa, zánětu a erytropoezy u těchto pacientů. Typ studie: Observační Název a sídlo pracoviště: Ústav klinické biochemie a hematologie LF UK a FN v Plzni, Alej Svobody 80, 304 60 Plzeň Materiál a metody: Do studie bylo zařazeno 164 chronicky dialyzovaných pacientů (věk 66 ± 13, 25 - 92 let; 101 mužů a 63 žen) a 37 zdravých kontrol (věk 55 ± 20, 21 - 92 let; 16 mužů a 21 žen), u kterých byl stanoven jejich kompletní krevní obraz, parametry metabolismu železa, zánětu a výživy. Výsledky: Koncentrace železa, transferrinu a hemoglobinu byla významně nižší u dialyzovaných pacientů (p<0,0001), naopak ferritin (p<0,0001), solubilní transferrinové receptory(p<0,05), hepcidin (p=0,0003), CRP a IL-6 (p<0,0001) byly u těchto pacientů významně vyšší než u zdravých kontrol. Hepcidin slabě koreloval pozitivně s CRP a ferritinem a negativně s transferrinem u dialyzovaných pacientů, u zdravých kontrol nebyla nalezena žádná korelace hepcidinu s ostatními parametry. Závěr: Zdá se, že vliv zánětu na hladiny hepcidinu není u hemodialyzovaných pacientů zcela zásadní a na jeho koncentraci se podílí i jiné faktory, např. jeho retence.
Objective: Peptide hormone hepcidin is a key systemic regulator of the iron metabolism. Hepcidin binds to the iron cell exporter ferroportin so iron is kept in the cells unavailable for erythropoiesis. The synthesis of hepcidin is up-regulated by high iron stores and inflammation. Dialyzed patients have very often impaired iron management – they suffer from anemia, which is caused by many factors including the state of micro inflammation and hepcidin retention due to decreased glomerular filtration rate. Our aim was to describe the relationship of hepcidin and other parameters of iron metabolism, erythropoiesis and inflammation. Design: Observation Settings: Institute of Clinical Biochemistry and Hematology, Charles University Hospital in Pilsen, Alej Svobody 80, 304 60 Plzeň Material and Methods: Complete blood cell count, iron, ferritin, transferrin, CRP, albumin, creatinine, hepcidin, soluble transferrin receptors (sTfR) and IL-6 were measured in samples from 164 patients included in chronic hemodialysis program (age 66 ± 13, 25 - 92 years), 63 women and 101 men and 37 control healthy volunteers (age 55 ± 20, 21 - 92 years), 21 women and 16 men. Results: Iron, transferrin and hemoglobin were significantly lower in the patients group (p<0.0001) while ferritin (p<0.0001), sTfR (p<0.05), hepcidin (p=0.0003), CRP and IL-6 (p<0.0001) were significantly higher in the patients group. Hepcidin weakly positively correlated with CRP and ferritin and weakly negatively correlated with transferrin in hemodialyzed patients. No correlation of hepcidin with other biochemical parameters in controls was found. Conclusion: It seems that the influence of inflammation on hepcidin levels in hemodialyzed patients is not crucial and other factors including its retention in end-stage renal disease participate.
- Klíčová slova
- hemodialýza, metabolismus železa,
- MeSH
- biochemická analýza krve metody využití MeSH
- biologické markery analýza krev MeSH
- chronické selhání ledvin krev metabolismus MeSH
- dialýza ledvin škodlivé účinky MeSH
- dospělí MeSH
- ELISA metody normy přístrojové vybavení MeSH
- ferritin diagnostické užití krev MeSH
- kationické antimikrobiální peptidy diagnostické užití krev MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladý dospělý MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- železo krev metabolismus MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mladý dospělý MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
Pertuse je vysoce nakažlivé onemocnění závažné svým průběhem zejména pro novorozence a kojence do jednoho roku života. Z epidemiologického hlediska je proto nutným požadavkem rychlé a správné stanovení diagnózy a následná cílená antibiotická terapie osob s pertusí. Spolu s očkováním adolescentů a dospělých proti pertusi tak lze snížit cirkulaci původce onemocnění Bordetella pertussis v populaci na minimum. Skupina reprezentující dvanáct evropských referenčních laboratoří „EU Pertstrain Group“ na základě mnoha studií doporučuje změnit přístup k laboratorní diagnostice pertuse a uvádí ve svých závěrech zásadní pravidla pro sérologickou diagnostiku pertuse.
