Transplantace ledviny od žijících dárců představují nejlepší metodu léčby nezvratného selhání ledvin. Výskyt akutních rejekcí je v tomto programu nyní vyšší než u kadaverosních transplantací, především v důsledku rozšíření geneticky nepříbuzných transplantací. Riziko vzniku rejekce se pomocí běžně používaných metod (stanovení panel reaktivních protilátek a crossmatch) dá odhadnout jen velmi těžko. Cílem této studie je posoudit aloreaktivitu příjemce pomocí panelu laboratorních testů a odhadnout riziko vzniku T buňkami a protilátkami zprostředkované rejekce. Předmětem výzkumu je detekce předtransplantačních a potransplantačních anti HLA protilátek spolu s určením dárcovsky specifické T a B lymfocytární aloreaktivity (ELISPOT), vyšetření periferních populací T a B lymfocytů a jejich specifických periferních transkriptů. Získaná data budou analyzována ve vztahu k potransplantačnímu průběhu a fenotypu rejekce.; Living donor kidney transplantation represents the best therapy of end stage renal disease. Recently, the acute rejection incidence has been observed to be higher than in deceased donor transplantation, mainly because of increasing number of genetically unrelated procedures. Prediction of acute rejection with recently available techniques often fails. The aim of this project is to analyze recipient alloreactivty using multilevel laboratory platforms to better predict risks of acute rejection, both T cell- and antibody mediated. In this project pre and posttransplant analyzes will be performed to detect anti HLA antibodies, T and B cell donor specific alloreactivity, specific populations of T and B cells along with their peripheral transcripts. Data will be analyzed in relation to postransplant outcome and distinct rejection phenotype.

• MeSH
• B-Lymphocytes MeSH
• Enzyme-Linked Immunospot Assay MeSH
• Monitoring, Immunologic MeSH
• Antibodies adverse effects   MeSH
• Graft Rejection diagnosis   MeSH
• T-Lymphocytes MeSH
• Kidney Transplantation adverse effects   MeSH
• Living Donors MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• transplantologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Významnou část neuroinfekcí tvoří lymeská borelióza. Její laboratorní diagnostika není opti-málně vyřešena. Proto byla navržena studie zabývající se jejím vyšetřováním. Je zamýšleno korelovat serologické testy typu EIA a WB s různými antigeny mezi sebou a dále s metodami přímé detekce borelií – PCR a elektronovou mikroskopií. Budou porovnávány různé varianty PCR technik (nested a real-time). Anaplazmóza a bartonelóza jsou další infekce, které jsou méně časté, ale prokazatelně se uplatňují na spektru lidských onemocnění v našich podmín-kách. Studie je proto také cílena na ověření laboratorní diagnostiky těchto dvou chorob. Bu-dou porovnávány serologické metody a průkaz specifické DNA. Výsledky všech laborator-ních vyšetření budou korelovány s klinickým průběhem onemocnění a dalšími rutinními vy-šetřeními v prospektivní studii. Lze předpokládat, že bude možno aktualizovat přístupy k diagnostice lymeské boreliózy a dalších uvedených infekcí.; Lyme borreliosis is important zoonosis in Czech Republic. Its’ diagnostic is not optimal. Due to this fact the study was suggested with the aim to solve this problem. It is intended to corre-late EIA and WB tests for the detection of antibodies with different antigens among them-selves and with methods of the direct proof of pathogen – PCR and electron microscopy. Dif-ferent PCR techniques will be tested (nested and real-time). Anaplasmosis and bartonellosis are less known infections that are infrequent but they were proven in our conditions. There-fore the study is targeted on verifying of the laboratory diagnostic of these pathogens also. The serological methods will be compared with the proof of the specific DNA. Results of all laboratory techniques will be correlated with clinical symptoms and with the other clinical data in prospective study. It can be presumed that guidelines for the diagnostic of Lyme bor-reliosis and the other above mentioned infections can be updated.

