Cíl studie: Je známo, že zvýšený počet NK buněk bývá spojován s autoimunitními poruchami a že hraje svoji úlohu i v neplodnosti. Cílem našeho výzkumu bylo sledování denzity NK buněk CD56+ a CD16+ v ovulačním cervikálním sekretu a v endometriu u žen se sníženou plodností i v souvislosti s aktuálním stavem protilátek proti fosfolipidům, spermiím i proti HHV-6. Typ studie: Původní práce. Název a sídlo pracoviště: Poradna pro imunologii reprodukce, Genetika - Plzeň. Metodika: Sedmdesát dva náhodně vybraných žen ve věku 20 - 39 (průměrný věk 32,3) let jsme rozdělili na padesát sedm pacientek s opakovanými doposud nevysvětlitelnými potraty a patnáct zdravých fertilních žen. Sledovali jsme hormonální stav, včetně ovulace, humorální autoimunitní odpovědi ve screeningu reprodukční imunologie, trombofilní stavy, karyotypizaci, hysteroskopické nálezy a imunohistologicky i endometrium. V období odběrů ovulačních cervikálních sekretů (OCM) a endometria pacientky neměly žádné klinické ani laboratorní nálezy vaginitidy. U jedné z pacientek byl diagnostikován antifosfolipidový syndrom, jedna žena má diabetes mellitus I. Uterinní NK buňky CD56+ a CD16+ a NK buňky v OCM jsme idetifikovali imunochemicky, antifosfolipidové protilátky klasickou ELISA metodou. Použili jsme také nepřímý MAR-test ke sledování lokálních protilátek proti spermiím, dále nepřímou imunofluorescenci k detekci serových a OCM IgM, IgG protilátek proti HHV-6 v době ovulace. Výsledky: Vysokou denzitu NK buněk CD56+ a CD16 v OCM a endometriu jsme nalezli pouze u dvou žen s opakovanými potraty. NK buňky v OCM v jiných vzorcích pacientek nenalezli. U dvaceti tří (40 %) pacientek jsme zjistili prevalenci vysoké denzity NK buněk CD56+, NK CD16+ u jedenácti (19 %), pozitivitu u obou společně, tedy NK buněk CD 56+ a D 16+ u osmi (14 %). Aktuální sérové hladiny a v OCM v IgG proti HHV-6 byly u všech vyšetřovaných žen nezvýšené. U žádné ženy nebyly přítomny cervikální spermaglutinační protilátky. Závěr: Srovnávali jsme denzitu NK buněk CD56+ a CD16+ v ovulačním sekretu a v sekrečním endometriu u nfertilních pacientek. Naše výsledky prokázali slizniční buněčnou aktivitu v cervikální oblasti v období ovulace jen u dvou infertilních žen. Vyloučili jsme abnormální počet NK buněk z důvodu celkové nebo lokální infekce. Otázka ale zůstává otevřená pro další plánovaný výzkum jsou cervikální NK buňky fixované, nebo migrují z endometria do OCM?

Objective: An increased number of NK cells is associated with autoimmune disorder and is known to play a role in infertility. The aim of our research was to monitor the density of NK cells CD56+ and CD16+ in ovulatory cervical mucus (OCM) and in endometrium in infertile women as well as in connection with the actual status of antibodies against phospholipids, sperm and HHV-6 antibodies. Type of study: Original aticle. Setting: Genetika - Plzeň. Methods: Seventy-two randomly selected women aged 20 -39 (mean age: 32.3) years old resulted in fifty-seven patients with repeated unexplained miscarriages, and fifteen fertile healthy women. The hormonal status was studied including ovulation, the humoral autoimmune responses to eight phospholipids, trombophilia, karyotyping, hysteroscopy, and endometrium immunohistology. Patients were without any clinical and laboratory symptoms of vaginitis at the time of OCM sampling and endometrium study. In one patient antiphospholipid syndrome was present, and in one woman diabetes mellitus was identified. Uterine NK cells CD56+ , CD16+ and NK cells in OCM were identified by immunocytochemistry, antiphospholipid antiboides by ELISA. We used indirect MAR-test for study of local spermagglutinating antibodies in OCM. Indirect immunofluorescent method was used for detection of serum and OCM IgM, IgG antibodies against HHV-6 levels at the time of ovulation. Results: We found both high density of NK cells CD56+ and CD16+ in OCM and in endometrium in only two infertile women with repeated abortions. NK cells in OCM were missing in other samples of patients. The prevalence of high density of NK cells CD56+ in the endometrium was seen in twenty three (40%), NK cells CD16+ in eleven (19%), NK cells 56+ and NK cells 16+ together in eight (14%). Levels of serum and OCM IgG against HHV-6 in all examined patients were not elevated, no cervical sperm antibodies were found. Conclusion: We compared density of NK cells CD56+ and CD16+ in OCM and secretory endometrium in all infertile patients. Our results show that cell mucosal activity in the cervical area at the time of ovulation in two infertile patients was evident. We excluded the abnormal number of NK cells owing to local and general viral infection (HHV-6). But our question still remains are cervical NK cells fixed or still migrating from endometrium into OCM? New research is planned.

Gynekologicko porodnická klinika LF UK a FN Plzeň

Gynekologicko porodnické oddělení Nemocnice Privamed Plzeň

Oddělení klinické biochemie a imunologie Nemocnice Privamed Plzeň

Oddělení mikrobiologie a virologie FN Plzeň

Reprodukční imunologie Genetika Plzeň

Šiklův anatomicko patologický ústav LF UK Plzeň

NK cells not only in endometrium but also in ovulatory cervical mucus in patients with decreased fertility