Pertussis is a highly infectious disease that can have a severe course, particularly in newborns and infants under one year of age. From the epidemiological perspective, there is a need for a rapid and accurate diagnosis of pertussis and subsequent targeted antibiotic therapy. Vaccination of adolescents and adults against pertussis is another step in minimizing the circulation of the causative agent Bordetella pertussis. Based on multiple studies, the EU Pertstrain Group representative of 12 European reference laboratories recommends that the approach to the laboratory diagnosis of pertussis should be revised and summarizes the basic rules of the serological diagnosis of pertussis.
- Klíčová slova
- PCR,
- MeSH
- biologické toxiny škodlivé účinky toxicita MeSH
- dítě MeSH
- dospělí MeSH
- ELISA metody normy využití MeSH
- infekce bakteriemi rodu Bordetella diagnóza epidemiologie prevence a kontrola MeSH
- klinické laboratorní techniky metody normy využití MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- novorozenec MeSH
- odběr biologického vzorku metody normy využití MeSH
- pertuse diagnóza mikrobiologie prevence a kontrola MeSH
- pertusový toxin MeSH
- předškolní dítě MeSH
- sérologické testy metody normy využití MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- novorozenec MeSH
- předškolní dítě MeSH
- Publikační typ
- směrnice pro lékařskou praxi MeSH
Antifosfolipidový syndrom je definován jako klinické projevy hyperkoagulačního stavu (trombóza cév a/nebo komplikace gravidity) spojené s přítomností antifosfolipidových protilátek. Nejčastější klinickou manifestací je hluboká žilní trombóza na dolních končetinách, druhým nejčastějším projevem je ischemická cévní mozková příhoda. V důsledku tromboembolismu velkých cév a/nebo trombotické mikroangiopatie však může dojít k postižení různých orgánů a systémů, a tedy k pestré symptomatologii. Laboratorní diagnostika je založena na opakovaném průkazu antifosfolipidových protilátek. Používají se jednak testy imunoenzymatické (k průkazu tzv. antikardiolipinových protilátek a protilátek proti beta2-glykoproteinu I), jednak testy koagulační (k průkazu tzv. lupusového antikoagulancia). Antifosfolipidový syndrom patří k trombofilním stavům s vysokým rizikem recidivy trombotické příhody. Po prodělané tromboembolické příhodě u nemocných s antifosfolipidovým syndromem je doporučována dlouhodobá (minimálně 12 měsíců) antikoagulační léčba s cílovým INR 2,0–3,0, s nutností uvážení časově neomezené, resp. doživotní léčby. U těhotných žen s antifosfolipidovým syndromem je jako prevence ztráty plodu doporučována kombinace nízké dávky kyseliny acetylsalicylové a profylaktické dávky nízkomolekulárního heparinu.
Antiphospholipid syndrome is defined as clinical manifestations of the hypercoagulable state (vascular thrombosis and/or complications of pregnancy) associated with presence of antiphospholipid antibodies. Most common clinical manifestation is deep vein thrombosis of the lower extremities; the second most common symptom is ischemic stroke. However, as a result of thromboembolism of large vessels and /or thrombotic microangiopathy, it may lead to impairment of various organs and systems, and therefore to varied symptomatology. Laboratory diagnosis is based on repeated detection of antiphospholipid antibodies. Both immunoenzymatic (for the detection of so-called anticardiolipin antibodies and antibodies against beta2-glycoprotein I) and coagulation tests (for the detection of so-called lupus anticoagulant) are used. Antiphospholipid syndrome belongs to thrombophilic states with a high risk of thrombotic event recurrence. After a thromboembolic event history in patients with antiphospholipid syndrome, long-term (minimum 12 months) anticoagulant therapy with target INR 2.0-3.0 is recommended, with the necessity to consider unlimited in time, respectively lifetime treatment. In pregnant women with antiphospholipid syndrome a combination of lowdose acetylsalicylic acid and a prophylactic dose of low-molecular heparin is recommended as a prevention of fetus loss.