• MeSH
• Chemokine CXCL13 MeSH
• Ehrlichiosis diagnosis   MeSH
• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay MeSH
• Fluorescent Antibody Technique MeSH
• Bartonella Infections MeSH
• Central Nervous System Infections diagnosis   MeSH
• Lyme Neuroborreliosis diagnosis   MeSH
• Tick-Borne Diseases MeSH
• Polymerase Chain Reaction MeSH
• Prospective Studies MeSH
• ROC Curve MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• neurologie
• infekční lékařství
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Během posledních let byla objevena řada nových malých DNA virů (lidské polyomaviry HPyV6, HPyV7, HPyV9, lidský bocavirus HBoV1, anelloviry TTMV a TTMDV). Přestože tyto viry nepatří do jedné skupiny, všechny se pravděpodobně vyskytují běžně v lidské populaci, způsobují celoživotní perzistentní infekci organismu. K reaktivaci s možnými patologickými následky pak může docházet především u imunokompromitovaných jedinců. V tomto projektu se zaměříme na detekci a sledování perzistence nově objevených DNA virů u zdravých a imunokompromitovaných jedinců. Cílem studie je zjistit virovou nálož, variabilitu genomů a přítomnost virově specifických protilátek. U imunokompromitivaných jedinců budeme analyzovat klinické projevy, které mohou souviset s virovou infekcí.; Recently, novel small DNA viruses (Human Polyomavirus HPyV6, HPyV7, HPyV9, Human Bocavirus HBoV1, Anelloviruses TTMV and TTMDV) have been discovered. Although these viruses belong to different family, they are widespread in population and they all presumably cause common lifelong infections. There is an increasing consideration that novel small DNA viruses play the key role as emerging opportunistic pathogens after reactivation in immunocompromised patients. The aim of the project is to gain knowledge of prevalence and biology of the newly discovered DNA viruses in healthy population and in immunocompromised individuals. The proposed study includes detection of viral DNA, determination of viral load, searching the persistence of the viruses and the presence of virus specific antibodies. In immunocompromised patient we will evaluate the possible clinical manifestation of viral infections.

• MeSH
• Anelloviridae MeSH
• DNA, Viral MeSH
• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay MeSH
• Real-Time Polymerase Chain Reaction MeSH
• Human bocavirus MeSH
• Polyomavirus Infections MeSH
• Antibodies, Viral MeSH
• Hematopoietic Stem Cell Transplantation MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• hematologie a transfuzní lékařství
• virologie
• biologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Parodontitida je chron. zánětlivé postižení parodontu iniciované G- anaerobními bakteriemi dentálního plaku s cca 3-krát vyšším rizikem u diabetiků ve srovnání s nediabetickou populací, pravděpodobně v důsledku rozdílné imuno-/zánětlivé reaktivity na bakteriální osídlení parodontu při hyperglykémii. Navrhovaný projekt řeší v ČR dosud nesystematicky zmapovanou problematiku prevalence, typu a závažnosti parodontálního postižení u diabetiků a jeho vztahu k zákl. onemocnění. Hodláme vyšetřit parodontální status (klin. indexy + RTG), mikrobiální kolonizaci parodontu (DNA diagnostický kit pro 7 obvyklých parodont. patogenů), potenciální genetické rizikové faktory (30–45 variant) a koncentrace 7 vybraných solubilních markerů zánětu a kostní resorpce (ELISA). Studie zahrnuje analýzu„kontroly x případy“ (tj. ne- vs. diabetici, cca 400 osob) a prospektivní sledování diabetické kohorty s cílem predikovat event. progresi parodontitidy některými ze stanovovaných markerů nebo jejich příp. interakčního efektu.; Periodontitis is a chron. inflammatory disease of periodontal tissues initiated by dental plaque G- anaerobic bacteria with ~3-times higher risk in diabetics compared to non-diabetics, most likely due to a different immune reactivity to periodontal bacterial colonisation in hyperglycemia. Proposed project targets so far unsystematically mapped prevalence, type and severity of periodontal complications in diabetics in Czech population and its relationship with diabetes compensation. We will analyse periodontal status (clinical indexes + X-ray), microbial colonisation (DNA diagnostic kit for 7 common periopathogens), potential genetic risk factors (30–45 variants) and concentration of 7 soluble markers of inflammation and bone resorption (ELISA). Study will consist of case-control analysis (i.e. non- vs. diabetics, ~400 subjects) and prospective follow-up of diabetic cohort with the aim to predict event. progression of periodontitis by some of the markers ascertained or by their interactive effects.

• MeSH
• Biomarkers MeSH
• Diabetes Mellitus, Type 1 complications   MeSH
• Diabetes Mellitus, Type 2 complications   MeSH
• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay MeSH
• Periodontal Diseases diagnosis   genetics   microbiology   MeSH
• Periodontitis prevention & control   MeSH
• Dental Plaque pathology   MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• diabetologie
• zubní lékařství
• otorinolaryngologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Projekt si klade za cíl: 1/ Ověřit a dále studovat efekty HA na replikaci a reaktivaci HIV-1 pozorované in vitro na tkáňových kulturách v primárních periferních lymfocytech (PBMC): a/ ověřit inhibiční efekt HA na akutní infekci PBMC zdravých dárců virem HIV-1. b/ studovat efekt HA na reaktivaci latentní infekce HIV-1 v PBMC HIV+ pacientů. 2/ Charakterizovat redoxní stav a metabolismus hemu u HIV+ pacientů, zejména hladiny GSH, nitrátů a hBVR, aktivitu HO-1 a známky anémie. Korelovat tyto charakteristiky s výší viremie ev. s progresí HIV/AIDS. 3/ Na podkladě získaných výsledků vypracovat žádost pro SÚKL o povolení aplikace Normosangu omezenému počtu vybraných HIV+ pacientů. Budou použity tyto metody: průtoková cytometrie - intracelulární hladiny p24 Ag, HO-1, produkce volných radikálů a GSH; ELISA - hladiny p24 Ag v supernatantu; western blot analýza jednotlivých proteinů; PCR a real-time RT-PCR - reversní transkripce a reaktivace HIV-1; spektrofoto(fluori)metrie - HO-1 aktivita, hladiny GSH, nitrátů.; Goals of the project: 1/ To verify and further study effects of HA on HIV-1 replication and reactivation observed in cell lines also in primary PBMC's: a/ To verify HA effect on acute infection of PBMC's of healthy donors with HIV-1 b/ To study HA effect on reactivation of HIV-1 latent infection in PBMC's of HIV+ patients 2/ To characterize redox state and heme metabolism in HIV+ patients, namely GSH, nitrate and hBVR levels , HO-1 activity and anemia. To correlate these characteristics with virus load (HIV RNA) and with progression of HIV/AIDS. 3/ Based on the results, to submit application to the State Institute of Drug Control for administration of Normosang to selected HIV+ patients. Methods: flow cytometry - intracellular levels of p24 Ag, HO-1, production of free radicals, GSH; ELISA - p24 Ag levels in supernatnats; western blotting of individual proteins; PCR and real-time RT-PCR - reverse transcription and reactivation of HIV-1; spectrophoto(fluori)metry - HO-1 activity, GSH and nitrate levels

• MeSH
• Acquired Immunodeficiency Syndrome MeSH
• Arginine MeSH
• Biliverdine MeSH
• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay MeSH
• Heme MeSH
• Heme Oxygenase-1 MeSH
• HIV Infections MeSH
• HIV-1 MeSH
• Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction MeSH
• Flow Cytometry MeSH
• Reverse Transcription MeSH
• Spectrophotometry MeSH
• Blotting, Western MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• biochemie
• infekční lékařství
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Projekt řeší molekulární biologii ovariálních karcinomů ve vztahu k odpovědi na léčbu. 1)Zhodnocení genových polymorfismů ABCB1,ABCC1,GST, proteinů Pgp, MRP1-kódovaných těmito geny, chemorezistence/chemosensitivity in vitro (MTT test) u pacientek diagnostikovaných 2013-2015 a retrospektivně u pacientek s již stanoveným Pgp, MRP1, MTT testem 2006-2009 ve vztahu k PFS a OS. 2) Stanovení genových polymorfismů interleukinu 8, genové exprese endoglinu,FGF,angiopoetinu a proangiogenních faktorů(VEGF,TGF?,TGFß,bFGF) v závislosti na odpovědi a typu primární léčby u pacientek diagnostikovaných 2013-2015 a retrospektivně z ovariální nádorové tkáně zamražené 2006-2009. 3) Zhodnocení kardiotoxicity paklitaxel+karboplatina versus paklitaxel+karboplatina+bevacizumab (EKG,TK,ECHOsrdce,markery kardiotoxicity NTproBNP,cTnT,cTnI,CKMB,MYO,hFABP,GPBB) a její vztah k chemorezistenci a genovým polymorfismům. Projekt umožní molekulárně biologickou predikci odpovědi na léčbu u pacientek s karcinomem ovaria.; This project is intent on assesment of molecular biology markers useful in prediction of therapeutic response in ovarian cancer patients by:1)Determination of ABCB1, ABCC1, GST polymorphisms, resistance proteins Pgp, MRP1, in vitro drug resistance/sensitivity and evaluation of their correlation with medical outcome (PFS, OS, side effects). 2) Assay of polymorphisms of the Interleukin-8 gene, endoglin, FGF, angiopoetin gene expression, pro-angiogenesis markers (VEGF,TGF?,TGFß,bFGF) and their correlation with kind of primary farmacotherapy and medical outcome (PFS, OS).3) Analysis of cardiotoxicity of standard primary chemotherapy (Paclitaxel + Carboplatin) versus primary therapy (Paclitaxel + Carboplatin + Bevacizumab) by ECG, blood pressure, ECHO, markers of cardiotoxicity (NT-proBNP,cTnT,cTnI,CKMB,MYO,h-FABP,GPBB) and their correlation with genetic polymophisms and drug resistance. This project support molecular biology prediction of the therapeutic response in ovarian cancer patients.