- MeSH
- antifosfolipidové protilátky diagnostické užití MeSH
- antifosfolipidový syndrom epidemiologie klasifikace patofyziologie MeSH
- antikardiolipinové protilátky diagnostické užití MeSH
- autoimunitní nemoci MeSH
- ELISA metody normy MeSH
- hematologické komplikace těhotenství diagnóza farmakoterapie prevence a kontrola MeSH
- inhibitory agregace trombocytů terapeutické užití MeSH
- lidé MeSH
- patologické stavy, příznaky a symptomy MeSH
- primární prevence MeSH
- sekundární prevence MeSH
- trombóza etiologie farmakoterapie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Our previous studies have shown that the combined administration of drugs elevating extracellular adenosine, i.e. dipyridamole (DP) and adenosine monophosphate (AMP), enhances murine hematopoiesis and potentiates the action of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF). In this study, colony-stimulating activity (CSA) of blood serum of mice treated with DP+AMP, G-CSF or all these drugs in combination, i.e. the ability of the sera to stimulate the growth of GM-CFC colonies, was assayed in vitro. Furthermore, the concentration of GM-CSF and IL-6 in the sera was determined. Administration of DP+AMP was found to enhance significantly serum CSA at all time intervals of serum sampling including 24 h after the last injection of the tested drugs. Additive effects of DP+AMP and G-CSF on serum CSA were noted at early intervals after administration of the drugs. Furthermore, IL-6 levels were significantly elevated in the sera of mice which were administered DP+AMP either alone or in combination with G-CSF. Our results show that the effects of DP+AMP are indirect, mediated through the induction of some cytokine(s) and/or growth factor(s) and that extracellular adenosine can act in cooperation with G-CSF. These findings contribute to the further elucidation of the role of adenosine in hematopoiesis.
- MeSH
- adenosin analogy a deriváty imunologie MeSH
- adenosinmonofosfát aplikace a dávkování krev MeSH
- dipyridamol aplikace a dávkování krev MeSH
- ELISA normy využití MeSH
- extracelulární prostor genetika imunologie účinky léků MeSH
- faktor stimulující kolonie granulocytů izolace a purifikace účinky léků MeSH
- financování organizované využití MeSH
- myši inbrední CBA krev MeSH
- myši inbrední ICR krev MeSH
Význam přehledu Přehled shrnuje aktuální stav týkající se standardizace alergenů i pokrok dosažený v této oblasti v poslední době a přináší diskusi o jejím předpokládaném budoucím vývoji. Aktuální výsledky Výzkum standardizace alergenů se v poslední době soustředil zejména na sendvičové enzymatické imunosorpční analýzy nebo kompetitivní testy pro kvantifikaci jednotlivých alergenů v extraktech. Pro kvantifikaci hlavních i vedlejších alergenů ze zdrojů, jakými jsou pyly stromů i plevele z oblasti Středomoří, travní pyly a potraviny, jako arašídy a jablka, byly vyvinuty nové analytické metody. V několika případech bylo dosaženo dobré korelace s alergenní aktivitou, hodnocenou inhibičními testy. Kromě toho byla v jedné studii zkoumána možnost použití analytických metod založených na uvolňování buněčných mediátorů při standardizaci alergenů. Souhrn S cílem získat více hlavních i vedlejších alergenů z různých zdrojů bylo vyvinuto několik nových testů, které by bylo možné použít v programech standardizace alergenů, jako je například projekt CREATE. Očekává se, že v blízké budoucnosti budou k dispozici analytické metody pro stanovení většiny klinicky významných hlavních vzdušných alergenů. Standardizované a ověřené analytické metody založené na uvolňování buněčných mediátorů mohou sloužit jako doplňkové nástroje pro hodnocení biologické účinnosti referenčních alergenů a pro zjišťování korelací mezi koncentracemi alergenů a biologickou účinností.