• MeSH
• ATP-Binding Cassette Transporters analysis   MeSH
• Survival Analysis MeSH
• Bevacizumab adverse effects   MeSH
• Drug Resistance, Neoplasm MeSH
• Cytotoxicity Tests, Immunologic MeSH
• Echocardiography MeSH
• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay methods   utilization   MeSH
• Fibroblast Growth Factor 2 analysis   MeSH
• Glutathione S-Transferase pi analysis   MeSH
• Calgranulin B analysis   MeSH
• Carboplatin adverse effects   MeSH
• Carcinoma drug therapy   MeSH
• Cardiotoxicity MeSH
• Molecular Biology MeSH
• Biomarkers, Tumor MeSH
• Ovarian Neoplasms drug therapy   MeSH
• Drug-Related Side Effects and Adverse Reactions MeSH
• ATP Binding Cassette Transporter, Subfamily B analysis   MeSH
• Paclitaxel adverse effects   MeSH
• Polymerase Chain Reaction methods   utilization   MeSH
• Polymorphism, Genetic MeSH
• Multidrug Resistance-Associated Proteins analysis   MeSH
• Antineoplastic Combined Chemotherapy Protocols MeSH
• Receptors, Vascular Endothelial Growth Factor analysis   MeSH
• Transforming Growth Factor alpha analysis   MeSH
• Transforming Growth Factor beta analysis   MeSH
• Treatment Outcome MeSH
• Women MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• gynekologie a porodnictví
• onkologie
• biologie
• genetika, lékařská genetika
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Hodláme studovat klinický význam Interferon-gama produkujících buněk určených metodikou ELISpot s cílem hodnotit riziko vývoje celulární a protilátkami-zprostředkované rejekce po transplantaci a zlepšit tak přežití a dobrou funkci transplantovaných orgánů.; We are aiming to study the clinical significance of Interferon-gamma producing cells as detected by the ELISpot method with the goal to assess the risk of development of cellular and antibody-mediated transplant rejection and consequently to improve the optimal function and survival of the kidney allograft.

• MeSH
• Biostatistics MeSH
• Enzyme-Linked Immunospot Assay MeSH
• HLA Antigens MeSH
• Immunosuppression Therapy MeSH
• Interferon-gamma MeSH
• Graft Rejection MeSH
• Kidney Transplantation MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• alergologie a imunologie
• transplantologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

S100A4 je ve zvýšených hladinách přítomen v plazmě pacientů s chronickým průběhem RA a koreluje s aktivitou onemocnění. Hladiny S100A4 budou měřeny metodou ELISA u pacientů s časnou a etablovanou RA a jeho hladiny v plazmě budou korelovány s laboratorními a klinickými ukazateli onemocnění, především s rentgenovou progresí. Vzhledem k tomu, že se S100A4 může podílet na regulaci některých patofyziologických mechanismů souvisejících s tkáňovým poškozením, bude významná část našeho projektu zaměřena na studium vlivu S100A4 na chondrocyty a osteoblasty, a intracelulární roli S100A4 v monocytech. Pro „in vitro“ experimenty bude využita metoda genových arrays a proteinové detekce. Vliv inhibice S100A4 na zánět synoviální membrány a destrukci kloubu bude studován na experimentálním myším modelu artritidy.; S100A4 protein is increased in the blood circulation of patients with established RA and correlates with the disease activity. The protein will be analysed by ELISA in patients with early and established disease and its plasma levels will be correlated with laboratory markers and clinical characteristics of the disease, particularly with radiographic progression. S100A4 can regulate some pathophysiological functions involved in tissue destruction; therefore we will study the effect of the protein on chondrocytes and osteoblasts, and intracellular function of S100A4 using gene array and protein determination in “in vitro” experiments. The effect of S100A4 blockade on synovial inflammation and joint destruction will be studied in an experimental model of arthritis.

• MeSH
• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay MeSH
• Gene Expression MeSH
• RNA, Small Interfering MeSH
• Mice, Transgenic MeSH
• Arthritis, Rheumatoid MeSH
• S100 Calcium-Binding Protein A4 MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• molekulární biologie, molekulární medicína
• revmatologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Maligní gliomy představují nádorová onemocnění se špatnou prognózou. Předchozí práce navrhovatele prokázala závislost dipeptidylpeptidase (DPP)-IV podobné aktivity na stupni malignity astrocytárních tumorů. Tato aktivita je společným atributem skupiny „DPP -IV aktivitou a/nebo strukturou homologních“ (DASH) molekul. Mezi tyto molekuly patří mj. fibroblastový aktivační protein (FAP), jehož patogenetický význam je předpokládán u řady humánních malignit. K určení exprese, tkáňové lokalizace a molekulových forem FAP přítomných v lidských astrocytárních tumorech bude použit bioptický materiál odebraný od pacientů podstupujících terapeutickou resekci nádoru, data budou korelována s klinickými a histopatologickými parametry. Ke studiu patogenetických mechanismů účasti FAP a jeho enzymové aktivity na gliomagenezi bude využito ortotopického xenotransplantačního modelu a gliomových linií transfekovaných enzymově aktivní a mutovanou, enzymově neaktivní formou FAP.; Malignant gliomas represent tumors with dismal prognosis. Previous work of the applicant demonstrated a grade dependent increase of dipeptidyl peptidase (DPP)-IV enzymatic activity in human astrocytic tumors. This enzymatic activity is a common attribute of several multifunctional molecules belonging to the “DPP-IV activity and/or structure homologues” (DASH). These include among others fibroblast activation protein (FAP), whose pathogenetic role is presumed in several human malignancies. In order to determine the expression, localization and molecular forms present in the human astrocytic tumors, bioptic material obtained from patients undergoing therapeutic tumor resection will be used, and the data will be correlated with the clinical and histopathological parameters. The study on the pathogenetic role of FAP and its enzymatic activity will utilize an orthotopic xenotransplantation model and glioma cell lines transfected with wild type and mutated, enzymatically inactive FAP.

• MeSH
• Survival Analysis MeSH
• Astrocytoma physiopathology   MeSH
• Molecular Targeted Therapy MeSH
• Dipeptidyl Peptidase 4 MeSH
• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay MeSH
• Enzyme Induction MeSH
• Cancer-Associated Fibroblasts MeSH
• Glioblastoma physiopathology   MeSH
• RNA, Messenger MeSH
• Cell Proliferation MeSH
• Serine Proteases MeSH
• Blotting, Western MeSH

• Conspectus
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NML Fields
• molekulární biologie, molekulární medicína
• onkologie
• neurologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Základním cílem navrhovaného projektu je ověření analytického potenciálu vybraných biomarkerů periferní krve pro diagnostiku hypertrofické kardiomypatie. V naší předchozí studii jsme s využitím kvantitativní proteomiky identifikovali 40 plazmatických proteinů se signifikantně odlišným zastoupením pacientů s hypertrofickou kardiomyopatií v porovnání s kontrolní skupinou zdravé populace (tzv. kandidátní proteiny). Náplní navrhovaného projektu je verifikace a validace koncentrací těchto proteinů v periferní krvi pacientů s hypertroficku kardiomyopatií a porovnání s hodnotami u zdravé populace a eventuelně u dalších onemocnění, která jsou také provázena strukturálními změnami myokardu (dilatační kardiomyopatie, ischemická choroba srdeční, arteriální hypertenze a aortální stenóza). V rámci projektu budou využívány komerčně dostupné soupravy založené na detekci a kvantifikaci pomocí protilátek a na protilátkách nezávislá metoda proteomické SRM (Selected Reaction Monitoring).; The basic objective of the proposed project is to verify the analytical potential of selected biomarkers of peripheral blood for diagnostics of hypertrophic cardiomyopathy. In our previous study, we used quantitative proteomics to identify 40 proteins in plasma. The plasma concentrations of these proteins were significantly different compare to control group. The scope of the proposed project is the verification and validation of the concentration of these proteins in peripheral blood of patients with hypertrophic cardiomyopathy; the comparison of the results with the healthy population and other diseases that are accompanied by structural changes in the myocardium (dilated cardiomyopathy, ischemic heart disease, arterial hypertension and aortic stenosis). The project will use commercially available kits based on the detection and quantification using antibodies and antibody-independent method for proteomic SRM (Selected Reaction Monitoring).

• MeSH
• Principal Component Analysis MeSH
• Biomarkers MeSH
• Enzyme-Linked Immunosorbent Assay MeSH
• Mass Spectrometry MeSH
• Cardiomyopathy, Hypertrophic diagnosis   genetics   MeSH
• Proteomics MeSH
• Reproducibility of Results MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• kardiologie
• genetika, lékařská genetika
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR